导读:本文包含了重组真核表达载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:转染,细胞,载体,基质,蛋白酶,酵母,肝细胞。
重组真核表达载体论文文献综述
夏庆,彭明兵,郑志菊,王伟,孙达权[1]（2019）在《Mmp-2重组真核表达载体的构建及MMP-2蛋白对肝癌细胞的作用机制探讨》一文中研究指出目的:构建人基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)基因重组真核表达载体,探讨MMP-2蛋白对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:以肝癌SMMC-7721细胞为研究模型,以基因重组技术构建pEYFP-Mmp-2重组真核表达载体,p EYFP-Mmp-2一过性转染模型细胞过表达MMP-2-YFP,siRNA转染沉默模型细胞内源性MMP-2表达,设立空白对照、MMP-2沉默对照组、MMP-2沉默组、过表达MMP-2融合蛋白对照组、过表达MMP-2融合蛋白组,划痕实验检测细胞迁移能力,侵袭小室实验检测细胞侵袭能力,钙蛋白酶(calcium-activated neutral protease,Calpain)特异性抑制剂Calpeptin抑制Calpain活性,蛋白印记实验检测MMP-2、MMP-2-YFP、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达变化。结果:成功构建人Mmp-2重组真核表达载体pEYFP-Mmp-2。pEYFP-Mmp-2转染过表达MMP-2融合蛋白组细胞高表达MMP-2-YFP。与MMP-2沉默对照组相比,MMP-2沉默组内源性MMP-2表达明显下调(P=0.000),细胞12 h、24 h及48 h迁移率明显降低(P=0.000或P=0.001),48 h侵袭率明显降低(P=0.004),E-cadherin表达明显上调,N-cadherin及Vimentin表达明显下调(P=0.000)。与过表达MMP-2融合蛋白对照组相比,过表达MMP-2融合蛋白组12 h、24 h及48 h迁移率明显增强(P=0.015或P=0.001),48 h侵袭率明显升高(P=0.011),细胞E-cadherin表达明显下调,N-cadherin及Vimentin表达明显上调(P=0.003或P=0.001)。Calpeptin预处理明显降低过表达MMP-2融合蛋白组细胞迁移率和侵袭率(P=0.000),上调E-cadherin,下调N-cadherin及Vimentin蛋白表达水平(P=0.000)。结论:本实验通过基因重组技术成功构建人Mmp-2重组真核表达载体pEYFP-Mmp-2,成功表达MMP-2-YFP融合蛋白;并发现MMP-2通过调节Calpain介导肝癌SMMC-7721细胞迁移、侵袭及EMT。(本文来源于《重庆医科大学学报》期刊2019年11期）
夏庆[2]（2019）在《MMP-2重组真核表达载体的构建及其在肝癌SMMC-7721细胞中的作用》一文中研究指出目的:构建人MMP-2重组真核表达载体,观察其表达蛋白对肝癌细胞迁移和侵袭的影响,并对上述作用机制进行探讨。方法:以肝癌SMMC-7721细胞为研究模型,基因重组技术构建重组真核表达载体pEYFP-MMP-2,质粒转染使模型细胞表达MMP-2融合蛋白(MMP-2-YFP),RNAi抑制模型细胞内源性MMP-2表达,设立空白对照(Control)、MMP-2沉默对照组(siCON)、MMP-2沉默组(siMMP-2)、MMP-2融合蛋白对照组(ovNC)、MMP-2融合蛋白组(ovMMP-2),划痕实验检测细胞迁移能力,侵袭小室实验检测细胞侵袭能力,Calpain特异性抑制剂calpeptin抑制Calpain活性,蛋白印记实验检测MMP-2、MMP-2融合蛋白、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达变化。结果:(1)构建MMP-2真核表达载体pEYFP-MMP-2,并在模型细胞中高表达MMP-2融合蛋白。(2)MMP-2 siRNA显着抑制模型细胞内源性MMP-2表达(p<0.01)。(3)与siCON相比,siMMP-2组12h、24h及48h迁移率明显降低,且48h侵袭率明显降低(p<0.01);与ovNC组相比,ovMMP-2组12h、24h及48h迁移率明显增强,且48h侵袭率明显升高(p<0.05)。(4)与siCON组相比,siMMP-2组E-cadherin蛋白表达明显上调,N-cadherin及Vimentin蛋白表达明显下调(p<0.01);与ovNC组相比,ovMMP-2组细胞E-cadherin蛋白表达明显下调,N-cadherin及Vimentin蛋白表达明显上调(p<0.01)。(5)Calpeptin处理可以显着降低ovMMP-2组的细胞迁移率和侵袭率(p<0.01)(6)Calpeptin处理明显上调ovMMP-2组细胞内E-cadherin蛋白表达,并下调N-cadherin和Vimentin(p<0.01)蛋白表达。结论:成功构建MMP-2真核表达载体pEYFP-MMP-2,并在肝癌细胞中高表达MMP-2融合蛋白;MMP-2融合蛋白可通过Calpain介导肝癌细胞的迁移、侵袭及EMT。(本文来源于《贵州医科大学》期刊2019-05-01）
袁超,孙鑫,吴燕芝,赵佳福,阮涌[3]（2018）在《鸡核转运受体β1蛋白重组真核表达载体的构建与亚细胞定位分析》一文中研究指出引言核转运受体β1(importin β1)蛋白是核输入蛋白家族中的一员,是真核生物中广泛分布的核质转运受体蛋白,其在细胞的基因转录、细胞周期调控以及增殖分化等过程中发挥着重要作用。近年来的研究发现,importin β1可直接介导携带不同类型NLS的靶蛋白进入细胞核,并且这种转运速度要高于importin α/β1共同介导的靶蛋白入核转运。鉴于importin β1蛋白在病毒蛋白细胞核定位以及病毒复制和致病方(本文来源于《中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会论文集》期刊2018-11-21）
张梦瑶,杨峰,刘开东,刘积凤,贺建宁[4]（2018）在《利用同源重组技术构建DKK1、BMP4真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究》一文中研究指出为了构建敖汉细毛羊DKK1、BMP4基因真核表达载体及单、共转染成纤维细胞后研究两基因表达量之间的变化,以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊。首先,通过RNA的提取反转录成c DNA参照Gen Bank中DKK1、BMP4基因序列信息分别设计1对含有同源臂的引物,通过PCR反应扩增获得DKK1、BMP4基因片段、利用So So试剂盒将目的片段连接到pcDNA3. 1真核表达载体上。鉴定正确后的pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4重组质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4单、共转染成纤维细胞,利用荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测DKK1、BMP4基因单转染和共转染在成纤维细胞中表达量的变化。结果显示,经酶切、测序鉴定pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4构建成功,成纤维细胞原代、传代培养良好,转染后细胞生长良好,经实时荧光定量PCR技术和Western Blot检测DKK1基因共转染成纤维细胞较单转染的表达量极显着下降(P <0. 01),BMP4基因的共转染较单转染表达量没有发生明显变化。成功构建了敖汉细毛羊DKK1、BMP4基因的真核表达载体,并且成功共转染成纤维细胞,DKK1基因的表达量明显下降,BMP4基因的表达量没发生明显变化,因而,推断BMP4基因抑制了DKK1基因的表达,DKK1基因对BMP4基因作用不明显,结果可为进一步研究其功能奠定基础。(本文来源于《华北农学报》期刊2018年05期）
黄志立,蒋伟,周烨,沈丽,王妍[5]（2018）在《重组人神经生长因子真核表达载体构建及其在毕赤酵母中的表达与纯化》一文中研究指出研究构建了重组人神经生长因子(Recombinant human nerve growth factor,rhNGF)的一种真核表达载体,并转化毕赤酵母GS115.在h NGF基因序列基础上对其进行毕赤酵母偏好密码子分析与改造,然后构建重组质粒p PIC9K-h NGF,经PCR、酶切及测序验证后,转化酵母,利用遗传霉素筛选出高效表达rhNGF的重组酵母.表达产物经SDS-PAGE分析,结果见一条与h NGF分子质量15.7kDa相当的条带,蛋白表达量约为52.86%.将表达产物经初步纯化和进一步精提后,纯度超过98%.分别以鼠NGF产品和人NGF标准品为对照,利用TF-1细胞/MTS比色法检测NGF活性,结果表明rh NGF具有良好的生物学活性,其活性和比活性分别为5.0U/m L和253U/mg,高于鼠NGF产品(2.6 U/mL,130U/mg),与hNGF标准品相当(5.0 U/mL,250 U/mg).(本文来源于《深圳职业技术学院学报》期刊2018年05期）
张梦瑶,杨峰,刘开东,刘积凤,柳楠[6]（2018）在《利用同源重组构建敖汉细毛羊BMPR1B真核表达载体及在成纤维细胞中表达量的研究》一文中研究指出本研究旨在利用同源重组技术构建敖汉细毛羊BMPR1B基因的表达载体及转染成纤维细胞后基因的表达量变化。以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊。首先,提取RNA并反转录成cDNA,参照GenBank中BMPR1B基因序列信息以及pcDNA3.1序列设计1对含有同源臂的引物,通过PCR反应扩增获得BMPR1B基因片段、利用SoSo试剂盒将目的片段连接到pcDNA3.1真核表达载体上。鉴定pcDNA3.1-BMPR1B表达载体构建成功后,转化大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的表达载体pcDNA3.1-BMPR1B转染成纤维细胞,利用实时荧光定量PCR技术和Western blot技术检测BMPR1B基因在成纤维细胞中表达量的变化。结果表明:经酶切、测序鉴定pcDNA3.1-BMPR1B表达载体构建成功,并且转染成纤维细胞后BMPR1B基因的mRNA、蛋白表达量均明显升高,且转染组的表达量极显着高于对照组(P<0.01)。本研究利用同源重组技术成功构建了敖汉细毛羊BMPR1B基因表达载体,并且成功转染成纤维细胞,基因在细胞中过表达,结果可为进一步研究其功能奠定基础。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2018年09期）
张梦瑶,杨峰,刘开东,刘积凤,柳楠[7]（2018）在《利用同源重组构建BMP6基因真核表达载体及在成纤维细胞中表达量的研究》一文中研究指出本研究旨在利用同源重组技术构建敖汉细毛羊BMP6基因表达载体及转染成纤维细胞后基因的表达量变化。实验以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊。首先,提取RNA并反转录成c DNA,参照Gen Bank中BMP6基因序列信息及pc DNA3.1载体序列设计1对含有同源臂的引物,通过PCR扩增获得BMP6基因片段、利用So So试剂盒将目的片段连接到pc DNA3.1真核表达载体上。鉴定pc DNA3.1-BMP6表达载体构建成功后,转化大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的pc DNA3.1-BMP6表达载体转染成纤维细胞,利用实时荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测BMP6基因在成纤维细胞中表达量的变化。结果表明:经酶切、测序鉴定pc DNA3.1-BMP6表达载体构建成功,并且转染成纤维细胞后BMP6基因的m RNA、蛋白表达量均明显升高,且转染组的表达量极显着高于对照组(P<0.01)。在本实验条件下,利用同源重组技术成功构建了敖汉细毛羊BMP6基因表达载体,并且成功转染成纤维细胞,基因在细胞中过表达,为进一步研究其功能奠定基础。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2018年08期）
代振新,陈伟,韩雪,许厚强,吴国文[8]（2018）在《关岭牛pEGFP-N_3-UCP3重组真核表达载体的构建》一文中研究指出旨在构建不含CMV启动子的p EGFP-N3-UCP3重组真核表达载体。利用PCR技术克隆UCP3基因启动子,扩增不含CMV区的p EGFP-N3载体片段,将UCP3启动子与该载体经连接、转化后,挑取阳性克隆进行PCR鉴定及测序鉴定。结果表明,成功地构建了重组载体p EGFP-N3-UCP3,为UCP3基因转录调控机制的研究奠定了基础。(本文来源于《畜牧与饲料科学》期刊2018年07期）
宋旭飞,董永红,徐钧,沈文涛,周鹏[9]（2018）在《重组人肝细胞生长因子真核表达载体的构建》一文中研究指出目的构建重组人肝细胞生长因子(rhHGF)的真核表达载体,为后续毕赤酵母蛋白高效表达提供基础。方法根据酵母表达偏爱密码子合成rhHGFcDNA全长序列,将rhHGF和pGAPZαA质粒双酶切后行连接转化,构建穿梭载体pGAPZαA-rhHGF,并鉴定。结果重组真核表达载体pGAPZA-rhHGF经限制性内切酶分析,与理论值相符,测序结果未见碱基变异。结论成功构建了pGAPZαA-rhHGF真核表达载体,为后续毕赤酵母高效表达rhHGF蛋白提供了可行性。(本文来源于《中国药物与临床》期刊2018年02期）
钱世宁,朱小飞,季明德,董杰,杨学文[10]（2018）在《含人SOX18基因真核表达载体的构建及其重组蛋白诱导血管内皮细胞增殖的研究》一文中研究指出目的:构建含人SOX(SRY related high mobility group box)18的重组表达质粒,并研究其对血管内皮细胞增殖能力的影响。方法:通过RT-PCR技术从血管内皮细胞中扩增SOX18编码基因序列,将其插入真核表达载体pSec Tag-2B构建重组表达质粒pST-SOX18,分别转染人胚肾上皮细胞HEK293T和血管内皮细胞,通过免疫印迹技术检测SOX18的蛋白表达情况;进一步通过CCK-8实验检测SOX18对血管内皮细胞增殖能力的影响。结果:成功构建重组质粒p ST-SOX18,重组蛋白能够在HEK293T和血管内皮细胞中表达;SOX18的过表达促使血管内皮细胞合成血管内皮生长因子(VEGF),促进血管内皮细胞增殖。结论:SOX18重组蛋白能够促进血管内皮细胞增殖。(本文来源于《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊2018年02期）
重组真核表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:构建人MMP-2重组真核表达载体,观察其表达蛋白对肝癌细胞迁移和侵袭的影响,并对上述作用机制进行探讨。方法:以肝癌SMMC-7721细胞为研究模型,基因重组技术构建重组真核表达载体pEYFP-MMP-2,质粒转染使模型细胞表达MMP-2融合蛋白(MMP-2-YFP),RNAi抑制模型细胞内源性MMP-2表达,设立空白对照(Control)、MMP-2沉默对照组(siCON)、MMP-2沉默组(siMMP-2)、MMP-2融合蛋白对照组(ovNC)、MMP-2融合蛋白组(ovMMP-2),划痕实验检测细胞迁移能力,侵袭小室实验检测细胞侵袭能力,Calpain特异性抑制剂calpeptin抑制Calpain活性,蛋白印记实验检测MMP-2、MMP-2融合蛋白、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达变化。结果:(1)构建MMP-2真核表达载体pEYFP-MMP-2,并在模型细胞中高表达MMP-2融合蛋白。(2)MMP-2 siRNA显着抑制模型细胞内源性MMP-2表达(p<0.01)。(3)与siCON相比,siMMP-2组12h、24h及48h迁移率明显降低,且48h侵袭率明显降低(p<0.01);与ovNC组相比,ovMMP-2组12h、24h及48h迁移率明显增强,且48h侵袭率明显升高(p<0.05)。(4)与siCON组相比,siMMP-2组E-cadherin蛋白表达明显上调,N-cadherin及Vimentin蛋白表达明显下调(p<0.01);与ovNC组相比,ovMMP-2组细胞E-cadherin蛋白表达明显下调,N-cadherin及Vimentin蛋白表达明显上调(p<0.01)。(5)Calpeptin处理可以显着降低ovMMP-2组的细胞迁移率和侵袭率(p<0.01)(6)Calpeptin处理明显上调ovMMP-2组细胞内E-cadherin蛋白表达,并下调N-cadherin和Vimentin(p<0.01)蛋白表达。结论:成功构建MMP-2真核表达载体pEYFP-MMP-2,并在肝癌细胞中高表达MMP-2融合蛋白;MMP-2融合蛋白可通过Calpain介导肝癌细胞的迁移、侵袭及EMT。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组真核表达载体论文参考文献
[1].夏庆,彭明兵,郑志菊,王伟,孙达权.Mmp-2重组真核表达载体的构建及MMP-2蛋白对肝癌细胞的作用机制探讨[J].重庆医科大学学报.2019
[2].夏庆.MMP-2重组真核表达载体的构建及其在肝癌SMMC-7721细胞中的作用[D].贵州医科大学.2019
[3].袁超,孙鑫,吴燕芝,赵佳福,阮涌.鸡核转运受体β1蛋白重组真核表达载体的构建与亚细胞定位分析[C].中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会论文集.2018
[4].张梦瑶,杨峰,刘开东,刘积凤,贺建宁.利用同源重组技术构建DKK1、BMP4真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究[J].华北农学报.2018
[5].黄志立,蒋伟,周烨,沈丽,王妍.重组人神经生长因子真核表达载体构建及其在毕赤酵母中的表达与纯化[J].深圳职业技术学院学报.2018
[6].张梦瑶,杨峰,刘开东,刘积凤,柳楠.利用同源重组构建敖汉细毛羊BMPR1B真核表达载体及在成纤维细胞中表达量的研究[J].中国畜牧杂志.2018
[7].张梦瑶,杨峰,刘开东,刘积凤,柳楠.利用同源重组构建BMP6基因真核表达载体及在成纤维细胞中表达量的研究[J].中国畜牧杂志.2018
[8].代振新,陈伟,韩雪,许厚强,吴国文.关岭牛pEGFP-N_3-UCP3重组真核表达载体的构建[J].畜牧与饲料科学.2018
[9].宋旭飞,董永红,徐钧,沈文涛,周鹏.重组人肝细胞生长因子真核表达载体的构建[J].中国药物与临床.2018
[10].钱世宁,朱小飞,季明德,董杰,杨学文.含人SOX18基因真核表达载体的构建及其重组蛋白诱导血管内皮细胞增殖的研究[J].南京医科大学学报(自然科学版).2018
论文知识图
