大鼠LHA Orexin-A神经投射对VTA胃扩张敏感神经元放电活性和胃排空的调控研究

大鼠LHA Orexin-A神经投射对VTA胃扩张敏感神经元放电活性和胃排空的调控研究

论文摘要

目的:观察大鼠下丘脑外侧核(LHA)-中脑腹侧被盖区(VTA)Orexin-A神经通路对大鼠VTA内胃扩张敏感神经元放电活动影响,以及此神经通路对胃排空的调控作用。方法:选取健康雄性Wistar大鼠,按不同实验具体要求随机分组,观察LHA-VTA间神经纤维联系和功能。用荧光免疫组织化学法检测VTA内Orexin-A受体1(OX-1R)表达;荧光金(FG)逆行追踪结合荧光免疫组织化学法,观察VTA来源FG与LHA内神经递质Orexin-A共存现象;电生理方法记录胃扩张刺激对VTA神经元放电活动的影响;采用单细胞外放电记录方法,检测VTA核团注射Orexin-A对胃扩张敏感神经元放电活动影响及Orexin-A受体拮抗剂SB334867的抑制作用;进一步电刺激LHA,检测VTA内Orexin-A反应性胃扩张敏感神经元放电活动以及SB334867预处理对该作用的影响;应用大鼠胃排空酚红定量法观察VTA微量注射Orexin-A或电刺激下丘脑LHA对大鼠胃排空的作用及SB334867预处理对其的影响。结果:(1)荧光免疫组织化学染色结果显示,大鼠VTA内存在Orexin-A受体免疫阳性神经元表达。(2)荧光金逆行追踪结合荧光免疫组织化学法结果显示,VTA注射FG逆行至LHA,且部分FG阳性神经元为Orexin-A表达神经元,提示LHA内Orexin-A神经元纤维投射至VTA。(3)大鼠中脑VTA核团记录到的79个自发放电神经元中,58个神经元在胃扩张刺激后放电发生显著变化。其中呈现兴奋效应的(GD-E)有41个,呈现抑制效应的(GD-I)有17个。(4)VTA微量注射Orexin-A,41个GD-E中,68.29%(28/41)的神经元放电频率显著增加,从6.14±1.22 Hz升高到9.21±1.43 Hz(P<0.05),21.95%(9/41)放电频率显著降低,从6.87±1.46 Hz降低到4.13±1.12 Hz(P<0.05)。17个GD-I中,70.59%(12/17)的神经元放电频率显著升高,从6..03±1.42 Hz增加到9.22±1.90 Hz(P<0.05),23.53%神经元(4/17)放电频率显著下降,从6.23±1.01 Hz下降到3.12±0.92Hz(P<0.05)。VTA预先注射Orexin-A受体拮抗剂SB-334867,则Orexin-A对胃扩张敏感神经元的作用被完全阻断(P>0.05)。(5)电刺激LHA,在VTA记录到31个Orexin-A反应性GD-E神经元,其中有70.97%(22/31)神经元进一步呈现兴奋效应,放电频率从5.41±1.98 Hz升高至9.55±3.35Hz(P<0.05),19.35%(6/31)神经元放电减弱,从6.15±2.06 Hz降低到3.49±1.27 Hz(P<0.05);在VTA记录到的17个Orexin-A反应性GD-I神经元,其中有64.71%(11/17)神经元放电频率显著升高,放电频率从5.28±1.28 Hz升高到9.65±2.29Hz(P<0.05),29.41%(5/17)放电频率明显降低,放电频率从6.91±1.78 Hz降低到4.02±1.06 Hz(P<0.05)。SB-334867预处理VTA后,再电刺激LHA,VTA内Orexin-A反应性胃扩张敏感神经元的放电频率增长幅度显著下降(P<0.05)。(6)胃排空研究结果显示,VTA内微量注射Orexin-A,大鼠胃排空显著增加(P<0.05),VTA预先微量注射SB-334867,可部分阻断该效应(P<0.05)。电刺激下丘脑外侧核,大鼠胃排空显著增强(P<0.05)。同样,VTA内微量注射SB-334867,再电刺激下丘脑外侧核,电刺激导致的胃排空增强效应显著减弱(P<0.05)。结论:下丘脑LHA-VTA存在Orexin-A神经通路,该通路可能参与中枢胃传入信息和胃动力的调控。

论文目录

  • 摘要
  • abstract
  • 引言
  • 材料与方法
  •   1 实验动物
  •   2 主要实验仪器
  •   3 主要实验药品
  •   4 试剂配制
  •   5 动物麻醉
  •   6 VTA注射荧光金逆行追踪
  •   7 灌注固定取脑
  •   8 冰冻切片
  •   9 免疫荧光组织化学染色
  •   10 结果观察与分析
  •   11 胃部手术
  •   12 VTA埋管术
  •   13 玻璃微电极制备
  •   14 细胞外放电记录
  •   15 电刺激伏隔核
  •   16 胃排空实验
  •   17 统计学分析
  • 结果
  •   1 VTA内 Orexin-A受体表达
  •   2 LHA内 Orexin-A/FG免疫阳性神经元的表达
  •   3 胃扩张刺激对VTA神经元放电活动的影响
  •   4 Orexin-A和 SB334867对VTA内 GD神经元放电活动的影响
  •   5 电刺激下丘脑LHA对 VTA内 Orexin-A反应性胃扩张敏感神经元放电活动的影响
  •   6 VTA微量注射Orexin-A对大鼠胃排空的影响
  •   7 电刺激下丘脑LHA对胃排空的影响
  • 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 综述
  •   综述参考文献
  • 攻读学位期间的研究成果
  • 缩略词表
  • 致谢
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 宗勇

    导师: 郭菲菲

    关键词: 下丘脑外侧核,中脑腹侧被盖区,胃扩张敏感神经元,胃排空

    来源: 青岛大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 青岛大学

    分类号: R333.2

    DOI: 10.27262/d.cnki.gqdau.2019.002358

    总页数: 55

    文件大小: 1898k

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