siRNA沉默STAT3基因对TGF-β1诱导小鼠胰腺星状细胞活化的影响

论文摘要

目的通过siRNA沉默小鼠胰腺星状细胞中STAT3基因,探讨STAT3信号转导通路在慢性胰腺炎胰腺纤维化中的作用。方法根据GeneBank中STAT3全长cDNA序列,选取特异性序列为干扰作用的靶点,构建STAT3siRNA表达载体,脂质体介导转染PSC,ELISA法检测PSC产生的趋化因子,MTT法检测胰腺星状细胞增殖,细胞爬片免疫组化染色检测α-SMA阳性细胞,Western blot和RT-PCR检测胰腺星状细胞STAT3蛋白及mRNA表达水平,在确定胰腺星状细胞内STAT3基因成功沉默的基础上,给予TGF-β1刺激PSC。结果和对照组相比,ELISA法,MTT法和细胞爬片免疫组化显示各时间点,诱导组、空载组和转染组A值,α-SMA, IL-6和MCP-1表达量均有所升高（P<0.01）,转染组A值,α-SMA, IL-6和MCP-1表达量明显低于诱导组和空载组（P<0.01）,诱导组和空载组A值,α-SMA、IL-6和MCP-1表达比较差异无统计学意义（P>0.05）。PCR和Western blot结果显示,和对照组相比,诱导组、空载组和转染组α-SMA和Smad2表达明显升高（P<0.01）,p-Smad2和PPAR-γ的表达明显降低（P<0.01）,转染组α-SMA和Smad2的表达明显低于导组和空载组（P<0.01）,p-Smad2和PPAR-γ表达明显高于诱导组和空载组（P<0.01）。转染组STAT3和p-STAT3表达明显低于对照组、诱导组和空载组（P<0.01）。结论 siRNA通过调控STAT3信号通路介导下游靶基因的表达,参与抑制胰腺星状细胞活化、进而对抗胰腺纤维化。这一结果为慢性胰腺炎的治疗提供了新的治疗靶点。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 实验动物
•   1.2 试剂
•   1.3 方法
•     1.3.1 构建STAT3沉默siRNA质粒:
•     1.3.2 小鼠胰腺星状细胞的分离与培养:
•     1.3.3 沉默STAT3基因:
•     1.3.4 实验分组与处理:
•     1.3.5 ELISA法检测IL-6和MCP-1表达:
•     1.3.6 MTT法检测胰腺星状细胞增殖:
•     1.3.7 细胞爬片免疫组化染色检测α-SMA阳性细胞:
•     1.3.8 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定胰腺星状细胞α-SMA、PPAR-γ、Smad2和STAT3 mRNA:
•     1.3.9 蛋白免疫印迹（Western blot）法测定胰腺星状细胞α-SMA、PPAR-γ、p-Smad2、Smad2、STAT3和p-STAT3蛋白:
•   1.4 统计学方法
• 2 结果
•   2.1 转染效果的检测
•   2.2 各组胰腺星状细胞活化情况
•   2.3 各组细胞液IL-6和MCP-1表达
•   2.4 各组胰腺星状细胞A值
•   2.5 各组胰腺星状细胞α-SMA阳性结果
•   2.6 各组胰腺星状细胞α-SMA、PPAR-γ、Smad2和STAT3 mRNA
•   2.7 各组α-SMA、PPAR-γ、Smad2和STAT3蛋白表达
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈瑜,吴世卫,马晓军

关键词: 慢性胰腺炎,胰腺星状细胞,信号通路,细胞活力

来源: 毒理学杂志 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 消化系统疾病

单位: 陕西中医药大学基础医学院

基金: 陕西省教育厅科学研究计划项目(11JK0717)

分类号: R576

DOI: 10.16421/j.cnki.1002-3127.2019.06.004

页码: 454-460

总页数: 7

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