屋尘螨第21类过敏原原核表达和过敏原性鉴定

论文摘要

目的屋尘螨（Dermatophagoides pteronyssinus）是引起过敏性疾病的主要过敏原,鉴定其免疫原性是研究哮喘和其他过敏性疾病的基础。由于不同地区生物的多样性,本实验在国内首次对屋尘螨Der p 21进行克隆、表达和免疫原性鉴定。方法提取屋尘螨总RNA,RT-PCR扩增Der p 21的cDNA片段,根据已知Der p 21序列设计出表达引物,再通过已获得的cDNA和引物进行PCR扩增,将扩增产物连接到克隆载体上并转入克隆菌E.coli Top10中,涂板过夜培养,挑选菌落,保菌,取样送至公司测序。将测序正确的基因转入表达载体PET32中,经酶切鉴定测序再转入表达菌BL21中,大量表达重组蛋白Der p 21经过纯化后,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测目的蛋白表达并进行免疫印迹分析（Western blotting）。结果双酶切显示Der p 21已成功连接在载体上,SDS-PAGE显示目标基因在大肠埃希菌BL21成功表达,纯化后的重组Der p 21蛋白分子量约为50 kD,Western blotting结果显示有明显条带。结论成功克隆表达Der p 21 cDNA,表达和纯化出重组蛋白,并具有免疫原性。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌种与表达载体
•     1.1.2 试剂
•     1.1.3 血清
•   1.2 方法
•     1.2.1 屋尘螨总RNA的提取
•     1.2.2 扩增Der p 21基因
•     1.2.3重组表达质粒和重组表达菌的构建
•     1.2.4 重组蛋白Der p 21的表达
•     1.2.5 重组蛋白Der p 21的纯化
•     1.2.6重组蛋白Der p 21的免疫印迹分析
• 2 结果
•   2.1 重组蛋白Der p 21表达载体的构建
•   2.2 Der p 21重组蛋白的表达和纯化
•   2.3 Der p 21重组蛋白免疫原性测定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈德盛,胡天城,关丽,何俊贤,关律昕,罗新萍,刘志刚,刘晓宇

关键词: 屋尘螨,表达纯化,免疫学鉴定

来源: 中国热带医学 2019年02期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所,深圳大学第三附属医院变态反应科

基金: 国家自然科学基金(No.31729002,No.81628001),广东省科技计划项目(No.2013B031800023,No.2014B090901041,No.2016A-020216029),呼吸疾病国家重点实验室开放基金(No.SKLRD2016ZJ001),深圳市科技计划基础研究项目(No.JCYJ2016-0328144536436,No.JCYJ20160429114659119)

分类号: R384.4

DOI: 10.13604/j.cnki.46-1064/r.2019.02.01

页码: 103-106

总页数: 4

文件大小: 934K

下载量: 111