哈药集团三精制药150000
【摘要】目的:建立小儿氨酚黄那敏颗粒中胆酸、猪去氧胆酸及胆红素测定方法。方法:用薄层色谱法对胆酸、猪去氧胆酸进行定性鉴别;高效液相色谱法对胆红素进行含量测定,以DiamonsilTMC18(4.6mm×250mm,5μm)为分析柱,四氢呋喃-乙腈-0.1%醋酸铵(pH4.7)(42∶22∶36)为流动相;流速:1.0mL·min-1;检测波长:452nm;进样量20μL。结果:薄层色谱中均能明显地检出胆酸和猪去氧胆酸,胆红素对照品在0.6555～13.11μg·mL-1范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9995,平均回收率为98.6%,RSD=1.0%(n=9)。结论:本法简便,准确,专属性强,可以作为该制剂的质量控制方法。
【关键词】:小儿氨酚黄那敏颗粒;人工牛黄;胆酸;猪去氧胆酸;TLC;胆红素;HPLC
小儿氨酚黄那敏颗粒主要用于缓解儿童的普通感冒，并且对流行性感冒引起的发烧和鼻塞症状也有着很好的疗效。该药品主要成分为乙酰氨基酚和人工牛黄，成分中还有其他辅料。其中的人工牛黄的功效有清热解毒、化痰、定惊等等，对于小儿发烧和受风效果显著。在所有成分中，胆红素和胆酸均为有效成分，所以称为药品质量分析中非常重要的内容。高效液相色谱是一种有效的测定方式，其对于小儿氨酚黄那敏颗粒的质量控制工作意义十分重大。
1仪器与试药
Waters1525泵,Waters2487检测器,Waters717自动进样器,WatersEmpower色谱工作站;瑞士CAMAG紫外灯箱;奥波超声波清洗机(工作频率:40±1.5kHz,输出功率:400W);对照品胆酸(批号:120819-201505)、猪去氧胆酸(批号:120821-201509),胆红素(批号:120821-201509),购于中国药品生物制品检定所;薄层色谱用硅胶G(青岛海浪硅胶干燥剂厂制造,批号:20151012)小儿氨酚黄那敏颗粒由10个不同生产厂家提供,共10批,分别编号1～10,人工牛黄由三九南开制药有限公司提供,阴性样品:缺人工牛黄的小儿氨酚黄那敏颗粒由本实验室自配,四氢呋喃为色谱纯(ManufacturedbySKChemicalsUlsan680-160,korea),乙腈(ManufacturedbySKChemicalsUlsan680-160,korea),其他试剂均为分析纯,水为纯化水。
二、试验方法和试验结果
（一）测定胆红素
（1）色谱条件
分别采用精密量来提取溶液，之后进行对照，对照内容包括品溶液、供试品溶液以及隐形对照溶液这三个类型，取量各为20μL，之后注入到液相色谱仪之中，并且完全分离其中的成分，对照页在胆红素的三个异构体峰值位置上不存在吸收峰值。
图1小儿氨酚黄那敏颗粒HPLC色谱图
（2）对照品溶液的制备精密称取胆红素对照品(五氧化二磷室温减压干燥至恒重)约12mg置100mL棕色量瓶中,加三氯甲烷约30mL使溶后,用四氢呋喃定容至刻度,摇匀,精密量取溶液1mL置50mL棕色量瓶中,加四氢呋喃-三氯甲烷(3∶1)混合溶液稀释定容至刻度,摇匀,即为对照品溶液。
（3）供试品溶液的制备
取装量差异项下的内容物,混匀,研细,精密称取适量(约相当于人工牛黄10mg)置50mL棕色量瓶中,精密加入四氢呋喃-三氯甲烷(3∶1)混合溶液25mL,称定重量,置超声波清洗器中室温超声45min后,用四氢呋喃-三氯甲烷(3∶1)混合溶液补足减失的重量,摇匀,静置,取上清液,用0.45μm微孔滤膜滤过,精密量取续滤液20μL注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算每袋样品胆红素的含量(μg·袋-1)。
（4）试验回收率
城区小儿氨酚黄那敏颗粒适量，并且共计9份，分别在其中加入浓度为24.72微克/升的胆红素1毫升，并且按照先前介绍的方式来进行操作，按照先前制定的色谱条件来进行测定，判断其中的胆红素总含量，通过计算得出回收率。回收率试验结果如表1所示。
表1胆红素加样回收率试验
（5）胆红素含量情况的测定
按照前文所述的“供试品溶液”制备的方式以及“对照品溶液制备”的方式来制备相关溶液，按照上文的色谱条件来进行分析，每次进样大约20μL，计算含量的时候采用外标法。测定结果如表2所示。
表2小儿氨酚黄那敏颗粒中胆红素含量
三、讨论
（一）关于薄层色谱
（1）合理选择提取条件
正常来说，提取溶剂的方式大多为超声提取，将溶剂中加入一定重量的硅藻土来进行超声提取，提取内容为猪去氧胆酸和人工牛黄中的胆酸，最后选择二氯甲烷和冰硫酸来进行提取，这种提取方式不会造成较大的干扰，所以效果较好。
（2）色谱坚实条件
选用的溶液为10%含量的磷钼酸乙醇，将其加热到105℃，并且保证斑点清晰，在自然光条件下分别在366nm和254nm的紫外灯下进行检视。
（二）高修奥液相色谱
（1）色谱柱选择
多种品牌的c18色谱柱都能够达到检定要求，并且都具有较好的分离度。
（2）定量的选择
在探索试验条件的时候我们已经发现，胆红素经常在时间延长的情况下转变为异构体的IIIa与VIIa，并且转化速度比较快，但是小儿氨酚黄那敏颗粒中的成分则转化较慢，三个异构体的峰面积只和虽然会在一定程度上保持稳定，但是由于其胆红素没有表示含量，所以三个异构体峰面积之和经常存在一些差异。胆红素在该药品之中是一项非常重要的含量测定成分，所以也是其质量测定标准的依据。按照国外先进水平的标准来看，应该将异构体IIIa和VIIa的含量控制在10%以内。随意最后选择胆红素的主峰IXa作为一个可行的指标来进行质量控制。
（3）流动相的选择
采用多种溶剂和不同比例进行流动相试验,发现以四氢呋喃-乙腈-0.1%醋酸铵(pH4.7)(42∶22∶36)为流动相峰形好,分离度好,出峰时间短。
参考文献
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