人凝血因子7a核酸适配体的筛选与鉴定

论文摘要

人凝血因子7a (FVIIa)是外源性凝血途径的核心因子,检测参与凝血过程的FVIIa及针对FVIIa开发安全有效和经济的凝血剂和抗凝血剂是具有重要的意义。本研究基于指数富集配体系统进化技术(Systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX),采用酸纤维素膜法,通过11轮筛选成功分离出FVIIa的DNA适配体,并模拟了其二级结构。此适配体与FVIIa蛋白结合的表观解离常数为102 nmol/L。同时,基于所获得的高亲和力适配体,建立了基于适配体的荧光检测方法。本方法简单高效,对FVIIa蛋白的定量检测范围达到30～80 nmol/L,为人凝血因子7a的检测提供了一条新途径。非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和适配体的荧光检测方法结果表明,此适配体具有良好的选择性。

论文目录

• 1 引 言
• 2 实验部分
•   2.1 仪器与试剂
•   2.2 实验方法
•     2.2.1 溶液配制
•     2.2.2 筛选过程
•     2.2.3 测序与序列分析
•     2.2.4 荧光测量
•     2.2.5 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
•     2.2.6 统计学分析
• 3 结果与讨论
•   3.1 筛选方法
•   3.2 测序结果
•   3.3 亲和力测定
•   3.4 FVIIa的定量检测
•   3.5 方法的特异性
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 罗钰,王腾飞,李文静,王金娥,裴仁军

关键词: 凝血因子,适配体,指数富集配体系统进化技术,筛选,荧光检测

来源: 分析化学 2019年07期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,医药卫生科技

专业: 化学,药学

单位: 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所,中国科学技术大学纳米科学技术学院

基金: 诺和诺德-中国科学院合作研究基金项目(No.NNCAS-2014-8),国家自然科学基金项目(No.21775160),江苏省科技项目(No.BE2016680)资助~~

分类号: R914;O657.3

DOI: 10.19756/j.issn.0253-3820.191204

页码: 1068-1074

总页数: 7

文件大小: 2160K

下载量: 160