导读:本文包含了人尿激酶原突变体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人尿激酶原突变体,乳腺特异表达,慢病毒载体
人尿激酶原突变体论文文献综述
于永生,罗晓彤,吴晓洁,周艳荣,陈红星[1]（2009）在《表达人尿激酶原突变体的重组山羊乳腺特异性表达慢病毒载体的构建》一文中研究指出目的:构建山羊乳腺特异性表达尿激酶原突变体的重组慢病毒载体,证明其表达的有效性。方法:将劳氏肉瘤病毒增强子/启动子、复制缺陷型人免疫缺陷病毒(HIV-1)的5'端长重复序列(LTR)、HIV-1ψ包装信号、HIV Rev反应元件、山羊β-酪蛋白调控序列、尿激酶原M13cDNA、ΔU3/3'LTR、牛生长激素(BGH)基因poly(A)依次连接,构建乳腺特异性表达的慢病毒载体,通过体外转染人乳腺癌细胞系MCF-7、中国仓鼠卵巢细胞及泌乳山羊乳腺注射证明其表达有效性。结果:酶切鉴定证实山羊乳腺特异性表达载体构建正确;将该载体转染细胞,采用溶圈法和Western印迹检测证实了其表达的有效性;慢病毒载体注射到泌乳山羊的乳腺,在乳汁中也检测到了尿激酶原的表达。结论:为在转基因动物乳腺中表达尿激酶原突变体奠定了基础。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2009年04期）
于永生,吴晓洁,罗晓彤,周颜荣,陈红星[2]（2009）在《重组腺病毒介导的人尿激酶原突变体在山羊乳汁中的表达》一文中研究指出构建携带人尿激酶原突变体cDNA的重组腺病毒,通过该腺病毒介导实现外源基因在山羊乳腺中表达。通过大肠杆菌内同源重组将人尿激酶原突变体cDNA插入到腺病毒载体中,经过293细胞包装获得重组腺病毒,直接注射到泌乳山羊乳腺,收集感染后1～4天的乳汁,利用纤维蛋白溶圈试验、Western blot、ELISA检测乳清中尿激酶原突变体的表达。结果显示病毒注射后1～4天乳清中均可检测到尿激酶原的表达,其表达量可达0.41mg/ml。该方法可以实现重组蛋白在山羊乳腺的短期表达,可能是大规模生产临床医疗蛋白的一条经济有效的途径。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2009年02期）
尹吉伟,岳俊杰,李森,井健[3]（2007）在《人尿激酶原纤原受体识别区嵌合突变体的构建与表达》一文中研究指出采用同源转座方法,构建了在尿激酶原K区138~139位点插入了赖氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(KGD)序列的2种尿激酶原嵌合体基因(proUK-KGDW,proUK-KGDS),并以昆虫细胞SF9为宿主获得了高效表达,表达量在33.34μkat.mL-1,细胞密度为106.mL-1,表达高峰期表达产物占细胞总蛋白的15%以上.表达产物展示出较高的纤溶活性,并具有良好的人尿激酶原免疫原性,同时,经SDS-PAGE试验检测,昆虫细胞分泌的突变体相对分子质量符合理论预期,为5.4×104,绝大多数为单链态形式.经过离子交换、分子筛层析及超滤浓缩等步骤对突变体蛋白进行了初步纯化,光浊度法试验表明含有KGDW序列的尿激酶原突变体具有较强的血小板聚集抑制活性,而含有KGDS序列的突变体几乎不具有任何活性,表明羧基端边侧序列对KGD展示正常的受体结合活性影响较大.溶解圈试验表明2种突变体均保留了较高的纤溶活性,说明插入序列不影响尿激酶原的酶切活性.(本文来源于《北京师范大学学报(自然科学版)》期刊2007年05期）
于永生,周艳荣,卢建申,吴晓洁,李青旺[4]（2005）在《人尿激酶原突变体的构建及其特性的研究》一文中研究指出由于人尿激酶原(pro_UK)存在凝血酶和纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI_1)的作用位点,在生产和治疗过程中容易失去活性。采用PCR介导的定点突变技术对pro_UK基因进行了突变,构建了3种人pro_UK突变体,分别将蛋白序列中的凝血酶作用位点Arg156突变成His156,构建成pro_UKM1;将PAI_1的作用位点Arg178、Arg179、Arg181突变为Lys178、Lys179、His181构建成pro_UKM2;同时将凝血酶和PAI_1的作用位点突变构建成pro_UKM3。分别在CHO细胞中获得稳定表达。并对3种突变体进行了SDS_PAGE纤维蛋白自显影和Westernblot分析,证明3种细胞表达的pro_UKM与天然尿激酶原带型一致,绝大多数为单链。体外溶栓试验表明,pro_UKM1对凝血酶有抵抗性,pro_UKM2对PAI有抵抗性,pro_Ukm3能有效抵抗凝血酶和PAI的活性抑制特别是pro_UKM3具有开发成新型溶血栓药物的潜力。(本文来源于《生物工程学报》期刊2005年04期）
[5]（1999）在《人尿激酶原cDNA序列缺失突变体的构建及表达》一文中研究指出采用ＰＣＲ重迭延伸法和基因重组技术构建了人尿激酶原ｃＤＮＡ序列中缺失150～156位氨基酸的突变体,以ＣＯＳＴ细胞中获得暂时性表达以及在ＣＨＯ细胞中稳定高效表达,其表达水平为450～500ＩＵ/106ｃｅｌｌ/24ｈ,表达产物经ＳＤＳＰＡＧＥ电转溶实验和(本文来源于《药物生物技术》期刊1999年03期）
韩素文,俞炜源,程度胜,胡宝成[6]（1997）在《人尿激酶原cDNA序列缺失突变体的构建及表达》一文中研究指出采用ＰＣＲ重迭延伸法和基因重组技术构建了人尿激酶原ｃＤＮＡ序列中缺失１５０～１５６位氨基酸的突变体，以ＣＯＳ７细胞中获得暂时性表达以及在ＣＨＯ细胞中稳定高效表达，其表达水平为４５０～５００ＩＵ／１０６ｃｅｌ／２４ｈ，表达产物经ＳＤＳＰＡＧＥ电转溶实验和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明，细胞分泌的ＰｒｏＵＫ突变体与天然ＰｒｏＵＫ以及完整全长ＤＮＡ序列表达ＰｒｏＵＫ的分子量相同，为５４ｋＤａ，绝大多数为单链，比完整ｃＤＮＡ序列表达产物的单链比例明显增高，与纤维蛋白的亲和性有所提高(本文来源于《生物工程学报》期刊1997年02期）
人尿激酶原突变体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
构建携带人尿激酶原突变体cDNA的重组腺病毒,通过该腺病毒介导实现外源基因在山羊乳腺中表达。通过大肠杆菌内同源重组将人尿激酶原突变体cDNA插入到腺病毒载体中,经过293细胞包装获得重组腺病毒,直接注射到泌乳山羊乳腺,收集感染后1～4天的乳汁,利用纤维蛋白溶圈试验、Western blot、ELISA检测乳清中尿激酶原突变体的表达。结果显示病毒注射后1～4天乳清中均可检测到尿激酶原的表达,其表达量可达0.41mg/ml。该方法可以实现重组蛋白在山羊乳腺的短期表达,可能是大规模生产临床医疗蛋白的一条经济有效的途径。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人尿激酶原突变体论文参考文献
[1].于永生,罗晓彤,吴晓洁,周艳荣,陈红星.表达人尿激酶原突变体的重组山羊乳腺特异性表达慢病毒载体的构建[J].生物技术通讯.2009
[2].于永生,吴晓洁,罗晓彤,周颜荣,陈红星.重组腺病毒介导的人尿激酶原突变体在山羊乳汁中的表达[J].中国生物工程杂志.2009
[3].尹吉伟,岳俊杰,李森,井健.人尿激酶原纤原受体识别区嵌合突变体的构建与表达[J].北京师范大学学报(自然科学版).2007
[4].于永生,周艳荣,卢建申,吴晓洁,李青旺.人尿激酶原突变体的构建及其特性的研究[J].生物工程学报.2005
[5]..人尿激酶原cDNA序列缺失突变体的构建及表达[J].药物生物技术.1999
[6].韩素文,俞炜源,程度胜,胡宝成.人尿激酶原cDNA序列缺失突变体的构建及表达[J].生物工程学报.1997