重组酪氨酸酚裂解酶催化制备左旋多巴

论文摘要

采用生物酶催化法替代化学合成法制备左旋多巴是一条绿色、经济的合成路线。将来源于弗氏柠檬酸菌酪氨酸酚裂解酶的编码基因与pKK223-3载体连接,构建表达载体pKK223-TPL,并在大肠杆菌BL21（DE3）中成功表达,构建了高活性的基因工程菌;研究了影响酪氨酸酚裂解酶酶活力和稳定性的关键因素,探索了减少副产物生成、提高底物转化率的催化条件。结果表明:在pH 7.5、20℃条件下,控制邻苯二酚质量浓度不超过12 g/L、丙酮酸钠质量浓度不超过7.5 g/L、以0.4 mol/L乙酸铵为氨来源、0.1 mmol/L K+为激活剂时,可有效减少副产物的生成,提高酪氨酸酚裂解酶的稳定性,经过12 h反应,左旋多巴产量达到122.8 g/L,邻苯二酚的最大转化率达到98.7%,具有较好的工业化应用潜力。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株与质粒
•     1.1.2 主要试剂与工具酶
•     1.1.3 培养基
•     1.1.4 主要仪器与设备
•   1.2 方法
•     1.2.1 重组质粒的构建
•     1.2.2 TPL基因的诱导表达
•     1.2.3 酶催化生成左旋多巴及酶活的测定
•     1.2.4 不同反应条件对酶活的影响
•     1.2.5 催化条件对反应过程中副产物生成的影响
•     1.2.6 酶转化制备左旋多巴
• 2 结果与讨论
•   2.1 质粒的构建与验证
•   2.2 酪氨酸酚裂解酶SDS-PAGE验证
•   2.3 反应条件对酪氨酸酚裂解酶酶活的影响结果
•     2.3.1 铵盐对酪氨酸酚裂解酶酶活的影响
•     2.3.2 金属离子对酪氨酸酚裂解酶酶活的影响
•     2.3.3 酪氨酸酚裂解酶的最适反应pH和pH稳定性
•     2.3.4 酪氨酸酚裂解酶的最适反应温度和温度稳定性
•   2.4 考察催化条件对反应过程中副产物生成的影响
•     2.4.1 丙酮酸钠浓度对副产物生成的影响
•     2.4.2 反应pH对副产物生成的影响
•     2.4.3 反应温度对副产物生成的影响
•   2.5 最佳条件酶催化制备左旋多巴
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赖秧秧,吴黎诚,周卫国,吴杰群,储消和

关键词: 酪氨酸酚裂解酶,酶催化,左旋多巴,副产物

来源: 生物加工过程 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 有机化工

单位: 浙江工业大学长三角绿色制药协同创新中心,浙江绿创生物科技有限公司,浙江野风药业股份有限公司

基金: 2018年度浙江省重点研发计划(2017C03SA740343)

分类号: TQ464.7

页码: 351-358

总页数: 8

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