鸡腺病毒血清4型变异株荧光定量PCR检测方法的建立

论文摘要

为建立一种快速、灵敏的Ⅰ群鸡腺病毒血清4型(FAdV4)变异株检测方法,针对FAdV4变异株NP株Hexon基因的保守序列设计1对特异引物,通过荧光定量PCR(QPCR)反应体系的优化,建立了FAdV4的QPCR检测方法。结果显示:该方法特异性强,除FAdV4变异株外均无其他非特异扩增;此外,该方法敏感度高,其检测下限为53.9 copies/μL;组内、组间变异系数均小于5%,重复性好。临床样品检测结果显示,建立的QPCR方法的FAdV4变异株检出率为56.5%,远高于常规PCR的检出率(21.7%)。可见,建立的QPCR方法可用于临床快速检测FAdV4变异株。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒、毒株以及主要试剂、仪器
•   1.2 引物的设计
•   1.3 病毒DNA提取、Hexon基因的扩增与纯化
•   1.4 pEASY-T1-Hexon质粒标准品的制备
•   1.5 QPCR反应体系的筛选与优化
•   1.6 标准曲线的绘制
•   1.7 FAdV4 QPCR方法的敏感性试验
•   1.8 FAdV4 QPCR方法的特异性试验
•   1.9 FAdV4 QPCR方法的重复性试验
•   1.1 0 临床样品的检测
• 2 结果
•   2.1 Hexon基因的碱基比对
•   2.2 Hexon基因的扩增
•   2.3 QPCR反应体系的优化
•   2.4 标准曲线的绘制
•   2.5 熔解曲线分析
•   2.6 FAdV4 QPCR方法的敏感性试验
•   2.7 FAdV4 QPCR方法的特异性试验
•   2.8 FAdV4 QPCR方法的重复性试验
•   2.9 临床样品的检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈媛,屈贵蜀,彭尧舜,黄瑞玲,许丽惠,王全溪

关键词: 鸡腺病毒血清型,变异株,荧光定量,诊断方法,基因

来源: 中国兽医科学 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 福建农林大学动物科学学院

基金: 福建省自然科学基金项目(2019J01658),福建农林大学科技发展基金项目(CXZX201789)

分类号: S852.65

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0133

页码: 1013-1018

总页数: 6

文件大小: 1816K

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