泛素基因沉默对TLR4/NF-κB信号通路中关键分子表达的影响

论文摘要

为了探讨泛素（ubiquitin,简称Ub）对TLR4/NF-κB信号通路中关键分子表达的影响,通过脂质体将短发夹RNA（shRNA）质粒转染猪小肠上皮细胞,使其泛素基因沉默,于转染后6、12、24、48 h收集细胞及其上清。应用荧光定量PCR检测细胞内TLR4/NF-κB信号通路中关键分子TLR4、NF-κB、MyD88、IκB-α的mRNA表达水平,应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测NF-κB、IκB-α及炎性因子TNF-α、IL-1含量的变化。结果显示,shRNA质粒有效地抑制了泛素基因的表达,转染shRNA质粒后,TLR4/NF-κB信号通路中TLR4、NF-κB、MyD88和IκB-α的mRNA表达量及NF-κB、IκB-α、TNF-α和IL-1含量均普遍呈下降的趋势,说明泛素在炎性因子的释放中起着至关重要的作用,泛素基因的沉默能够抑制该通路的活化。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试验材料
•   1.2 试验方法
•     1.2.1 猪小肠上皮细胞的培养
•     1.2.2 shRNA质粒的设计及构建
•     1.2.3 泛素基因沉默
•     1.2.4 引物设计
•     1.2.5 Real-Time PCR
•     1.2.6 酶联免疫吸附试验（ELISA）检测
•     1.2.7 数据处理
• 2 结果与分析
•   2.1 转染shRNA质粒后IPEC-J2细胞中泛素基因的表达情况
•   2.2 IPEC-J2细B、IκB-α 及MyD88的mRNA表达量
•   2.3 IPEC-J2细胞中细胞因子的ELISA检测结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘超英,董骎,高洪,严玉霖,富国文,单春兰

关键词: 泛素,基因沉默,信号通路,炎性因子

来源: 江苏农业科学 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 云南农业大学动物科学技术学院

基金: 国家自然科学基金(编号:31260594,31660704),云南省高校科技创新团队支持计划(编号:云教科[2011]14号),云南生猪产业技术体系建设专项经费(编号:云财农[2009]171号)

分类号: Q75

DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2019.08.008

页码: 37-40

总页数: 4

文件大小: 655K

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