家蚕核型多角体病毒Bm11基因对病毒基因转录及ODV病毒粒子包埋的影响

论文摘要

家蚕核型多角体病毒（BmNPV）Bm11是一个高度保守的基因,但其在病毒感染过程的作用尚不清楚。利用λ-Red同源重组技术构建Bm11敲除型病毒,并利用Bac-to-Bac系统重新构建恢复型及野生型重组病毒。转染试验及荧光定量PCR（qPCR）结果表明,Bm11基因缺失并不影响出芽型病毒粒子（BV）的产生及病毒基因组DNA复制,但对晚期和极晚期基因的转录水平影响显著（P<0.01）。经皮注射虫体实验结果显示,敲除型病毒的致死中时（LT50）明显长于恢复型病毒和野生型重组病毒。经口感染实验表明,添食106个野生型重组病毒或恢复型病毒多角体（OB）的家蚕死亡率均达到100%,而添食敲除型病毒多角体的家蚕死亡率只有64.89%,且死亡时间明显延长。透射电子显微镜观察发现,与恢复型病毒和野生型重组病毒相比,Bm11敲除型病毒感染细胞内多角体包埋的包涵体衍生型病毒粒子（ODV）数量显著减少（P<0.01）。综上所述,Bm11虽不是BmNPV复制必需基因,但该基因的缺失对病毒晚期和极晚期基因转录以及ODV粒子包埋效率均有重要影响。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料和主要试剂
•     1.1.1病毒、细胞和昆虫
•     1.1.2试剂
•   1.2 重组病毒的构建
•   1.3 病毒DNA复制水平分析
•   1.4 病毒感染不同时期代表基因的转录水平分析
•   1.5 病毒对BmN细胞的感染能力分析
•   1.6 重组病毒对家蚕的感染能力分析
•   1.7 重组病毒感染BmN细胞的透射电子显微镜观察
•   1.8 多角体纯化及ODV定量
• 2 结果与分析
•   2.1 Bm11基因敲除型和恢复型Bacmid的鉴定
•   2.2 Bm11基因敲除对病毒DNA复制及BV生产的影响
•   2.3 Bm11缺失对病毒不同时期基因转录水平的影响
•   2.4 Bm11缺失对病毒在家蚕体内感染力的影响
•   2.5 Bm11基因敲除对病毒粒子包埋的影响
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王海萍,张健家,孔祥硕,吴小锋

关键词: 家蚕核型多角体病毒,基因,基因转录,病毒粒子包埋

来源: 蚕业科学 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 蚕蜂与野生动物保护

单位: 浙江大学动物科学学院

基金: 国家自然科学基金项目(No.31772675)

分类号: S884.51

DOI: 10.13441/j.cnki.cykx.2019.06.007

页码: 828-836

总页数: 9

文件大小: 2100K

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