长爪沙鼠CST3序列同源性分析及蛋白体外表达

论文摘要

目的分析长爪沙鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂C （Cystatin C,CST3）cDNA序列同源性,并建立CST3蛋白原核表达体系,为长爪沙鼠CST3抗体制备和后续基因功能研究奠定基础。方法对长爪沙鼠Cst3 cDNA序列进行克隆、同源性分析及密码子优化;将优化后序列酶切连接到pET28a载体,完成重组CST3蛋白表达载体构建;将该载体转化到感受态细胞中,通过异丙基硫代半乳糖苷（Isopropylβ-D-Thiogalactoside,IPTG）诱导实现CST3蛋白的原核表达,并用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹法（Western blotting）验证。结果长爪沙鼠Cst3基因与人和小鼠Cst3基因的序列同源性较低。密码子优化后的长爪沙鼠Cst3表达序列插入到pET28a质粒中,获得了CST3蛋白表达载体。经1 mmol/L IPTG 37℃诱导12 h,可获得大量CST3蛋白。结论成功地构建了长爪沙鼠CST3蛋白的体外表达体系。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 实验动物
•   1.2 主要实验材料
•   1.3 方法
•     1.3.1 总RNA提取及cDNA制备:
•     1.3.2 Cst3基因蛋白质编码区 （codingsequence, CDS） 克隆和测序:
•     1.3.3 基因序列同源性比对:
•     1.3.4 质粒载体构建:
•     1.3.5 重组蛋白的诱导表达和检测:
•     1.3.6 SDS-PAGE凝胶电泳:
•     1.3.7 Western blotting实验:
• 2 结果
•   2.1 长爪沙鼠Cst3基因CDS区克隆测序分析
•   2.2 长爪沙鼠Cst3基因同源性分析
•   2.3 长爪沙鼠CST3蛋白表达载体构建
•   2.4 CST3蛋白体外诱导表达和鉴定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王妍,郭萌,杜小燕,李长龙,路静,霍学云,吕建祎,刘欣,陈振文

关键词: 长爪沙鼠,原核表达

来源: 实验动物科学 2019年02期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 首都医科大学基础医学院

基金: 国家自然基金项目(No.31572341,31572348和31772545),首都医科大学基础临床合作课题(No.17JL70)

分类号: Q95-33

页码: 1-8

总页数: 8

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