安徽部分地区APEC分离鉴定及耐药性与毒力基因分析

论文摘要

禽致病性大肠杆菌（Avian pathogenic Escherichia coli,APEC）是大肠杆菌病的病原体,是感染家禽最常见的病原菌之一,危害极大,数年来给家禽业造成巨大的经济损失。因此,探究APEC菌株的血清型、毒力基因、系统发育群、耐药性和遗传变异的关系,并寻找潜在毒力基因与菌株耐药性的相关性,统计毒力基因和耐药基因的分布情况,把握其流行分布及发展动态,为进一步研究安徽部分地区APEC致病机制及其流行病学研究提供参考,为疾病的防控和临床合理用药提供理论依据。本研究结合形态特征、培养特性、生化试验及16S rRNA的方法对菌株进行分析鉴定,从具有典型“包心包肝”症状的发病家禽中分离出80株APEC。本研究对80株APEC菌株进行毒力基因检测和系统进化群分析,结果显示15种毒力基因中有12种可以检出,每株菌株可同时携带1～10种毒力基因,说明毒力基因广泛流行分布于APEC菌株中,并以毒力基因不同组合模式协同致病,携带papC+iutA+iss+iroN+tsh+icuD+vat+irp2+cvaC这 9 种毒力基因组合的菌株可能会使致病力增强。系统进化群分析发现安徽部分地区分离的APEC中以A群菌株数最多,检出率高于50%,为主要优势群。本研究为了探究APEC菌株毒力基因数量、系统进化群、血清型与致病力之间的关系。选取A1（fimH、papC、iutA、iss、iroN、tsh、icuD vat、irp2、cvaC）属于B2毒力群和01血清型、A72（fimH）属于A共生群和非01、02、078血清型,比较致病性之间的差异,发现毒力基因数量、系统进化群、血清型与致病力强弱之间的存在一定的相关性。本研究为了解安徽部分地区APEC耐药表型及耐药基因情况,对安徽部分地区分离的80株APEC进行药物敏感性试验和耐药基因检测,结果显示APEC对多西环素、磺胺异噁唑和氨苄西林的耐药性检出率较高,分别为96.25%、92.5%、78.75%。其中有78株APEC表现为多重耐药,耐4种及4种以上的菌株比例达到82.5%,耐药现象相当普遍。4大类的12种耐药基因均有检出,四环素类耐药基因tet（A）、喹诺酮类耐药基因parC为当前最为流行的耐药基因,检出率分别为72.5%和78%,磺胺类耐药基因sul Ⅱ的检出率最高为56.25%,其次sul Ⅲ检出率为32.5%,sul Ⅰ的检出率最低为22.5%,β-内酰胺酶类耐药基因ompCA的检测率较低仅为37.5%。氨基糖苷类的耐药基因ant（3"）、aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ib的检出率分别为36.25%、30%和20%,占主导地位,而rmtB的检出率最低,仅为3.75%,部分耐药基因与耐药表型符合率呈正相关。本研究为进一步研究为耐药基因与耐药表型提供了宝贵的数据,还为APEC临床诊断、用药提供参考。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• Abstract
• 英文缩写词表
• 文献综述
• 引言
• 1 材料与方法
•   1.1 试验材料与仪器
•     1.1.2 试验动物
•     1.1.3 主要试剂
•     1.1.4 抗菌药物
•     1.1.5 试剂及培养基配制
•     1.1.6 主要仪器设备
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 细菌分离纯化
•     1.2.2 镜检
•     1.2.3 生化鉴定
•     1.2.4 16S rRNA基因鉴定及遗传进化树分析
•     1.2.5 APEC分离株血清型鉴定
•     1.2.6 毒力相关基因的检测
•     1.2.7 毒力系统进化群分析
•     1.2.8 致病性试验
•     1.2.9 药物敏感性试验及耐药基因检测
• 2 结果与分析
•   2.1 临床诊断结果
•   2.2 APEC的分离培养及形态特征观察
•   2.3 生化鉴定
•   2.4 16S rRNA基因的PCR扩增及遗传进化分析
•   2.5 APEC血清型鉴定结果
•   2.6 毒力相关基因的检测结果
•     2.6.1 15种毒力基因的检测
•     2.6.2 毒力基因组合分布情况
•     2.6.3 毒力基因的主要组合形式
•   2.7 系统进化群结果分析
•   2.8 致病性试验结果
•   2.9 药敏试验结果
•   2.10 12种耐药基因检测结果
•   2.11 耐药基因与耐药表型分析结果
• 3 讨论
•   3.1 APEC的鉴定
•   3.2 毒力基因分布情况分析
•   3.3 系统进化群分析
•   3.4 毒力基因、系统进化群与致病力的相关性分析
•   3.5 血清型与致病力的相关性分析
•   3.6 耐药基因与表型耐药分析
• 4 结论
• 参考文献
• 作者简介
• 附作者在读研期间发表的学术论文

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 俞赵荣

导师: 王勇,李传峰

关键词: 禽致病性大肠杆菌,毒力基因,分型,耐药性,致病性

来源: 安徽农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 安徽农业大学

基金: 华澳大学生科技创新基金《安徽部分地区鸡源大肠杆菌耐药性分析及药物筛选》

分类号: S852.61

DOI: 10.26919/d.cnki.gannu.2019.000524

总页数: 67

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