导读:本文包含了重组人溶菌酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:溶菌酶,层析,酵母,疏水,培养基,大肠杆菌,阳离子。
重组人溶菌酶论文文献综述
颜倩倩,陶妍,李雯,谢晶,钱韵芳[1]（2019）在《鲤鱼c型溶菌酶在毕赤酵母中的重组表达及其抑菌活性》一文中研究指出c型溶菌酶是鱼类在先天性免疫机制中抵抗细菌感染的关键性免疫蛋白。鲤鱼(Cyprinus carpio)c型溶菌酶具有鱼类c型溶菌酶的基本特征:N端含有信号肽;C端成熟肽中的Glu35和Asp51构成酶的活性位点,并含有8个保守的半胱氨酸残基。本研究通过反转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)获得鲤鱼c型溶菌酶成熟肽的c DNA,该序列全长381 bp,编码由127个氨基酸残基组成的成熟肽;通过PCR在其5'端添加限制性内切酶XhoⅠ位点和6×His标签、3'端添加XbaⅠ位点;获得的目的基因,即鲤鱼c型溶菌酶基因(common carp c-type lysozyme, CLYc),与表达载体pPICZαA连接后电转至毕赤酵母(Pichia pastoris) X-33,通过高浓度博来霉素筛选高拷贝酵母转化子;在29℃、250 r/min条件下,使用1.5%甲醇诱导表达120 h,表达上清液经固化金属离子亲和层析(immobilized metal affinity chromatography, IMAC)纯化,获得分子量为15.4 kD的重组蛋白,表达量约为40 mg/L;Western blot分析和MALDI-TOF/TOF质谱鉴定表明该重组蛋白为预期的目的重组蛋白CLYc。抑菌试验证明,含重组CLYc的培养上清液对革兰氏阳性的单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)以及革兰氏阴性的大肠杆菌(Escherichia coli)和副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)具有明显的抑菌活性;纯化的重组CLYc对单增李斯特菌、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌和副溶血性弧菌显示了相同的最小抑菌浓度。本研究结果为鱼类来源的天然抗菌剂的开发和生产提供了技术途径。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年11期）
李浩杰,杨雪珍,蓝文康,张伟崇,王晔[2]（2019）在《重组人溶菌酶在毕赤酵母中的诱导表达及活性研究》一文中研究指出为了构建一种胞内表达人溶菌酶(hLZ)的毕赤酵母工程菌,此研究以人工合成人溶菌酶基因序列,通过酶切位点插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,获得pPICZαA-hLZ。线性化该表达载体,电转化并筛选阳性克隆,甲醇诱导重组蛋白表达后,进行纯化和活性分析。结果表明,通过亲和层析树脂(Ni-IDA)从培养液上清纯化目标蛋白,SDS-PAGE表明目标蛋白为14.7 kDa左右,Western-blot结果表明目标蛋白即为带有6个His标签的重组人溶菌酶,BCA法测定表明纯化后的蛋白浓度为0.121 mg/mL;溶壁微球菌抑菌试验表明该重组人溶菌酶具有部分生物活性。此研究成功地获得了胞内表达且具有部分生物活性的人溶菌酶毕赤酵母工程菌,为重组人溶菌酶作为饲料添加剂开发应用奠定了一定的基础。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2019年10期）
史瑾,翟宁宁,李晓颖,杨小琳,赵金礼[3]（2019）在《重组人溶菌酶滴眼液在兔眼房水中的药物含量分析》一文中研究指出目的:重组人溶菌酶(rhLYZ)滴眼液经家兔干眼模型的药效学实验后,测定分析兔眼房水中重组人溶菌酶的含量,综合判断rhLYZ进入房水的可能性。方法:通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDSPAGE)、免疫印迹法(Western blotting)和反相高效液相色谱法(RP-HPLC),分别对兔眼房水中的rhLYZ进行定性分析及定量检测。结果:经3种方法对测定结果的比对及综合分析,用药组兔眼房水中,准确定性和定量检测到rhLYZ的样本仅有2个(n=18)。结论:经滴眼,在干眼的治疗过程中,初步判断rh LYZ基本在眼表发挥作用,通过眼表进入房水的可能性较低,或进入房水的量甚微,在药物代谢实验中需采用更为灵敏的方法进行检测分析。(本文来源于《中国新药杂志》期刊2019年15期）
李晓颖,高恩,杨金芳,李敏,杨小琳[4]（2019）在《重组人溶菌酶活性检测方法研究》一文中研究指出目的:本研究旨在以分光光度法为基础,建立重组人溶菌酶原料药和重组人溶菌酶滴眼液的活性检测方法,并对其进行方法学研究。用于重组人溶菌酶原料药和滴眼液的质量控制。方法:依据卫生部药品标准,采用分光光度法,对重组人溶菌酶活性检测方法的专属性、耐用性、精密度、线性范围以及准确性进行了验证。通过对重组人溶菌酶滴眼液进行同一时间不同样品不同底物,不同时间不同样品不同底物活性测定,确定重组人溶菌酶滴眼液的活性范围。结果:实验结果显示该活性检测方法专属性、耐用性、重复性、中间精密度、线性、准确度均良好。48 h耐用性(标准偏差为1 394. 4,RSD%为0. 95%);重复性(标准偏差为1 472. 0,RSD%为0. 99%),中间精密度(标准偏差1 000. 0,RSD%为0. 68%);检测下限为0. 625μg·m L~(-1),在5～25μg·m L~(-1)浓度范围内线性(标准曲线为y=0. 007 7x+0. 068 5,R~2=0. 991 1);准确性(回收率100. 7%～109. 6%,标准偏差为0. 032 2,RSD%为3. 05%);连续3批重组人溶菌酶原料活性分别为152 500,153 500和150 800 U·mg~(-1); 3批重组人溶菌酶滴眼液活性分别为142 000,140 000和133 000 U·mg~(-1)。连续3批重组人溶菌酶冻干粉和3批重组人溶菌酶滴眼液活性均稳定。结论:本方法可用于重组人溶菌酶原料药及重组人溶菌酶滴眼液的生物学活性测定。(本文来源于《中国新药杂志》期刊2019年09期）
邓晗,史瑾,郝东,王维,赵金礼[5]（2019）在《重组人溶菌酶的分离纯化及鉴定》一文中研究指出目的建立重组人溶菌酶(human lysozyme,h LYZ)的分离纯化方法,并对纯化产物进行鉴定。方法采用固液分离、膜过滤、疏水层析及离子交换层析对hLYZ进行分离纯化;SDS-PAGE及HPLC法检测hLYZ纯度;按《中国药典》二部(2015版)蛋清溶菌酶效价检查法检测其效价;Western blot法检测其特异性;基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF)测定其相对分子质量。结果该分离方法可获得单一组分的重组hLYZ;SDS-PAGE检测纯度达99%,HPLC分析纯度达98. 8%;纯化后的hLYZ可与抗人LYZ抗体特异性结合,活性为1. 2×105 U/mg,相对分子质量为14 697。结论建立的分离纯化方法易操作,成本低,得到的hLYZ纯度大于98%,该分离方法可用于hLYZ的规模化生产。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年03期）
陈姗姗,孙艺轩,王向东,林剑[6]（2019）在《基因重组蛋清溶菌酶的分离纯化》一文中研究指出以毕赤氏基因重组酵母发酵液为研究对象,经过离心分离、超滤、膜分离、阳离子交换树脂吸附后,得到的纯化液,真空干燥得到酶活为20000U·mg~(-1)的蛋清溶菌酶粉末。研究结果表明:发酵液在5000r/min、25℃下离心15min,得到离心液溶菌酶活性为360.1U·mL~(-1),菌体细胞的去除率达99.99%;超滤最佳操作条件:压力为0.15MPa,pH为6.5;一级超滤得到的溶菌酶活性为455.4U·mL~(-1),收率为90.6%,纯化程度提高了23.7%;二级超滤得到的溶菌酶活性为648U·mL~(-1),收率为61.2%,纯化程度提高了42.3%; D152阳离子交换树脂对料液进行离子交换层析,得溶菌酶的酶活性为770.5U·mL~(-1),收率达90%,纯化程度提高了18.9%。(本文来源于《中国食品添加剂》期刊2019年01期）
李敏,侯增淼,李晓颖,杨金芳,高恩[7]（2019）在《改良咔唑法测定重组人溶菌酶滴眼液中透明质酸钠的含量》一文中研究指出采用改良咔唑法测定重组人溶菌酶滴眼液中透明质酸钠的含量。对显色条件进行优化,获得了最佳的测定条件:硼砂–硫酸加入量为5 mL;水解温度为100℃;显色加热时间为20 min;咔唑–乙醇溶液用量为0.2 mL;显色后用冰水浴迅速冷却。该方法线性范围为0.012～0.060 mg/mL,测量重复性为2.15%(n=6),平均加标回收率为99.9%。该方法可用于重组人溶菌酶滴眼液中透明质酸钠含量的质量控制。(本文来源于《化学分析计量》期刊2019年01期）
史瑾,邓晗,王维,郝东,赵金礼[8]（2018）在《反相高效液相色谱法测定重组人溶菌酶的含量及纯度》一文中研究指出目的:建立重组人溶菌酶含量及纯度的反相高效液相色谱(RP-HPLC)检测方法。方法:采用Welch Ultimate XB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),含0.1%叁氟乙酸和0.9%氯化钠的水溶液为流动相A;含0.1%叁氟乙酸和0.9%氯化钠水溶液-乙腈(40∶60)为流动相B;检测波长280 nm,柱温32℃,流速1.0 mL·min~(-1),线性梯度洗脱。结果:本方法专属性良好;供试品48 h内稳定,RSD为0.51%;重复性RSD为0.46%,中间精密度不同工作日间的RSD为0.52%,不同实验员间的RSD为0.53%;定量下限200 ng、检测下限30 ng;在进样量10～60μg范围内,线性关系良好,r=0.999 9;平均回收率(n=9)99.7%,RSD为0.94%。测定3批重组人溶菌酶冻干粉含量分别为36.5%、32.8%和31.1%;纯度均大于98%。结论:方法学验证表明,该方法符合定量检测重组人溶菌酶含量和纯度的要求,适用于重组人溶菌酶的质量控制。(本文来源于《药物分析杂志》期刊2018年12期）
胡双艳[9]（2018）在《利用大肠杆菌制备重组人溶菌酶》一文中研究指出目的:人溶菌酶(human lysozyme,HLZ)是一种糖苷水解酶,具有抗菌消炎的作用,其作为抗生素的替代品,已经被广泛应用于食品业、畜牧业和医疗等领域。如何获得高活性高纯度的人源溶菌酶一直是亟待解决的科学问题。方法:优化人源溶菌酶编码基因密码子,提高其在大肠杆菌中的适应度和表达量;将优化的基因克隆至大肠杆菌表达质粒pET21a,并将其在大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中诱导表达;目标蛋白可溶表达时,利用硫酸铵分级沉淀和阳离子交换层析从可溶性蛋白中分离纯化人源溶菌酶;目标蛋白不可溶表达时,即利用8 mol/L尿素溶液对包涵体进行溶解变性后,探究一步透析、梯度透析和梯度稀释叁种复性方式以及复性液中谷胱甘肽氧化还原对(GSSG/GSH)、精氨酸、甘油等复性物的浓度对重组人源溶菌酶复性的效果,获得最佳的复性方案。结果:18℃诱导温度下,利用0.5 mmol/L IPTG成功诱导了分子量约为14.7 kDa的重组人源溶菌酶的可溶表达。纯化后人源溶菌酶的比活力值为1231U/mg,但低于人溶菌酶标准品1732 U/mg的比活力值。37℃诱导温度下,利用0.5mmol/L IPTG成功诱导了重组人源溶菌酶的不可溶表达,包涵体表达量约为380 mg(湿重)/L。包涵体经一步透析、梯度透析和梯度稀释叁种复性方式复性后,测得比活力值分别为147 U/mg、335 U/mg、176 U/mg,表明最佳复性方法为梯度透析复性法。进一步探索了复性液中GSSG/GSH比值、精氨酸浓度、甘油浓度对人源溶菌酶复性效果的影响,结果表明当复性液中同时添加浓度比为1:2的GSSG/GSH、4 mmol/L精氨酸和6%甘油时,复性后人源溶菌酶的最佳比活力值为1170 U/mg,远高于叁种复性物均不加时人源溶菌酶335 U/mg的比活力值,但低于人溶菌酶标准品1732 U/mg的比活力值。结论:本研究成功将人源溶菌酶基因在大肠杆菌中表达,并通过包涵体复性体系成功获得高活性重组人源溶菌酶。(本文来源于《天津商业大学》期刊2018-12-01）
宋增健,薛松,王向东,林剑[10]（2018）在《基因重组毕赤酵母产蛋清溶菌酶发酵工艺及表达条件的优化》一文中研究指出以甲醇诱导型蛋清溶菌酶基因重组毕赤酵母(Pichia pastoris)NCY-2为研究菌株,选用麦芽汁为培养基,首先通过单因素试验,对培养基锥形瓶种类、原麦芽汁稀释度及外加氮源进行了优化,在此基础上,采用均匀设计试验,得到菌株NCY-2的最佳发酵工艺条件为发酵温度31℃、pH 5.5,转速220 r/min,接种量4%;蛋清溶菌酶最佳表达条件为诱导温度18℃、诱导pH 4.4、转速190 r/min、甲醇初始添加量为0.3%(之后每隔24 h分别添加体积分数1.0%、1.5%、2.0%,诱导72 h结束)。在此优化条件下,摇床水平发酵液中蛋清溶菌酶酶活力可达到962.4 U/m L。(本文来源于《中国酿造》期刊2018年10期）
重组人溶菌酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了构建一种胞内表达人溶菌酶(hLZ)的毕赤酵母工程菌,此研究以人工合成人溶菌酶基因序列,通过酶切位点插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,获得pPICZαA-hLZ。线性化该表达载体,电转化并筛选阳性克隆,甲醇诱导重组蛋白表达后,进行纯化和活性分析。结果表明,通过亲和层析树脂(Ni-IDA)从培养液上清纯化目标蛋白,SDS-PAGE表明目标蛋白为14.7 kDa左右,Western-blot结果表明目标蛋白即为带有6个His标签的重组人溶菌酶,BCA法测定表明纯化后的蛋白浓度为0.121 mg/mL;溶壁微球菌抑菌试验表明该重组人溶菌酶具有部分生物活性。此研究成功地获得了胞内表达且具有部分生物活性的人溶菌酶毕赤酵母工程菌,为重组人溶菌酶作为饲料添加剂开发应用奠定了一定的基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组人溶菌酶论文参考文献
[1].颜倩倩,陶妍,李雯,谢晶,钱韵芳.鲤鱼c型溶菌酶在毕赤酵母中的重组表达及其抑菌活性[J].农业生物技术学报.2019
[2].李浩杰,杨雪珍,蓝文康,张伟崇,王晔.重组人溶菌酶在毕赤酵母中的诱导表达及活性研究[J].家畜生态学报.2019
[3].史瑾,翟宁宁,李晓颖,杨小琳,赵金礼.重组人溶菌酶滴眼液在兔眼房水中的药物含量分析[J].中国新药杂志.2019
[4].李晓颖,高恩,杨金芳,李敏,杨小琳.重组人溶菌酶活性检测方法研究[J].中国新药杂志.2019
[5].邓晗,史瑾,郝东,王维,赵金礼.重组人溶菌酶的分离纯化及鉴定[J].中国生物制品学杂志.2019
[6].陈姗姗,孙艺轩,王向东,林剑.基因重组蛋清溶菌酶的分离纯化[J].中国食品添加剂.2019
[7].李敏,侯增淼,李晓颖,杨金芳,高恩.改良咔唑法测定重组人溶菌酶滴眼液中透明质酸钠的含量[J].化学分析计量.2019
[8].史瑾,邓晗,王维,郝东,赵金礼.反相高效液相色谱法测定重组人溶菌酶的含量及纯度[J].药物分析杂志.2018
[9].胡双艳.利用大肠杆菌制备重组人溶菌酶[D].天津商业大学.2018
[10].宋增健,薛松,王向东,林剑.基因重组毕赤酵母产蛋清溶菌酶发酵工艺及表达条件的优化[J].中国酿造.2018
论文知识图
