导读:本文包含了光裂合酶基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:紫外线,产物,基因,丁烷,酵母,效率,作用。
光裂合酶基因论文文献综述
程龙[1]（2007）在《盐生杜氏藻CPD光裂合酶基因DsPHR2的克隆、差异表达及功能鉴定》一文中研究指出日光中的紫外辐射，包括315-280 nm处的UV-B和280-100 nm处的UV-C，可诱发生物体基因突变，导致癌变甚至细胞死亡。紫外辐射作用于生物体的主要靶分子是DNA碱基。由紫外辐射引起的DNA损伤主要有两种：环丁烷嘧啶二聚体(cuclobutane pyrimidine dimmer，CPD)和6-4光产物(6-4 photoproduct)。其中CPD是主要的损伤，占损伤碱基的的75％左右，而剩下的都是6-4光产物。这两种损伤都可以抑制细胞的转录和DNA的复制，因此如果这些损伤没有修复，就有致死作用。而生物体也进化了多种修复途径来修复这些DNA损伤，其中主要有光修复(photoreactivation)和核酸切除修复NER(nucleotide excision repair)。光修复是一种光依赖的修复途径，它是光裂合酶利用可见光的能量来修复紫外诱导的DNA损伤。光裂合酶有两种，CPD光裂合酶和6-4光裂合酶，但是一种光裂合酶只能特异地与一种DNA损伤结合，也就是说，CPD光裂合酶只能修复CPD，而6-4光裂合酶只能修复6-4光产物。许多生物都具有CPD光裂合酶，包括大肠杆菌和酿酒酵母；而有些生物例如多数植物，就即有CPD光裂合酶，又有6-4光裂合酶。然而，目前仅从少数物种中同时克隆到这两种光裂合酶，包括果蝇和拟南芥。胎盘类哺乳动物，包括人类都没有这两种光裂合酶。到目前为止，已经从两种藻类(衣藻和团藻)中克隆到CPD光裂合酶。盐生杜氏藻(Dunaliella salina，简称盐藻)是一种耐盐性极强的真核单细胞绿藻，它能在极端恶劣的环境中生长，并且具有较强的抗紫外能力。我们实验室已经从盐生杜氏藻中分离得到了6-4光裂合酶基因Ds64PHR。为了系统地研究盐藻的抗紫外能力，本论文在此基础上，通过同源克隆的方法克隆出了盐生杜氏藻中的第二条光裂合酶基因—CPD光裂合酶基因。然后利用生物信息软件对该基因进行分析，并通过功能互补实验和荧光定量实验对其修复活性和表达特性进行了研究和分析。1、首次成功克隆到盐生杜氏藻CPD光裂合酶基因的全长cDNA。通过同源克隆的方法获得了盐藻CPD光裂合酶基因的EST，然后通过3’RACE和5’RACE方法扩增出该基因的3’末端和5’末端。然后利用生物软件VectorNTI进行拼接，得到2206bp的盐藻CPD光裂合酶的全长cDNA。我们将该基因命名为DsPHR2。2、盐生杜氏藻CPD光裂合酶基因的生物信息学分析。利用生物软件对CPD光裂合酶基因DsPHR2的全长cDNA进行序列分析，发现该基因的ORF为1587bp，编码529个氨基酸。通过氨基酸序列的比对发现盐藻的CPD光裂合酶氨基酸序列与衣藻、拟南芥、水稻、黄瓜等的CPD光裂合酶序列具有较高的同源性，它与水稻CPD光裂合酶的序列一致性为44.7％，与衣藻CPD光裂合酶的序列一致性为44.6％，与拟南芥CPD光裂合酶的序列一致性为43.0％，与黄瓜的CPD光裂合酶的序列一致性为43.4％。通过叁级结构的比较发现，预测的盐藻CPD光裂合酶的叁级结构和大肠杆菌CPD光裂合酶的叁级结构也比较相似。3、通过功能互补实验来证明盐生杜氏藻CPD光裂合酶基因的光修复能力。将盐藻CPD光裂合酶基因DsPHR2构建到载体pGEX-4T-1，然后转入大肠杆菌紫外损伤修复缺陷株SY2(uvrA~-，recA~-，phr~-)中(SY2／pGEX-DsPHR2)，同时将空载pGEX-4T-1转入SY2作为负对照。然后用紫外光照射，接着部分用可见光修复，部分直接黑暗培养。结果发现，转入CPD光裂合酶基因DsPHR2的SY2菌株经紫外照射后的存活率比转入空载的要高很多。另外，转入CPD光裂合酶基因DsPHR2的SY2菌株经紫外照射后再用可见光修复，其存活率也比同样转入CPD光裂合酶基因DsPHR2的SY2菌株经紫外照射后直接黑暗培养的要高。这一方面说明了从盐生杜氏藻中克隆到的DsPHR2在大肠杆菌中具有修复紫外损伤的功能，另外一方面说明了要修复紫外损伤，提高SY2菌株的存活率，不仅需要有光裂合酶的作用，还需要可见光提供能量。4、通过荧光定量PCR证明可见光、UV、高浓度盐和H_2O_2可诱导盐生杜氏藻CPD光裂合酶基的表达。将正常培养到对数生长期的盐藻暗培养24h，然后分别用可见光、UV、高浓度盐和H_2O_2来进行胁迫处理，处理到特定时间点时提取RNA，再通过荧光定量PCR的方法来检测其表达特性。结果表明可见光和UV都可以诱导盐藻CPD光裂合基因DsPHR2的表达，不过高强度的UV具有致死效应。另外高浓度盐和氧化胁迫同样可以提高盐藻CPD光裂合酶基因DsPHR2的mRNA的表达水平。总之，我们成功地克隆到了盐生杜氏藻的CPD光裂合酶基因，并对该基因及其编码的蛋白质进行了生物信息分析。然后通过功能互补实验证明了该基因在大肠杆菌紫外损伤修复缺陷株SY2中具有光修复活性，并通过荧光定量PCR的方法检测到该基因的表达可受可见光、UV、高浓度盐和H_2O_2等胁迫条件的诱导。这样就为盐藻抗紫外机制的研究及光裂合酶的应用研究奠定了理论基础。(本文来源于《四川大学》期刊2007-05-01）
李茜[2]（2006）在《盐藻6-4光裂合酶基因的功能鉴定及表达研究》一文中研究指出紫外光照射可导致生物体在核酸水平上发生氧化损伤，产生致死性很强的嘧啶二聚体。其中6-4光产物(6-4 pyrimidine dimmer或6-4 photoproduct)的致突变性及致死性尤为突出，因为它直接引起细胞的凋亡；而CPD光产物(cyclobutane pyrimidine dimmer，CPD)仅仅造成细胞周期暂时或短期的停滞现象。因此，大力开展对6-4光裂合酶基因的研究与开发工作显得极其重要。 盐生杜氏藻(Dunaliella salina)是一种耐盐性极强的真核单细胞绿藻，它能在极端恶劣的环境中生长，并且具有较强的抗紫外能力。 本论文在实验室首次成功克隆得到盐藻6-4光裂合酶基因Ds64PHR的基础上，对Ds64PHR的紫外损伤修复特性、基因在核酸及蛋白质水平上的表达情况进行了较为细致全面的研究与分析。 1、通过功能互补实验，完成了Ds64PHR在体内的功能验证。将Ds64PHR转入E.coli CPD缺陷型菌株SY2，进行基因在细胞体内的抗紫外功能鉴定；将E.coli CPD光裂合酶基因转入SY2中作为实验正对照，对Ds64PHR及E.coli CPD光裂合酶的修复能力进行直观的比较；将不含光裂合酶基因的空载体pET32转入SY2中作为实验负对照，研究Ds64PHR自身的修复特性。 实验结果发现：光修复过程对于提高细菌的存活来说是必需的；Ds64PHR基因表达的6-4光裂合酶对暴露在紫外线下严重受损的细胞具有一定的修复能力，能使SY2存活率提高约1倍；E.coli CPD光裂合酶比Ds64PHR具有更强(本文来源于《四川大学》期刊2006-05-13）
杨会强[3]（2004）在《盐生杜氏藻（6-4）光裂合酶基因在Pichia pastoris中的表达和功能研究》一文中研究指出生物体在受到紫外照射时，常因在核酸水平上形成嘧啶二聚体导致DNA的氧化性损伤，具有强烈的致死作用。生物体自身进化出多种修复途径抵御DNA的紫外损伤，其中(6-4)光裂合酶在修复该类紫外损伤中具有极其重要的作用。 盐生杜氏藻(Dunaliella salina)是一种单细胞真核绿藻，它不仅能在高盐环境中生存，而且具有较强的抗紫外特性。本文在已克隆到盐生杜氏藻(6-4)光裂合酶基因(Ds64PHR)的基础上，应用巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris，Pp)重组蛋白表达系统，将Ds64PHR导入巴斯德毕赤酵母中进行高效的表达，并对该基因在真核生物中抗紫外功能进行初步验证。取得的主要研究结果如下： 1．首先采用高压电击法转化毕赤酵母细胞，通过正交实验优化影响Pichia pastoris转化效率毕赤酵母的转化条件参数，包括电击电压，制备感受态的细胞培养浓度，质粒DNA的浓度，担体DNA的加入，电击后的复苏等。初步得出电击电压1500V，培养细胞浓度OD_(600)=1.3时，质粒浓度100ng／μ L，总量500ng-1μg时转化率最高。且在加有担体DNA时及电击后进行复苏时能较大的提高其电转化效率； 2．构建了能在Pichia pastoris的高效表达的重组型的表达载体pGAPZB-Ds64PHR并进行了分子生物学验证； 3．将表达载体pGAPZB-Ds64PHR重组到Pichia pastoris基因组DNA中，叨川大学硕士论文 构建GSI 15一Ds“尸HR工程菌并进行了分子生物学验证。4.应用SDS一队GE(十二烷基硫酸钠一聚丙烯酞胺凝胶电泳)分析工程菌 GS 1 15一Ds吞4尸了搜表达外源蛋白Ds64PHR的能力及Ds64PHR表达水平与 抗紫外能力的关系，发现它们之间并不是正相关的关系。还证明Pichia pastoris也能作为验证外源基因功能的宿主菌。关键词:巴斯德毕赤酵母转化效率(6一4)光裂合酶基因紫外线照射蛋 白表达(本文来源于《四川大学》期刊2004-05-20）
刘敏[4]（2003）在《盐生杜氏藻（6-4）光裂合酶基因的克隆及表达》一文中研究指出紫外光照射可导致生物体产生两种损伤：(6-4)光产物和环丁烷嘧啶二聚体。针对这些嘧啶二聚体的损伤，许多生物体可产生一种名为光裂合酶的蛋白，这种蛋白吸收UV-A／蓝光，通过一个光依赖的作用机制(光复活作用)来分解这些光产物，完成修复功能。这些光裂合酶分别作用(6-4)光产物和环丁烷嘧啶二聚体，因此，该酶可分为(6-4)光裂合酶和环丁烷嘧啶二聚体光裂合酶。目前已从高等生物拟南芥、鲐类、果蝇、人类和非洲爪蟾蜍属中克隆到有(6-4)光裂合酶活性的基因，本研究从盐生杜氏藻Dunaliella salina中克隆到(6-4)光裂合酶的基因，并将该基因在大肠杆菌中得以表达，这是首次在藻类中克隆到(6-4)光裂合酶基因，对光裂合酶的研究具有重要意义。研究的主要内容包括： 1．运用BLAST方法对EST序列进行分析，初步预测该EST序列为光裂合酶／蓝光受体蛋白质家族中一个成员的部分cDNA。 2．利用3’RACE法扩增此cDNA序列的3’端部分，所得片段长度为2575bp，含一个完整的开放读框，长1800bp，可编码600个氨基酸；利用生物信息学法对此扩增序列进行分析，包括同源性分析、序列的读框分析、蛋白质的保守性分析以及该蛋白的进化关系分析，预测出此序列编码了D. salina的(6-4)光裂合酶。 3．克隆编码D. salina的(6-4)光裂合酶的开放阅读框序列，并以BamHI和XhoI位点定向插入到原核表达载体pGEX-4T-1中，构建成pGEX-4T-1／6-4载体，并将此载体转化到大肠杆菌J-M109中。 4.用工PTG诱导含pGEX一4T一1/6一4的转化菌，提取初提物中的总蛋白，进行SDS一聚丙烯酞胺凝胶电泳，检测表达的融合蛋白大小越为gokD。 5.工PTG诱导过的转化菌，经过30秒的紫外光照射后，分别进行光培养或暗培养，计算存活率，从而证明了及sa了z’na的(6一4)光裂合酶在大肠杆菌中可进行光修复活性作用。(本文来源于《四川大学》期刊2003-05-20）
光裂合酶基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
紫外光照射可导致生物体在核酸水平上发生氧化损伤，产生致死性很强的嘧啶二聚体。其中6-4光产物(6-4 pyrimidine dimmer或6-4 photoproduct)的致突变性及致死性尤为突出，因为它直接引起细胞的凋亡；而CPD光产物(cyclobutane pyrimidine dimmer，CPD)仅仅造成细胞周期暂时或短期的停滞现象。因此，大力开展对6-4光裂合酶基因的研究与开发工作显得极其重要。 盐生杜氏藻(Dunaliella salina)是一种耐盐性极强的真核单细胞绿藻，它能在极端恶劣的环境中生长，并且具有较强的抗紫外能力。 本论文在实验室首次成功克隆得到盐藻6-4光裂合酶基因Ds64PHR的基础上，对Ds64PHR的紫外损伤修复特性、基因在核酸及蛋白质水平上的表达情况进行了较为细致全面的研究与分析。 1、通过功能互补实验，完成了Ds64PHR在体内的功能验证。将Ds64PHR转入E.coli CPD缺陷型菌株SY2，进行基因在细胞体内的抗紫外功能鉴定；将E.coli CPD光裂合酶基因转入SY2中作为实验正对照，对Ds64PHR及E.coli CPD光裂合酶的修复能力进行直观的比较；将不含光裂合酶基因的空载体pET32转入SY2中作为实验负对照，研究Ds64PHR自身的修复特性。 实验结果发现：光修复过程对于提高细菌的存活来说是必需的；Ds64PHR基因表达的6-4光裂合酶对暴露在紫外线下严重受损的细胞具有一定的修复能力，能使SY2存活率提高约1倍；E.coli CPD光裂合酶比Ds64PHR具有更强
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
光裂合酶基因论文参考文献
[1].程龙.盐生杜氏藻CPD光裂合酶基因DsPHR2的克隆、差异表达及功能鉴定[D].四川大学.2007
[2].李茜.盐藻6-4光裂合酶基因的功能鉴定及表达研究[D].四川大学.2006
[3].杨会强.盐生杜氏藻（6-4）光裂合酶基因在Pichiapastoris中的表达和功能研究[D].四川大学.2004
[4].刘敏.盐生杜氏藻（6-4）光裂合酶基因的克隆及表达[D].四川大学.2003
论文知识图
