银染聚丙烯酰胺凝胶电泳技术体系的优化

论文摘要

【目的】针对银染PAGE实验中常出现的背景颜色深、条带弥散、凝胶变形及条带不整齐等问题进行归纳总结并提出优化方法。【方法】以甘蓝型油菜基因组DNA为研究对象,通过PAGE电泳后银染并调整试剂配方、实验条件,筛选出适合实验的技术体系。【结果】甲醇浓度、电压稳定性、电泳温度、气泡等显著影响实验结果。甲醛浓度过高(1.25%)时,虽所需染色时间短,但凝胶背景深;甲醛浓度过低(0.001 25%)时,背景浅但条带淡,需要长时间染色;电压不稳定会造成条带弥散;电泳温度过高,导致凝胶变形,条带弯曲;凝胶中的气泡会扰乱DNA条带的形状;NaOH浓度在0.875%～1.375%,染色结果无明显差异。【结论】甲醛用量4 mL(1%)、保持稳定电压、在冰浴中电泳、制胶时及时赶走所有气泡,可得到凝胶背景浅、条带清晰且正常的结果。

论文目录

• 0 引 言
• 1 材料与方法
•   1.1 材 料
•   1.2 方 法
•     1.2.1 非变性PAGE胶的制备
•     1.2.2 样品制备
•     1.2.3 电 泳
•     1.2.4 染 色
•     1.2.5 凝胶照像
• 2 结果与分析
•   2.1 甲醛用量对条带显色的影响
•   2.2 NaOH用量对条带显色的影响
•   2.3 电压对电泳条带的影响
•   2.4 温度对电泳条带的影响
•   2.5 气泡对电泳条带的影响
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王露露,刘欣婷,周涛,王娟,贾东海,李强,侯献飞,石必显,顾元国,兰海燕

关键词: 聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染,弥散现象,体系优化

来源: 新疆农业科学 2019年12期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 新疆大学生命科学与技术学院/新疆生物资源基因工程重点实验室,新疆农业科学院经济作物研究所

基金: 科技厅项目“南疆一年两熟区域麦后复种油菜的多元化利用与提质增效”(2019012A12),国家重点研发计划项目“长江上游及北方油菜高产优质适宜机械化新品种培育”(2018YFD0100500)~~

分类号: Q503

页码: 2312-2319

总页数: 8

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