家蝇几丁质酶MDCht2基因的序列分析、克隆与表达模式分析

论文摘要

目的从家蝇的基因组库中筛选几丁质酶2(MDCht2)基因,进行cDNA克隆及分子特性分析,对其时空表达模式进行初步探索。方法从家蝇基因组数据库中筛选MDCht2基因,以该基因的cDNA为模板进行PCR扩增,采用生物信息学相关软件对MDCht2基因及其编码蛋白质的基本理化性质、信号肽、蛋白质结构等进行分析,预测蛋白质功能。取家蝇不同生活史时期(卵,1龄幼虫,2龄幼虫,3龄幼虫,蛹,雌雄成虫)及3龄幼虫不同组织(体壁,气管,马氏管,唾液腺,脂肪体,肠道)标本,采用实时荧光定量PCR检测MDCht2基因表达情况。结果 MDCht2基因cDNA全长1 932 bp,ORF框全长1 530 bp,编码509个氨基酸,理论相对分子质量为57.8×10~3,pI 5.67,属于亲水性的酸性蛋白,有信号肽,功能结构域位于第37～385位氨基酸间,无几丁质结合域。二级结构分析显示存在无规则卷曲(Cc),α螺旋(Hh),β折叠(Ee)3种类型。PCR扩增得到MDCht2基因长为1 530 bp的序列片段。实时荧光定量PCR检测家蝇MDCht2基因在蛹期的表达量较卵期上调6.477 01倍(P<0.01),3龄幼虫表达量上调2.655 25倍(P<0.01),1龄幼虫的表达量上调2.475 01倍(P<0.05),表达水平排列顺序为蛹>3龄幼虫>1龄幼虫>2龄幼虫>卵>雄成虫>雌成虫。以体壁为参照,MDCht2基因在家蝇气管中的表达量较高,气管中的表达量较体壁上调1.816 51倍(P<0.01),表达水平为气管>体壁>唾液腺>脂肪体>肠道>马氏管。结论成功克隆了家蝇的MDCht2基因并初步探索了其时空表达模式,即MDCht2基因在蛹期及气管组织高表达,为MDCht2的功能研究奠定了基础。

论文目录

• 材料与方法
•   1 材料
•     1.1 家蝇
•     1.2 主要试剂
•   2 方法
•     2.1 MDCht2的生物信息学分析
•     2.2 MDCht2基因引物设计
•     2.3 家蝇3龄幼虫RNA的提取及逆转录
•     2.4 MDCht2基因的扩增
•     2.5 实时荧光定量PCR检测家蝇MDCht2基因表达模式
• 结 果
•   1 家蝇MDCht2基因的生物信息学分析
•   2 家蝇MDCht2基因的扩增
•   3 MDCht2 基因的表达模式分析
•     3.1 家蝇不同发育时期表达情况
•     3.2 家蝇不同组织表达量
• 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 苏佩佩,赵欣宇,李妍,马慧玲,杨隆兵,刘鉴,付萍,国果

关键词: 家蝇,几丁质酶,基因克隆,生物信息学分析,时空表达

来源: 中国病原生物学杂志 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室,贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室

基金: 国家自然科学基金项目(No.81760647,81560337),贵阳市科技局基金项目:筑科合同[2017] 5-30

分类号: R384.2

DOI: 10.13350/j.cjpb.190613

页码: 679-685

总页数: 7

文件大小: 2442K

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