导读:本文包含了双分子荧光互补论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:米曲霉,双分子荧光互补,蛋白质相互作用
双分子荧光互补论文文献综述
庄淼,张智敏,王宝腾,金锋杰[1]（2019）在《应用双分子荧光互补技术分析米曲霉Fus3与Ste12之间的蛋白互作》一文中研究指出【背景】双分子荧光互补(Bimolecularfluorescencecomplementation,BiFC)在水稻恶苗病菌(Fusarium fujikuroi)等微生物蛋白互作中的应用已有报道,但在工业菌株米曲霉(Aspergillus oryzae)中还未见应用。【目的】探究米曲霉中Fus3和Ste12蛋白在生长发育中可能存在的相互作用关系,建立在米曲霉活细胞中检测蛋白互作的方法,即BiFC体系。该系统可用于特异性、可视化米曲霉目标蛋白在活细胞中的定位,并且可以更加直观地探究蛋白之间是否存在相互作用。【方法】利用MultisiteGateway复杂载体构建技术,使用切开的绿色荧光蛋白,将荧光蛋白分子的两个片段N端和C端分别与米曲霉Fus3和Ste12蛋白融合,对获得的转化株进行荧光观察。通过BiFC系统检测蛋白之间的相互作用。【结果】成功转化的米曲霉菌丝中观察到荧光,Fus3和Ste12在米曲霉中存在相互作用。【结论】通过BiFC技术证实蛋白质Fus3和Ste12在无性繁殖菌株米曲霉体内发生互作,暗示它们通过互作可能参与除了有性生殖之外的其他细胞功能,并为米曲霉蛋白互作功能研究提供一种新的检测技术和方法。(本文来源于《微生物学通报》期刊2019年02期）
任晓曦,赵云,韩玉坤,郑焱,杨慧[2]（2018）在《双分子荧光互补分析法检测α-突触核蛋白的聚集及在细胞间的传播》一文中研究指出目的利用双分子荧光互补(BiF C)分析检测α-突触核蛋白的聚集及在细胞间的传播。方法首先利用高灵敏的荧光素酶human Gaussiaprinceps luciferase作为报告蛋白,将其N端(1～93)与C端(94～169)分别与α-突触核蛋白的C端融合,记作L1和L2,并将L1和L2同时在SK-N-SH细胞中共同表达,结果显示BiFC分析可以特异地检测出α-突触核蛋白的聚集。接下来将L1和L2分别在SK-N-SH细胞中表达,收集L1的培养基加入到表达L2的细胞中。同理,收集L2的培养基加入到表达L1的细胞中。结果 BiFC分析可检测到α-突触核蛋白在细胞间传播。结论 BiFC可有效检测α-突触核蛋白的聚集及在细胞间传播。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2018年23期）
严闯[3]（2018）在《基于mNeonGreen和mNeptune的双分子荧光互补系统的研究》一文中研究指出研究活细胞内的蛋白质-蛋白质相互作用对于了解生命的活动过程具有重要意义。双分子荧光互补(Bimolecular Fluorescence Complementation,BiFC)技术是近些年来发展起来的广泛应用于研究体内蛋白质互作及其定位的新技术。与酵母双杂交、蛋白质片段互补、生物发光共振能量转移、荧光共振能量转移等用于研究体内蛋白质相互作用的技术相比,BiFC技术具有灵敏度高、噪声低和易于操作等优势。但是,荧光蛋白生色团的缓慢成熟限制了 BiFC技术应用于细胞瞬时或动态相互作用的可视化研究。同时,目前已用于BiFC技术的荧光蛋白中也只有少数(Cerulean、Citrine、Venus等)可以在生理温度(37 ℃)下发生荧光互补,所以亟需发展新的BiFC系统。本研究基于Branchiostoma lanceoatumm来源的mNeonGreen蛋白发展了 一个迄今为止亮度最强且成熟时间最短的BiFC系统。mNeonGreen蛋白是由四聚体LanYFP蛋白改造而来的单体黄绿色荧光蛋白,其亮度比常用的绿色和黄色荧光蛋白亮1.5至3倍,且该荧光蛋白在37 ℃下的氧依赖性成熟时间是目前所报导的荧光蛋白中最短的(小于10分钟)。本研究首先根据mNeonGreen的基因序列通过密码子优化得到了人源化的mNeonGreen基因,再根据mNeonGreen的晶体结构将其分别从叁个位点切开(Ala134-Asp135、158Asp-159Lys、Asn 173-Gly 174),通过同向平行亮氨酸拉链(bFos和bJun)在HEK 293T细胞中筛选到Asn173-Gly174是最佳拆分位点,所形成的两个片段能够产生很强的荧光信号(另外两种拆分方式无荧光信号),从而建立了基于mNeonGreen的BiFC系统。该系统缩短了 BiFC系统的响应时间,提高了 BiFC系统的灵敏度,有利于将BiFC技术应用于活细胞瞬时或动态相互作用可视化的研究。本研究的第二部分工作针对活体成像的“近红外(NIR)光学窗口(650-900 nm)”问题,深入研究并优化了波长较长(600/651 nm)且在37 ℃下成熟时间较短(T1/2≈28 min)的红色 BiFC 系统。本研究参照 mNeptune(600/651 nm)BiFC系统,对mNeptune二代(599/651 nm)荧光蛋白在同样的位点(155-156)进行了拆分,发现该系统荧光强度远弱于mNeptune 一代BiFC系统。于是对拆分后融合着相互作用蛋白的不同N肽段(bJun-N1、bJun-N2)和C肽段(bFos-C1、bFos-C2)进行了重新组合(bJun-N1+ bFos-C1、bJun-N1+ bFos-C2、bJun-N2+bFos-C1、bJun-N2+bFos-C2)。结果发现:重组后的 bJun-N1+bFos-C2BiFC 系统亮度最强,是原有mNeptune 一代BiFC系统(bJun-N1+ bFos-C1)亮度的两倍。为了探究荧光亮度提高的机理,体外纯化了 bJun-N1+bFos-C1和bJun-N1+bFos-C2蛋白,利用圆二色光谱测定其二级结构,结果表明这两种BiFC系统重构后的蛋白在二级结构上并无显着差异,因此该新的BiFC系统荧光强度提高的机理还有待于进一步的研究。此外,本研究还利用以上两种新建立的BiFC系统,针对被拆分后的荧光蛋白与相互作用蛋白(亮氨酸拉链)的融合方式进行了研究。结果表明,当以同向平行亮氨酸拉链bFos和bJun作为相互作用蛋白时,bJun-N+bFos-C的融合方式优于N-bJun+bFos-C及bJun-N+C-bFos的融合方式。该发现为bFos和bJun这对相互作用蛋白在BiFC系统中的应用提供了指导。(本文来源于《湖北大学》期刊2018-05-01）
张静[4]（2018）在《核酸链诱导的双分子荧光互补》一文中研究指出双分子荧光互补(Bimolecularfluorescencecomplementation,BiFC)具体是指将两个不具备荧光效应的荧光蛋白的互补片段分别和具有相互作用的蛋白形成融合蛋白并在细胞内共表达后重新形成荧光的现象。当某些特定的荧光分子片段作为分子标记分别与两个能够发生相互作用的蛋白质形成融合蛋白并在细胞内一起表达时,具有相互作用的两个蛋白的结合会使得这两个荧光片段重新组合形成荧光复合体并且恢复荧光效应。该技术通常被用来研究蛋白质间的相互作用。本论文将用此方法验证具有特异性识别的蛋白质是否与目标核酸链相结合。PUF家族蛋白是一类高度保守的RNA结合蛋白,存在于大多数的真核生物中。PUF蛋白通过与目标RNA的3'非翻译区的特异性序列相结合来调节mRNA的表达水平。所有PUF蛋白都含有特定的序列,即RNA结合域,也称为PUF蛋白域。PUF蛋白域对RNA碱基识别具有特异性,如半胱氨酸、谷氨酰胺与腺嘌呤相识别,天冬酿胺、谷氨酰胺与尿嘧啶相识别,丝氨酸和谷氨酸盐与鸟嘌呤相识别,丝氨酸和精氨酸识别胞嘧啶。人类PUF蛋白PUM1与对应RNA复合体的晶体结构证明特定的PUF螺旋识别特定的碱基,这样简洁的识别模式暗示了PUM1的识别序列可被定点诱变。而已有的实验结果表明,这些被定点诱变的PUF蛋白可以识别胞嘧啶并且和原始蛋白同样紧密的结合于RNA上。首先我们构建了 CEYFP-PUF1和PUF2-NYFP两个融合蛋白表达载体分别在大肠杆菌中进行表达纯化。我们成功构建了体外BiFC体系,明确了两个蛋白能够结合到含有识别序列的同一核酸链并且对两个蛋白识别位点之间的间距有了初步的研究。该结果表明,特别设计的PUF蛋白能够在体外准确地识别其特定的核酸序列。其次,我们在模式植物拟南芥中选定GUS基因为目标,设计了相应的PUF蛋白,实验结果表明,实验组GUS基因的表达量下降到了对照组的0.1%以下。有趣的是,其他含有该PUF蛋白识别序列的拟南芥内源基因的表达量并不受PUF蛋白的影响。然而,在哺乳动物细胞内,PUF并没有对HBZ基因的表达产生影响。这可能表明在不同的生物内PUF对基因的调节机制并不一致(本文来源于《浙江师范大学》期刊2018-03-09）
刘文晓,闫朝君,宋质银[5]（2017）在《双分子荧光互补法(BiFC)精确MICOS复合物精细结构》一文中研究指出在真核细胞中,线粒体是能量合成与物质代谢的重要场所。线粒体是双层膜细胞器,内膜向内折迭形成嵴,其中MICOS复合物对于线粒体嵴的形成起着重要作用。Mic60、Mic19和Mic10是MICOS复合物核心组成蛋白。采用双分子荧光互补技术(BiFC,bimolecular fluorescence complementation)方法在活细胞中直接观察研究MICOS复合物中各组成蛋白之间的相互作用关系。发现Mic60可以与Mic19发生较强的相互作用,而Mic60与Mic10的相互作用较弱。(本文来源于《安徽农业大学学报》期刊2017年04期）
谢亮,王琼,程小玲,彭静,王美[6]（2017）在《一种通过GFP结合蛋白强化叁分子荧光互补方法的建立》一文中研究指出[目的]将改造后的GFP(super-fold GFP,简写为sf GFP)作为叁分子荧光互补技术的基础,通过应用多种GFP结合蛋白(GFP binding protein,GBP),筛选并验证可强化荧光互补作用的GFP结合蛋白。[方法]将sf GFP拆分为叁部分(GFP1-9,GFP10和GFP11),建立GFP叁分子荧光互补技术体系,利用多种GFP结合蛋白对GFP叁分子荧光互补技术进行试验,通过观察荧光变化筛选可强化荧光互补作用的GFP结合蛋白。[结果]发现DARPin-GFP、GFP-enhancer和Nbsf GFP这叁种GFP结合蛋白能够与GFP共定位并对GFP叁分子重组装有增强效果,其中GFP-enhancer与Nbsf GFP增强效果约为原荧光强度4倍,DARPin-GFP约为2倍。[结论]GFP结合蛋白可作为一种新手段,使以GFP叁分子荧光互补技术为基础的蛋白质-蛋白质相互作用研究的检测效率和灵敏度得到提高。(本文来源于《生物技术》期刊2017年03期）
胡盼,米荣升,黄燕,陆珂,贾海燕[7]（2016）在《猪附红细胞体HspA1与DnaJ相互作用的双分子荧光互补研究》一文中研究指出猪附红细胞体病(eperythrozoonosis)是由附红细胞体(Mycoplasma spp.)寄生于红细胞表面、血浆及骨髓内而引起的一种传染性疾病,临床上以发热、贫血、黄疸为主要特征,给人的健康和畜牧业的发展造成了巨大的危害。猪附红细胞体Dna K样蛋白Hsp A1属于热休克蛋白Hsp70家族,具有免疫功能、ATPase活性和膜表面可接触性,很可能参与黏附到红细胞表面上。在大肠埃希氏菌中,Dna J的J-结构域能特异地与Dna K结合,刺激Dna K的ATP酶活性,协同完成对底物蛋白的ATP依赖的结合和释放。目前尚未见附红细胞体Dna J与Hsp A1一起组成Dna K/Dna J系统,在新合成蛋白的折迭和装配、蛋白聚集的抑制、已聚集蛋白的溶解和重折迭、蛋白的跨膜转位和降解中发挥重要作用的报道。为研究猪附红细胞体Dan K样蛋白Hsp A1与Dna J是否存在相互作用,采用双分子荧光互补技术进行检测。利用生物信息学软件预测Hsp A1的B细胞抗原表位和功能结构域,选取具有功能结构域且抗原表位富集的第388-609位区域为Hsp A1表位区。分别对Hsp A1编码基因a1、Hsp A1表位区编码基因a1-epi进行扩增,并克隆到p Bi FC-VC155载体中,同时将Dna J编码基因dnaj克隆到p Bi FC-VN155中,分别与上述重组质粒共转染293T细胞。结果成功地构建了含Hsp A1编码基因a1、Hsp A1表位区编码基因a1-epi、Dna J编码基因dnaj的真核重组表达质粒p Bi FC-VC155-a1、p Bi FC-VC155-a1-epi和p Bi FC-VN155-dnaj,共转染的293T细胞在荧光显微镜下均观察到绿色荧光,表明Hsp A1和Hsp A1表位区均与Dna J存在相互作用,且很可能存在2个作用位点。本研究为进一步探讨Hsp A1的生物学功能和作用机制提供了新的思路。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会论文集》期刊2016-07-20）
曹建美[8]（2016）在《双分子荧光互补技术(BiFC)分析玉米MAPK5与bZIP72蛋白的相互作用》一文中研究指出[目的]分析玉米MAPK5与b ZIP72蛋白之间的相互作用。[方法]构建双分子荧光互补表达载体p N-MAPK5和p C-b ZIP72,应用基因枪轰击洋葱表皮细胞瞬时表达,在激光共聚焦显微镜下观察MAPK5与b ZIP72蛋白相互作用产生的荧光信号。[结果]ZmMAPK5与Zmb ZIP72的Bi FC融合载体同时轰击洋葱表皮细胞,细胞核中能发出黄色荧光。[结论]Zm MAPK5与Zmb ZIP72在植物细胞核内相互作用。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2016年14期）
胡盼,米荣升,黄燕,陆珂,贾海燕[9]（2016）在《猪附红细胞体HspA1与DnaJ相互作用的双分子荧光互补的研究》一文中研究指出为研究猪附红细胞体DnaK样蛋白HspA1与DnaJ是否存在相互作用,采用双分子荧光互补技术进行检测。利用生物信息学软件预测HspA1的B细胞抗原表位和功能结构域,选取具有功能结构域且抗原表位富集的第388~609位区域为HspA1表位区。分别对HspA1编码基因a1、HspA1表位区编码基因a1-epi进行扩增,并克隆到pBiFC-VC155载体中,同时将DnaJ编码基因dnaj克隆到pBiFC-VN155中,分别与上述重组质粒共转染293T细胞。结果显示,成功地构建了含HspA1编码基因a1、HspA1表位区编码基因a1-epi、DnaJ编码基因dnaj的真核重组表达质粒pBiFC-VC155-a1、pBiFC-VC155-a1-epi和pBiFC-VN155-dnaj,共转染的293T细胞在荧光显微镜下均能观察到绿色荧光,表明HspA1和HspA1表位区均与DnaJ存在相互作用。本研究为进一步探讨HspA1的生物学功能和作用机制提供了新的思路。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2016年05期）
崔喜艳,赵吉元,胡广宇,窦瑶,刘相国[10]（2015）在《玉米AGPase-bt2与GPN1蛋白互作的双分子荧光互补技术研究》一文中研究指出【目的】解析玉米淀粉合成限速酶ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase-bt2)与糖酵解关键酶甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GPN1)在植物体内是否存在相互作用。【方法】首先克隆获得AGPase-bt2和GPN1基因,然后采用双分子荧光互补技术(BiFC),构建326-CYCHA-AGPase-bt2和326-CYNEE-GPN1双分子荧光表达载体,转化农杆菌EHA105,并用2种载体共同瞬时侵染烟草叶肉细胞,48h后在激光共聚焦显微镜下观察AGPase-bt2与GPN1的相互作用。【结果】AGPase-bt2基因长1 428bp,GPN1基因长1 497bp。双酶切鉴定结果表明,326-CYCHA-AGPasebt2、326-CYNEE-GPN1载体构建正确;PCR结果证实,植物表达载体成功转化到农杆菌EHA105中;携带有共转化基因的烟草叶肉细胞在激光共聚焦显微镜下观察到明显的黄色荧光现象,且黄色荧光与叶绿体自发的红色荧光位置重合。【结论】AGPase-bt2与GPN1在植物细胞中真实地存在蛋白互作。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2015年06期）
双分子荧光互补论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的利用双分子荧光互补(BiF C)分析检测α-突触核蛋白的聚集及在细胞间的传播。方法首先利用高灵敏的荧光素酶human Gaussiaprinceps luciferase作为报告蛋白,将其N端(1～93)与C端(94～169)分别与α-突触核蛋白的C端融合,记作L1和L2,并将L1和L2同时在SK-N-SH细胞中共同表达,结果显示BiFC分析可以特异地检测出α-突触核蛋白的聚集。接下来将L1和L2分别在SK-N-SH细胞中表达,收集L1的培养基加入到表达L2的细胞中。同理,收集L2的培养基加入到表达L1的细胞中。结果 BiFC分析可检测到α-突触核蛋白在细胞间传播。结论 BiFC可有效检测α-突触核蛋白的聚集及在细胞间传播。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
双分子荧光互补论文参考文献
[1].庄淼,张智敏,王宝腾,金锋杰.应用双分子荧光互补技术分析米曲霉Fus3与Ste12之间的蛋白互作[J].微生物学通报.2019
[2].任晓曦,赵云,韩玉坤,郑焱,杨慧.双分子荧光互补分析法检测α-突触核蛋白的聚集及在细胞间的传播[J].中国老年学杂志.2018
[3].严闯.基于mNeonGreen和mNeptune的双分子荧光互补系统的研究[D].湖北大学.2018
[4].张静.核酸链诱导的双分子荧光互补[D].浙江师范大学.2018
[5].刘文晓,闫朝君,宋质银.双分子荧光互补法(BiFC)精确MICOS复合物精细结构[J].安徽农业大学学报.2017
[6].谢亮,王琼,程小玲,彭静,王美.一种通过GFP结合蛋白强化叁分子荧光互补方法的建立[J].生物技术.2017
[7].胡盼,米荣升,黄燕,陆珂,贾海燕.猪附红细胞体HspA1与DnaJ相互作用的双分子荧光互补研究[C].中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会论文集.2016
[8].曹建美.双分子荧光互补技术(BiFC)分析玉米MAPK5与bZIP72蛋白的相互作用[J].安徽农业科学.2016
[9].胡盼,米荣升,黄燕,陆珂,贾海燕.猪附红细胞体HspA1与DnaJ相互作用的双分子荧光互补的研究[J].中国兽医科学.2016
[10].崔喜艳,赵吉元,胡广宇,窦瑶,刘相国.玉米AGPase-bt2与GPN1蛋白互作的双分子荧光互补技术研究[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2015