论文摘要
【目的】圣路易斯脑炎病毒（St. Louis encephalitis virus,SLEV）属于黄病毒科,是一种单股正链RNA病毒。黄病毒编码的非结构蛋白NS3在病毒复制以及多聚蛋白加工过程中起着重要作用,NS2B是其发挥作用的重要辅助因子。因此,NS2B-NS3蛋白酶复合物是抗病毒药物的重要靶标。本研究旨在构建SLEV NS2B-NS3蛋白酶的原核表达系统并建立其抑制剂的高通量筛选方法,从而发现其小分子抑制剂。【方法】通过PCR扩增SLEVNS2B-NS3蛋白的编码区,构建原核表达质粒;在大肠杆菌BL21（DE3）中,经异丙基硫代半乳糖苷（Isopropyl β-D-thiogalactoside）诱导得到可溶性的NS2B-NS3蛋白,并用镍亲和层析方法进行纯化;基于荧光共振能量转移（Fluorescence resonance energy transfer）技术检测NS2B-NS3蛋白酶活性,建立其抑制剂的高通量筛选平台。【结果】SLEV NS2B-NS3蛋白酶纯化程度高达95%以上,基于酶活测定的抑制剂筛选平台准确可行。对700多个上市药物进行筛选后,发现原花青素对SLEVNS2B-NS3蛋白酶具有明显的抑制活性。【结论】本研究为SLEVNS2B-NS3蛋白酶抑制剂提供了一种操作方便、高通量的筛选方法,并首次发现了原花青素具有抑制SLEV NS2B-NS3蛋白酶活性的功能,可以作为治疗SLEV感染的潜在靶向药物。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 周婷婷,高梦茹,杜梦繁,于凡,冯磊
关键词: 圣路易斯脑炎病毒,蛋白酶,丝氨酸蛋白酶活性,抑制剂,筛选
来源: 微生物学报 2019年04期
年度: 2019
分类: 基础科学,医药卫生科技
专业: 生物学,基础医学
单位: 江南大学无锡医学院,江南大学药学院
基金: 中央高校基本科研业务费专项资金(JUSRP11863),国家自然科学基金(81800430)~~
分类号: R373.31
DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20180256
页码: 668-677
总页数: 10
文件大小: 1432K
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标签：圣路易斯脑炎病毒论文; 蛋白酶论文; 丝氨酸蛋白酶活性论文; 抑制剂论文; 筛选论文;