导读:本文包含了酶分离纯化论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:甲烷,层析,东乡,褐藻,麦麸,文蛤,特性。
酶分离纯化论文文献综述
肖伟,徐梅珍,谷丰,蒋伦伟,王义华[1]（2019）在《东乡野生稻过氧化物酶分离纯化及其酶学特性研究》一文中研究指出过氧化物酶与植物体内活性氧的清除和逆境适应性反应密切相关,为了深入研究过氧化物酶在植物抗逆反应中的重要作用,以东乡野生稻叶片组织为材料,采用浸提、盐析、透析和柱色谱法分离纯化POD蛋白,采用聚丙烯凝胶活性电泳检测蛋白,利用愈创木酚法研究POD的活性和酶学特性。结果表明,经磷酸缓冲液浸提、40%～80%硫酸铵盐析、再经Sephadex G-100凝胶柱层析等步骤,从东乡野生稻叶片组织分离制备得到POD1同工酶组分,酶蛋白的纯化倍数为16.49,比活力为568.80 U/mg。聚丙烯凝胶活性电泳检测仅呈单一POD1同工酶带,属于单一组分。POD酶Km为1.26 mmol/(L·min),最大反应速度Vmax为17.51 mmol/(L·min),最适宜的pH 5.0,最适宜温度35℃～45℃,Cu~(2+)和Zn~(2+)对POD有较强的激活作用,而Fe~(3+)对POD活性有一定的抑制作用,POD酶活性受20%的甲醇、乙醇和丙酮等有机试剂抑制。(本文来源于《中国农学通报》期刊2019年36期）
杨晓月,李小平,李晨[2]（2019）在《藜麦麸过氧化物酶分离纯化及酶学特性研究》一文中研究指出经浸提、硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析,从藜麦麸中纯化得到了电泳纯的过氧化物酶(peroxidase,POD),其纯化倍数、比活力和回收率分别为23.78,22 753.09 U/mg和19.36%。经SDS-PAGE鉴定,该酶相对分子质量为57.1 ku。在催化愈创木酚与过氧化氢的反应中,酶的最适温度为60℃,最适pH值为6.0,在40～60℃及pH值4～8范围内具有较好的稳定性。以H_2O_2为底物,测得该酶的Km值为5.61 mmol/L。尿素、Mg~(2+)和Fe~(3+)对酶有激活作用,当其浓度为50 mmol/L时,酶活力被分别激活至119%,117%,161%;K~+,Ca~(2+)对藜麦麸POD无显着影响;甲醇,乙醇,异丙醇,正丁醇,KSCN,SDS,Zn~(2+),Cu~(2+),Mn~(2+)对酶有抑制作用,其中,正丁醇和SDS对酶的抑制作用很强,当正丁醇体积分数为20%,SDS浓度为10 mmol/L时,酶的活性完全丧失。(本文来源于《山西农业科学》期刊2019年06期）
王婷婷,宋星,李燕[3]（2018）在《文蛤纤维素酶分离纯化及性质》一文中研究指出采用缓冲液提取、(NH4)2SO4分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Phenyl Sepharose 6 Fast Flow疏水层析,从文蛤(Meretrix meretrix L)中分离纯化出一种纤维素酶。结果显示:纯化后的纤维素酶比活力达到40.33 U/mg,纯化倍数为13.12;SDS-PAGE检测其亚基相对分子质量为59 700;文蛤纤维素酶的最适pH为5.2,最适反应温度为45℃,该酶在p H 4～6和4～50℃范围内有较好的稳定;在最适条件下,以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为底物测得其Km值为0.111 mmol/L。(本文来源于《食品与生物技术学报》期刊2018年12期）
郭宇婷,潘永贵,张正科,张伟敏[4]（2018）在《槟榔果仁多酚氧化酶分离纯化及其酶特性研究》一文中研究指出以槟榔果仁为试材,经pH6.8磷酸缓冲溶液(PBS)提取多酚氧化酶(PPO)粗酶液,采用(NH4)2SO4分级沉淀后,进一步通过DEAE-Sepharose Fast Flow和Phenyl Sepharose 6 Fast Flow柱层析,获得PPO纯化酶液。经鉴定其纯度达到电泳纯,相对分子质量为29.2 ku。在此基础上,对提取的PPO进行酶学特性研究,结果表明,槟榔果仁中PPO最适温度为20℃,最适pH为7.0;以邻苯二酚为底物,该酶的最大反应速度(Vmax)为140.84 U/mL·min,Km为3.22 mmol/L。(本文来源于《食品科技》期刊2018年11期）
宋铖铖,杨丹妮,苏盛亿,张钦,付颖寰[5]（2018）在《猪肺血管紧张素转化酶分离纯化及酶活性研究》一文中研究指出血管紧张素转化酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)是一种二肽羧基的糖蛋白酶,参与调节血压和高血压的发生中起着重要的作用。本论文研究从猪肺中制备分离纯化得到高纯度ACE,从而探索纯化酶的最优条件。首先采用蔗糖和胰蛋白酶两种方法预处理新鲜的猪肺匀浆液,然后采用硫酸铵分级沉淀法,将预处理后粗提匀浆液进行分级沉淀,然后对得到的粗酶液进行透析。经过高效液相色谱法测定蔗糖、胰蛋白酶-硫酸铵盐析-透析的ACE活性分别为0.036 U/ml,0.054 U/ml。通过DEAE FF柱层析叁级不同盐浓度洗脱,确定使用含0.150M、0.253M、0.700M的NaCl硼酸盐缓冲溶液收集,并标记每个洗脱峰流出的蛋白溶液。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测知,叁级洗脱SDS-PAGE显示是一条电泳带,该ACE相对分子质量约为78kDa。本研究为猪肺制备纯化ACE酶的研究,提供理论基础。(本文来源于《中国食品科学技术学会第十五届年会论文摘要集》期刊2018-11-07）
王文博[6]（2018）在《Leucobacter triazinivorans sp. JW-1代谢扑草净中间产物降解酶分离纯化及特性研究》一文中研究指出扑草净作为一种重要的选择性叁嗪类除草剂,其高频、大量使用导致土壤和地下水严重污染。微生物对环境中叁嗪类除草剂残留污染消除起主要作用,目前,以阿特拉津为代表的氯代-s-叁嗪类除草剂的降解微生物种质资源和参与其代谢的酶研究已有广泛报道,而有关扑草净等甲基硫代-s-叁嗪类除草剂的微生物降解菌株及其酶的研究鲜有报道,其降解分子机制更是有待于进一步深入研究。本论文以前期分离的一株扑草净降解菌株Leucobacter triazinivorans sp.JW-1为研究对象,在明确其降解扑草净化学途径基础上,通过分离纯化获得菌株JW-1胞内降解酶,研究N-异丙基氰尿酰胺降解酶的酶学性质和其底物特异性,主要研究结果总结如下:1.建立了菌株Leucobacter triazinivorans sp.JW-1胞内降解酶和硫酸铵分级沉淀组分活性检测方法。结果表明,菌株JW-1胞内3种不同的降解酶分别负责催化降解扑草净、2-羟基扑灭津和N-异丙基氰尿酰胺,且3种降解酶在不同饱和度硫酸铵溶液下析出。2.通过硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose疏水层析、Superdex~(TM) 200凝胶层析和Q Sefinose~(TM)强阴离子交换层析4步纯化流程,获得了N-异丙基氰尿酰胺降解酶。纯化后将降解酶的比活力由0.55 U/mg提高至11.2 U/mg,纯化倍数为20.4,酶活力回收率为5.02%。N端测序测得其N端20个氨基酸残基为SKDFD LIIRN AYLSE KDSVY,该序列与已报道的酰胺水解酶AtzC的N端前20个氨基酸序列的一致。3.研究了N-异丙基氰尿酰胺降解酶的酶学性质。酶参与催化反应的最适反应体系:温度42℃,pH值7.0,该酶在4-42℃和pH 6-8活性稳定。Fe~(2+)、Fe~(3+)、Al~(3+)、Cu~(2+)、Cr~(3+)、Zn~(2+)和Hg~(2+)对降解酶活性抑制较强,而Ca~(2+)、Ni~(2+)和Mg~(2+)对酶活性有一定的激活作用。表面活性剂SDS对酶活性有较强的抑制作用,EDTA·Na_2和1,10-菲罗啉对酶活性抑制,表明其催化活性依赖特定金属离子;碳酸二乙酯(DEPC)、碘乙酰胺(Iodoacetamide)和苯甲基磺酰氟(PMSF)对酶活性的抑制表明酶催化活性可能依赖活性中心的组氨酸、丝氨酸和半胱氨酸残基。4.测定了N-异丙基氰尿酰胺降解酶的动力学常数和底物特异性。以N-异丙基氰尿酰胺为底物,测得米氏常数K_m为0.674 mmol/L,最大反应速率V_(max)为25.1 U/mg;N-异丙基氰尿酰胺降解酶底物特异性实验表明,降解酶对2,4-二羟基叁嗪化合物表现不同的催化水解能力,表明催化活性与叁嗪环上6位取代基的基团差异有关,降解酶的催化水解能力与取代基的复杂程度相关。(本文来源于《安徽农业大学》期刊2018-06-01）
胡渤洋[7]（2018）在《毛栓菌漆酶分离纯化、介体系统及污染降解应用》一文中研究指出漆酶(Laccase,EC 1.10.3.2)是一种含有多个Cu~(2+)的多酚氧化酶,其广泛存在于真菌、细菌、高等植物及昆虫中。漆酶可以催化芳香类等物质的降解,如木质素、染料和农药等。由于一些环境化合物的氧化还原电势高于漆酶,因此限制了漆酶的降解应用。介体的发现使漆酶的作用范围扩大、降解速率提高,漆酶/介体系统(LMS)可以降解非酚类及氧化还原电势高的化合物,因此,漆酶在木质素降解和环境污染物的降解等方面有着潜在的应用价值。本文以实验室野外采集的26种真菌菌株为材料,筛选获得具有高效耐受农药的菌株(BUA-01),并以BUA-01为实验出发菌株,研究其菌株培养及产酶条件、胞外漆酶分离纯化、酶学特性和基因克隆以及LMS对污染物的降解应用研究。具体内容如下:1、以吡虫啉(0.5%)、乙酰甲胺磷(0.2%)、草甘膦异丙胺盐(0.4%)和高效氯氰菊酯(2.2%)为作用靶标,对26种真菌开展农药高耐受菌筛选,得到BUA-01菌株,其在上述四种农药培养基中的生长速率分别是6.75±0.25 mm/d、5.25±0.00 mm/d、3.25±0.13 mm/d和4.67±0.26 mm/d。结合形态学特征观察及ITS分子鉴定,确定此菌株为毛栓菌(Trametes hirsuta);BUA-01最适培养条件:淀粉为最适碳源,黄豆粉和酵母浸粉为最适氮源,最适C/N比为40/1和10/1,最适温度为37℃,最适pH为6.0-7.0,供试生长因子对菌丝生长无显着促进作用;培养基中Cu~(2+)浓度为0.25 mmol/L,在培养96 h时,发酵液的漆酶活性达到最高,是对照组的26倍,为1081.33±6.3U/mL;BUA-01菌株发酵液对偶氮染料降解效果显着,12 h对依文思蓝、甲基橙和铬黑T的脱色率分别为93.31±0.16%、92.37±0.42%和79.25±0.64%。2、以5%的接种量将BUA-01菌株接种到终浓度为0.25 mM Cu~(2+)的发酵培养基中,28℃、180rpm振荡培养3 d后,获得粗酶液。依次通过DEAE-Sepharose、SP-Sepharose和Q-Sepharose离子交换层析技术,获得电泳纯级的漆酶(THL),经SDS-PAGE,确定其分子量为67.7 kDa;以ABTS为作用底物时,漆酶的最适温度为60℃;最适pH为2.2;在温度和pH分别在50-65℃和4.2条件下稳定性较高;K_m与V_(max)分别为28.44μM和555.56μmol/min;10.0 mM Mg~(2+)、Ca~(2+)、Mn~(2+)、Cu~(2+)、Cd~(2+)、Co~(2+)和EDTA对漆酶有显着的抑制作用,抑制率25%-58%;而1.25 mM的Na~+对漆酶具有微弱激活作用,酶活提高10%左右;1.25-10.0 mM K~+对漆酶的活性无显着影响。通过以简并引物对漆酶保守序列进行扩增,获得长度为1226 bp的漆酶核心区cDNA部分序列,与T.hirsuta(KU878364.1)的相似性为97%,遗传距离为0.072。3、LMS研究表明,该漆酶的最适介体为乙酰丁香酮(AS)和四甲基哌啶氮氧化物(TEM);LMS对碱性品红、甲基橙、孔雀石绿和依文思蓝降解效果最佳,24 h的降解率最高分别为72.3%、86.1%、88.2%和89.2%;全波段扫描结果表明,介体AS比介体TEM更具有提高漆酶反应速率的能力,且THL-AS和THL-TEM在降解碱性品红、甲基橙和依文思蓝染料过程中均有新物质生成;pH、温度和介体浓度对LMS的影响表明,THL-AS在pH 2.0-5.0,20-60℃,介体浓度为0.1 mM的条件下非常稳定,在1 h可实现对染料的高效降解,降解率可达80%左右;THL-TEM在pH 3.0-4.0,50-60℃,介体浓度为0.5-1.0 mM的条件下较为稳定,但降解效率不如THL-AS高;在24 h时,THL-TEM对乙酰甲胺磷的降解效果最好,为65.56%;THL-ABTS对黄曲霉毒素B_1的降解效果最好,为20.88%;LMS反应液的10倍和50倍稀释液对黑麦草具有低植物毒性,且随着稀释倍数的增加,对根长生长的影响越小。(本文来源于《北京农学院》期刊2018-05-01）
刘欣茹[8]（2018）在《白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶分离纯化及基因的克隆》一文中研究指出白头翁皂苷糖基水解酶能够特异性的水解白头翁皂苷上的糖苷键,使多糖基白头翁皂苷转化为低糖基白头翁皂苷,不仅能提高白头翁皂苷的生物利用率,还可以提高其药效价值。本论文主要对Absidia sp.P00r菌发酵产的白头翁皂苷糖基水解II型酶的分离纯化和基因调取进行了研究。在Absidia sp.P00r菌的液体发酵培养研究中发现,白头翁皂苷糖基水解II型酶在以70%的槐花浸出液为诱导物配制的5°麦芽汁培养基培养120 h时,产量较大,诱导效果较好。利用DEAE-Cellulose(DE52)阴离子交换柱进行分离纯化,得到电泳纯的白头翁皂苷糖基水解II型酶蛋白,将该酶通过蛋白质电印迹转膜至PVDF膜上后,经过蛋白质N-端序列测定,确定该酶N-端序列为YPDSVQHAETVQNLI。根据测得的白头翁皂苷糖基水解II型酶蛋白N-端序列和测得的肽质谱数据登陆NCBI网站和Matrixscience网站的蛋白质数据库进行比对,查找同源性,并根据同源性设计引物。根据白头翁皂苷糖基水解II型酶的N-端序列设计简并引物,以Absidia sp.P00r菌株的mRNA为模板,采用RT-PCR进行基因序列的调取;根据3’RACE和5’RACE技术扩增白头翁皂苷糖基水解II型酶的3’端和5’端的基因片段并测序,得到白头翁皂苷糖基水解II型酶的基因全序列,最后对调取的基因序列进行序列分析。白头翁皂苷糖基水解II型酶的基因全长为1376 bp,其中1~84 bp为5’UTR,长度为84 bp;85~1137 bp为基因的CDS区,长度为1053 bp;可编码351个氨基酸;1138~1365bp为3’UTR,长度为228 bp;1366~1376 bp为Poly A部分,长度为11 bp。(本文来源于《大连工业大学》期刊2018-05-01）
林惠颖,辛嘉英,李春雨,孙立瑞,夏春谷[9]（2018）在《颗粒性甲烷单加氧酶分离纯化方法的研究进展》一文中研究指出颗粒性甲烷单加氧酶(pMMO)是甲烷氧化菌的特征酶之一,在生物催化方面具有广泛的应用前景,但由于其内膜蛋白的性质以及纯化过程中的不稳定性,使其生物化学性质、金属活性位点等方面仍存在许多未知和争议.着重总结了颗粒性甲烷单加氧酶的分离纯化方法,并对其活性以及与甲烷氧化菌素-Cu(methanobactin-Cu)和其他物质之间的作用关系进行了概述,以促进颗粒性甲烷单加氧酶的深入研究和应用.(本文来源于《分子催化》期刊2018年01期）
韩伟,许鑫琦,叶秀云,林娟[10]（2018）在《海洋来源褐藻胶裂解酶分离纯化及酶学性质研究》一文中研究指出以假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.zb7-4)发酵制备褐藻胶裂解酶粗酶液,采用弱阴离子DEAE交换层析分离褐藻胶裂解酶,分析纯化褐藻胶裂解酶Alg L的酶学特性.结果表明:Alg L的表观分子质量约为32 ku,比活力为(208.26±5.87)U·mg-1;其最适反应pH为7.0,在pH为6.0~10.0范围内稳定性较好,保温1 h仍能保持80%以上的相对酶活力;最适反应温度50℃,在40℃保温30 min,其残余酶活力高于80%;Cu2+、Cr3+、Co2+、Ba2+、Sr2+、Hg2+对该酶具有不同程度的抑制作用,Hg2+抑制作用最为明显;该酶具有较好的盐耐受性,在3 mol·L-1Na Cl反应体系中保温2 h,仍残余66%酶活力.动力学参数Km、Vmax、Kcat测定表明,该酶对聚古罗糖醛酸钠(PG)亲和力较高,为偏好聚甘露糖醛酸钠(PM)裂解作用的双功能酶.(本文来源于《福州大学学报(自然科学版)》期刊2018年01期）
酶分离纯化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
经浸提、硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析,从藜麦麸中纯化得到了电泳纯的过氧化物酶(peroxidase,POD),其纯化倍数、比活力和回收率分别为23.78,22 753.09 U/mg和19.36%。经SDS-PAGE鉴定,该酶相对分子质量为57.1 ku。在催化愈创木酚与过氧化氢的反应中,酶的最适温度为60℃,最适pH值为6.0,在40～60℃及pH值4～8范围内具有较好的稳定性。以H_2O_2为底物,测得该酶的Km值为5.61 mmol/L。尿素、Mg~(2+)和Fe~(3+)对酶有激活作用,当其浓度为50 mmol/L时,酶活力被分别激活至119%,117%,161%;K~+,Ca~(2+)对藜麦麸POD无显着影响;甲醇,乙醇,异丙醇,正丁醇,KSCN,SDS,Zn~(2+),Cu~(2+),Mn~(2+)对酶有抑制作用,其中,正丁醇和SDS对酶的抑制作用很强,当正丁醇体积分数为20%,SDS浓度为10 mmol/L时,酶的活性完全丧失。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酶分离纯化论文参考文献
[1].肖伟,徐梅珍,谷丰,蒋伦伟,王义华.东乡野生稻过氧化物酶分离纯化及其酶学特性研究[J].中国农学通报.2019
[2].杨晓月,李小平,李晨.藜麦麸过氧化物酶分离纯化及酶学特性研究[J].山西农业科学.2019
[3].王婷婷,宋星,李燕.文蛤纤维素酶分离纯化及性质[J].食品与生物技术学报.2018
[4].郭宇婷,潘永贵,张正科,张伟敏.槟榔果仁多酚氧化酶分离纯化及其酶特性研究[J].食品科技.2018
[5].宋铖铖,杨丹妮,苏盛亿,张钦,付颖寰.猪肺血管紧张素转化酶分离纯化及酶活性研究[C].中国食品科学技术学会第十五届年会论文摘要集.2018
[6].王文博.Leucobactertriazinivoranssp.JW-1代谢扑草净中间产物降解酶分离纯化及特性研究[D].安徽农业大学.2018
[7].胡渤洋.毛栓菌漆酶分离纯化、介体系统及污染降解应用[D].北京农学院.2018
[8].刘欣茹.白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶分离纯化及基因的克隆[D].大连工业大学.2018
[9].林惠颖,辛嘉英,李春雨,孙立瑞,夏春谷.颗粒性甲烷单加氧酶分离纯化方法的研究进展[J].分子催化.2018
[10].韩伟,许鑫琦,叶秀云,林娟.海洋来源褐藻胶裂解酶分离纯化及酶学性质研究[J].福州大学学报(自然科学版).2018
论文知识图
