三白草中ATG4B抑制剂的发现及活性测定

论文摘要

验证从三白草中提取的两个化合物XGN56和XGN59对自噬关键蛋白ATG4B酶活性的影响及对自噬的调节作用。分子对接的方法验证化合物与游离ATG4B及ATG4B-LC3复合体的氢键结合作用; SDS-PAGE法及荧光共振能量转移法（FRET）测定化合物（10μmol/L）抑制ATG4B的IC50值; LC3融合GFP荧光标签检测化合物（10μmol/L）对LC3荧光聚集的影响,并设置正常组、给药组和药物联用Baf（0.5μmol/L）组;过表达GFP-LC3的WT-MEF及ATG5-/--MEF细胞检测化合物诱导LC3荧光点的情况。结果显示,XGN56和XGN59能分别与游离ATG4B和ATG4BLC3复合体形成氢键作用,且两者均能剂量依赖地抑制ATG4B的酶切活性,体外IC50分别为7.74μmol/L和8.00μmol/L,同时能够ATG5依赖地促进GFP标记的自噬体的生成（P <0.001）。结果表明,两个化合物可能是通过一定程度地抑制ATG4B的酶活性从而促进细胞自噬水平。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 细胞
•   1.2 药物、试剂与仪器
•   1.3 分子对接
•   1.4 蛋白表达及纯化
•   1.5 FRET法检测酶活性
•   1.6 SDS-PAGE法检测酶活性
•   1.7 GFP-LC3荧光实验
•   1.8 统计学处理
• 2 结果
•   2.1 化合物与游离ATG4B对接结果
•   2.2 化合物与ATG4B-LC3复合体对接结果
•   2.3 化合物对ATG4B酶活性抑制作用
•   2.4 化合物对自噬的作用
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郑雪萍,伏园园,夏凡,顾琼,李民

关键词: 三白草,分子对接,抑制剂,自噬

来源: 天然产物研究与开发 2019年07期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 有机化工

单位: 中山大学药学院

基金: 国家自然科学基金(31671437),广东省自然科学基金(2016A030313335),广州市产学研协同创新重大专项(201604020109)

分类号: TQ460.1

DOI: 10.16333/j.1001-6880.2019.7.019

页码: 1252-1257+1229

总页数: 7

文件大小: 1848K

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