禽呼肠孤病毒σA蛋白在HEK293T细胞中的表达

论文摘要

为了正确表达禽呼肠孤病毒（ARV）σA蛋白,试验拟构建σA基因的真核表达质粒,并将其在人胚肾细胞（HEK293T）中准确表达,参照GenBank中ARV S2基因序列（登录号为KF741763. 1）设计特异性引物,以pMD18-T-σA重组载体为模板,应用PCR的方法扩增σA基因的特异性序列,并将其克隆到p MD18-T载体中,构建重组pMD18-T-σA表达质粒,再用限制性内切酶KpnⅠ和NotⅠ同时双酶切pMD18-T-σA和真核表达质粒pEF1α-HA,将胶回收的σA基因和pEF1α-HA进行连接,构建真核表达质粒pEF1α-HA-σA。真核表达质粒经菌落PCR、双酶切和测序验证正确后,将其转染HEK293T细胞,于24 h后收取蛋白质,通过Western-blot验证目的蛋白。结果表明:本试验成功克隆了ARVσA基因,构建了其真核表达质粒pEF1α-HA-σA,并在HEK293T细胞中表达。说明该蛋白可以在HEK293T细胞中准确表达。

论文目录

• 1 材料
• 2 方法
•   2.1 ARVσA基因目的片段的克隆与测序
•   2.2 真核表达质粒的构建及鉴定
•   2.3 细胞培养和转染
•   2.4 蛋白质的提取和鉴定
• 3 结果与分析
•   3.1 ARVσA基因目的片段的克隆与测序
•   3.2 真核表达质粒的构建与鉴定
•   3.3 Western-bolt验证目的蛋白的表达
• 4 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 任红玉,谢芝勋,谢丽基,王盛,黄娇玲,范晴,罗思思,张艳芳,曾婷婷,张明秀,谢志勤,邓显文

关键词: 禽呼肠孤病毒,基因,克隆,蛋白,真核表达质粒

来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年14期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 广西大学动物科学技术学院,广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室

基金: 国家自然科学基金项目(31660715,31160512),广西科技项目(2018GXNSFAA138106)

分类号: S852.65

DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.09.0346

页码: 59-62

总页数: 4

文件大小: 226K

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