导读:本文包含了酵母系统表达论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:酵母,系统,蛋白,大肠杆菌,病毒,基因,质粒。
酵母系统表达论文文献综述
李秀义,高冬梅,张守柱,潘继文,温和[1]（2019）在《风疹病毒E1抗原特异性片段在酵母系统中重组表达及应用》一文中研究指出目的 利用真核系统对E1蛋白进行表达并纯化,建立一种以重组E1蛋白为包被抗原的风疹病毒抗体ELISA检测方法。方法 通过生物信息学预测E1优势抗原表位,根据真核系统表达的特点进行序列优化,全基因合成获得风疹病毒E1优势片段核酸序列,构建真核表达载体,在真核系统内进行诱导表达并纯化,用Western blot证实E1蛋白的抗原性。建立ELISA检测系统,并初步检测100份临床血清标本。结果 SDS-PAGE证实重组E1蛋白在酵母中高表达,Western blot证实该E1蛋白具有良好的抗原性,成功建立了检测IgM间接ELISA方法,对临床血清标本的初步检测显示该试剂盒具有较好的敏感性和特异性。结论 本ELISA检测试剂有较高敏感性和较强的特异性,可进一步开发用于检测风疹病毒的早期感染的试剂盒。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2019年08期）
尹曼曼,楼觉人[2]（2019）在《利用毕赤酵母表达系统表达兔出血症病毒样颗粒及其免疫原性研究》一文中研究指出为研究毕赤酵母表达的兔病毒性出血症病毒(RHDV)病毒样颗粒(VLP)的免疫保护性,本研究将RHDV VP60的基因克隆到pPIC3.5K载体中,并导入毕赤酵母KM71菌株中,重组菌株经发酵和甲醇诱导,通过western blot检测目的蛋白的表达;透射电镜观察表达产物是否组装形成VLP;并通过动物试验评估VLP的免疫原性和攻毒保护效果。Western blot结果显示VP60蛋白能够在酵母内表达,电镜下观察到表达的VP60能够自发装配成大小均一的颗粒,与天然RHDV大小相当,约为30 nm～40 nm,表明表达的VP60可以自发组装成VLP。动物实验结果表明:表达的VLP与佐剂MONTANIDE GEL 01 PR混合后免疫实验兔,能够刺激实验兔产生保护性抗体,免疫后21 d攻毒,对实验兔的保护率达100%,且保护性抗体至少可以持续6个月。本研究利用毕赤酵母表达了RHDV的VLP,为研制RHDV亚单位疫苗奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年03期）
张雅雯[3]（2018）在《大肠杆菌与毕赤酵母系统表达hTGF-β1的研究》一文中研究指出目的:TGF-β1是TGF-β超家族中的成员之一,在胚胎发育、肿瘤的发生发展及组织创伤愈合等方面起着重要作用,20多年来科学家们对其研究热忱从未消退。皮肤色素过度沉着长期以来始终是困扰女性皮肤审美的问题之一,近来有文献报道TGF-β1是脂肪干细胞发挥美白作用的重要角色,另也有文献报道TGF-β1可加速酪氨酸酶(黑色素生成限速酶)的降解从而减少黑色素的生成。由此大胆设想,通过局部用药抑制皮肤色素过度沉着可能是TGF-β1在现有功能之外的另一有较大潜在应用价值的领域,因此,采用基因工程手段建立其高效生产方法是实现TGF-β1应用的基础。本实验通过构建hTGF-β1两种不同重组质粒,分别转化至大肠杆菌及毕赤酵母表达宿主对其表达进行研究,并利用小鼠黑色素瘤细胞建立重组hTGF-β1抑制黑色素生成活性的评价体系,旨在建立完善的高效制备重组hTGF-β1的方法,为其在更多领域的开发与应用奠定基础。方法:1、重组hTGF-β1在大肠杆菌系统中的构建与表达采用大肠杆菌偏爱密码子优化hTGF-β1的编码序列,首尾两端引入酶切位点及保护碱基。PCR法扩增目的基因,并同时对插入片段及表达载体pET21b进行双酶切,体外连接将插入片段插入表达载体相应位点获得重组质粒。热击法将重组质粒转化至克隆宿主E.coli DH5α并进一步转化至表达宿主E.coli BL21(DE3),SDS-PAGE电泳分析,筛选高表达工程菌并确定目的蛋白的表达形式。超声破碎获得包涵体并用8 mol/L urea将其裂解,利用弱阳离子交换层析及分子筛层析法对包涵体蛋白进行纯化,并用稀释法对包涵体蛋白进行复性。2、重组hTGF-β1/C77S在毕赤酵母系统中的构建与表达将hTGF-β1成熟肽中第77位半胱氨酸突变为丝氨酸,按毕赤酵母偏爱密码子优化hTGF-β1/C77S的编码序列,首端引入保护碱基、酶切位点及信号肽基因,末端引入His标签、酶切位点及保护碱基。PCR扩增目的基因,双酶切法构建重组质粒pGAPzαA-hTGF-β1/C77S。Xho I酶线性化重组质粒经电击法转化至表达宿主Pichia X33,高抗性平板筛选高拷贝重组子,PCR法鉴定重组子,并利用SDS-PAGE、免疫点印迹、Weston Blot分析表达情况。3、重组hTGF-β1的生物学活性检测MTT法检测制备出的hTGF-β1对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞增殖抑制的影响,并采用碱裂解法检测其有无抑制B16-F10细胞黑色素生成的生物活性。结果:1、利用大肠杆菌表达系统,成功将hTGF-β1成熟肽编码序列克隆至表达载体并筛选出高表达工程菌,通过层析柱分离纯化得到纯度95%以上包涵体蛋白,经稀释复性后得到了性质稳定的hTGF-β1溶液。2、利用毕赤酵母表达系统,成功将hTGF-β1/C77S编码序列克隆至表达载体pGAPzαA并转化至毕赤酵母X33中,Weston Blot结果表明重组hTGF-β1单体可在毕赤酵母中有效表达,其中目的蛋白总表达量的20%左右可被有效分泌至胞外。3、MTT结果表明,重组hTGF-β1对小鼠B16-F10细胞无增殖或抑制作用;黑色素生成抑制实验结果表明,重组hTGF-β1具有抑制黑色素生成的活性。结论:本研究证明了重组hTGF-β1均可在大肠杆菌及毕赤酵母中表达,并成功建立了利用大肠杆菌表达系统制备重组hTGF-β1的方法,并通过细胞实验证明了制备出的hTGF-β1具有黑色素生成的抑制活性。(本文来源于《广东药科大学》期刊2018-03-20）
田晓娟[4]（2018）在《酵母表达系统研究概述》一文中研究指出目前常用的外源基因表达系统主要分为两类:原核表达系统和真核表达系统。前者主要包括大肠杆菌表达系统和枯草杆菌表达系统,后者一般包括酵母表达系统、昆虫/杆状病毒表达系统、哺乳动物细胞表达系统以及新兴的转基因植物表达系统等。在这众多的表达系统中酵母表达系统因其培养比较方便、简单、价格低廉、外源蛋白表达量高、表达的蛋白活性好、能进行翻译后修饰等诸多优点脱颖而出,成为目前最主要的外源基因表达系统。概述了常见的几种酵母表达系统的特点,并对发酵过程中影响外源蛋白表达量的因素做了探讨,以期为人们表达重组蛋白时选择合适的表达系统和获得高效的表达产物提供帮助。(本文来源于《陇东学院学报》期刊2018年01期）
胡晓悦,周峻岗,余垚,吕红,HU,Xiaoyu[5]（2017）在《马克斯克鲁维酵母表达系统菊粉酶启动子的改造及活性研究》一文中研究指出马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)作为一种食品安全级酵母,具有生长快,生物量高等特点,是一种新型的重组蛋白表达的宿主系统.启动子是供RNA聚合酶识别和结合的DNA序列,调控着转录的起始过程,直接影响基因的表达水平.本文通过易错PCR技术对马克斯克鲁维酵母菊粉酶启动子Pinu进行两轮突变,以阿魏酸酯酶(Est1E)作为报告基因,经筛选、鉴定获得了5个可以显着提高外源蛋白表达量的突变型启动子Pm1D81、Pm1F138、Pm2Q89、Pm2M73、Pm2X47,报告蛋白Est1E的酶活性是启动子改造前的2.31,2.65,5.01,5.40,5.43倍.随后测试了启动子Pm2X47对外源蛋白甘露聚糖酶和赤霉烯酮降解酶表达的影响,结果显示这两种酶的表达量均有提高,分别是启动子改造前的3.57倍和4.13倍.上述结果提示,改造后的菊粉酶启动子在提高外源蛋白表达水平方面具有一定的通用性,可作为新型候选表达元件,以提升马克斯克鲁维酵母重组表达外源蛋白的能力.(本文来源于《复旦学报(自然科学版)》期刊2017年04期）
蒋慧慧[6]（2017）在《毕赤酵母表达系统中启动元件的研究进展》一文中研究指出毕赤酵母是真核细胞常用表达系统之一,具有细胞密度高、纯化方法简单、转录后修饰功能完善等优点。作为重要的调控元件,表达系统中启动元件的功能强弱与表达效率的高低密切相关。目前,毕赤酵母表达系统中常用的启动元件分为叁类,分别是以p AOX为代表的甲醇诱导型、以p GAP为代表的非甲醇诱导型,还有一些新型工业酵母启动子也是理想的表达系统启动元件。充分了解这些酵母启动子的最新研究进展,可以为工业酵母表达系统的优化提供重要的发展思路。(本文来源于《巢湖学院学报》期刊2017年03期）
盛枝泉[7]（2017）在《红法夫酵母来源crtE、crtI、crtYB基因的克隆与表达系统构建》一文中研究指出β-胡萝卜素为类胡萝卜素之一,是橘黄色脂溶性物质。由于β-胡萝卜素良好的理化性质,β-胡萝卜素在食品、饲料、化妆品、医疗方面应用广泛,市场需求越来越旺盛,经济价值日益显着。β-胡萝卜素主要来源为化学合成和天然提取。天然提取的β-胡萝卜素安全性更高,应用更广泛。本文从红法夫酵母中扩增目的基因crtE、crtI、crtYB基因,将目的基因克隆进p426GPD中构建表达盒子GAP-crtE-CYCl、GAP-crtI-CYCl、GAP-crtYB-CYC1。之后进一步将表达盒子整合在pRS406表达载体中,构建最终表达载体。本实验实验结果是:将GAP-crtE-CYC1利用Kpnl和Clal双酶切,连接进入pRS406表达载体中,获得第一步表达载体pRS406-crtE载体。之后将pRS406-crtE用EcoRI酶切补平末端后和目的片段GAP-crtYB-CYCl平末端连接,获得pRS406-crtE-crtYB表达载体。之后利用Notl酶切平末端连接GAP-crtI-CYC1片段获得最终的pRS406-crtE-crtYB-crtl最终表达载体。(本文来源于《云南大学》期刊2017-05-01）
Huan-sheng,YANG,Fei,WU,Li-na,LONG,Tie-jun,LI,Xia,XIONG[8]（2016）在《酵母产物对断奶仔猪肠道形态、屏障功能、细胞因子表达和抗氧化系统的影响（英文）》一文中研究指出目的:验证添加酵母混合物(酵母培养物、酵母细胞壁水解物和酵母提取物)对断奶仔猪生长性能、腹泻发生率、肠道形态、屏障功能、免疫反应和抗氧化系统的影响。创新点:考察酵母培养物、酵母细胞壁水解物和酵母提取物混合物对断奶仔猪的协同作用。方法:90头21日龄断奶仔猪随机分为3组,分别饲喂基础日粮(对照组),含1.2 g/kg的酵母混合物(YP组)及含20 mg/kg硫酸粘杆菌素日粮(CSE组)14天,比较叁组间各项指标差异。结论:结果表明,叁组之间平均日采食量、平均日增重和料肉比无显着差异。YP组腹泻发生率显着高于其它两组。对照组十二指肠和空肠的绒毛高度以及十二指肠的隐窝深度显着高于YP组和CSE组。相对于对照组或CSE组,YP组十二指肠和空肠绒毛淋巴细胞数目显着增加,而回肠绒毛内淋巴细胞数目显着降低。相对于对照组,YP组空肠和回肠内白介素-10(IL-10)的分泌增加,YP和CSE也显着影响了仔猪肠道和血清中抗氧化因子;YP和CSE组血清D-乳酸浓度和二胺氧化酶活性都增强;YP组或CSE组肠道occludin和ZO-1 mR NA表达降低。综上所述,酵母混合物添加会增加断奶仔猪腹泻发生率,并对断奶仔猪肠道形态学和屏障功能具有副作用。(本文来源于《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》期刊2016年10期）
祁浩,刘新利[9]（2016）在《大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展》一文中研究指出由于DNA重组技术和蛋白组技术的发展与成熟,外源基因表达技术备受关注。其在生物、食品、工业以及医学领域发挥着举足轻重的作用。以原核生物细胞及真核生物细胞作为表达系统,进行目的基因序列的表达以生产蛋白疫苗、核酸疫苗和生物酶制剂等是近年来发酵工业的新型领域。原核和真核表达系统是近年来研究和应用最广泛和最成熟的外源基因表达系统。对近年来关于大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展进行了综述。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2016年17期）
祁浩,刘新利[10]（2016）在《绿色荧光蛋白酿酒酵母表达系统的建立》一文中研究指出利用质粒YEplac112为骨架,在其多克隆位点Hind III和EcoRI之间插入水母绿色荧光蛋白(GFP)开放阅读框上下游约1 kb左右的DNA序列,得到YEplac112-CT质粒,在其多克隆位点Pst I和Bam HI之间插入750bp左右的GFP DNA序列,构建表达质粒YEplac112-C-GFP-T,以酿酒酵母W303为宿主,通过报告基因GFP验证了所构建的表达载体具有便捷筛选及良好的表达效果。(本文来源于《齐鲁工业大学学报(自然科学版)》期刊2016年03期）
酵母系统表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为研究毕赤酵母表达的兔病毒性出血症病毒(RHDV)病毒样颗粒(VLP)的免疫保护性,本研究将RHDV VP60的基因克隆到pPIC3.5K载体中,并导入毕赤酵母KM71菌株中,重组菌株经发酵和甲醇诱导,通过western blot检测目的蛋白的表达;透射电镜观察表达产物是否组装形成VLP;并通过动物试验评估VLP的免疫原性和攻毒保护效果。Western blot结果显示VP60蛋白能够在酵母内表达,电镜下观察到表达的VP60能够自发装配成大小均一的颗粒,与天然RHDV大小相当,约为30 nm～40 nm,表明表达的VP60可以自发组装成VLP。动物实验结果表明:表达的VLP与佐剂MONTANIDE GEL 01 PR混合后免疫实验兔,能够刺激实验兔产生保护性抗体,免疫后21 d攻毒,对实验兔的保护率达100%,且保护性抗体至少可以持续6个月。本研究利用毕赤酵母表达了RHDV的VLP,为研制RHDV亚单位疫苗奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酵母系统表达论文参考文献
[1].李秀义,高冬梅,张守柱,潘继文,温和.风疹病毒E1抗原特异性片段在酵母系统中重组表达及应用[J].安徽医科大学学报.2019
[2].尹曼曼,楼觉人.利用毕赤酵母表达系统表达兔出血症病毒样颗粒及其免疫原性研究[J].中国预防兽医学报.2019
[3].张雅雯.大肠杆菌与毕赤酵母系统表达hTGF-β1的研究[D].广东药科大学.2018
[4].田晓娟.酵母表达系统研究概述[J].陇东学院学报.2018
[5].胡晓悦,周峻岗,余垚,吕红,HU,Xiaoyu.马克斯克鲁维酵母表达系统菊粉酶启动子的改造及活性研究[J].复旦学报(自然科学版).2017
[6].蒋慧慧.毕赤酵母表达系统中启动元件的研究进展[J].巢湖学院学报.2017
[7].盛枝泉.红法夫酵母来源crtE、crtI、crtYB基因的克隆与表达系统构建[D].云南大学.2017
[8].Huan-sheng,YANG,Fei,WU,Li-na,LONG,Tie-jun,LI,Xia,XIONG.酵母产物对断奶仔猪肠道形态、屏障功能、细胞因子表达和抗氧化系统的影响（英文）[J].JournalofZhejiangUniversity-ScienceB(Biomedicine&Biotechnology).2016
[9].祁浩,刘新利.大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展[J].安徽农业科学.2016
[10].祁浩,刘新利.绿色荧光蛋白酿酒酵母表达系统的建立[J].齐鲁工业大学学报(自然科学版).2016
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