导读:本文包含了标识与鉴别论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献，主要关键词:胸腔,饮用水,布鲁氏菌,免疫,蛋白,标识,含量。
标识与鉴别论文文献综述写法
潘丽萍,孙会姗,贾红彦,杜博平,魏荣荣[1]（2019）在《非标记定量蛋白质组学鉴别结核性胸腔积液和恶性胸腔积液特异蛋白分子标识的研究》一文中研究指出目的研究结核性胸腔积液和恶性胸腔积液的差异蛋白谱,寻找能够实现结核性胸腔积液和恶性胸腔积液鉴别诊断的特异蛋白分子标识。方法募集结核性胸腔积液(TBPE)患者以及年龄性别匹配的恶性胸腔积液(MPE)患者各5例,应用非标记(Lable-free)定量蛋白质组学技术检测胸腔积液蛋白表达谱。Western blot验证定量蛋白组学检测准确性,ELISA技术验证组间差异蛋白表达,两组间差异分析采用t检验。受试者工作特征曲线(ROC)分析差异蛋白鉴别诊断结核性胸腔积液和恶性胸腔积液的意义。(本文来源于《中华医学会结核病学分会2019年全国结核病学术大会论文汇编》期刊2019-06-12）
宗兆婧[2]（2019）在《结核病和非结核分枝杆菌病鉴别标识物的研究》一文中研究指出第一部分菌体胞外蛋白可作为MTB和NTM诊断与鉴别诊断的免疫原性标识物的筛选目的 筛选和鉴定结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)、非结核分枝杆菌(Non-tuberculous Mycobacteria,NTM)相应的免疫原性蛋白,发现可用于结核病和非结核分枝杆菌病诊断与鉴别诊断的适宜诊断标识物。为新诊断方法的开发提供潜在的标识物,为结核病和非结核病的诊断和鉴别诊断寻找新途径。方法 选择结核分枝杆菌标准菌株H37Rv和5种最常见的致病NTM标准菌株(包括3种慢生长分枝杆菌:堪萨斯分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌株;2种快生长分枝杆菌:偶发分枝杆菌和脓肿分枝杆菌)进行研究。收集菌株培养滤液中的蛋白,浓缩后进行酶解处理,对蛋白样本评估后、利用Label free蛋白质组学技术对肽段进行鉴定,基于UniProt数据库搜库检索,在SignaIP服务器中对蛋白质的信号肽进行查找,以筛选膜相关蛋白或分泌蛋白。结合SWISS-MODEL建立叁维模型,在IEDB数据库中对这些胞外蛋白的T细胞抗原表位和B细胞抗原表位进行预测。同时,通过生物信息学分析对胞外蛋白的GO功能注释和KEGG通路注释进行富集,对比不同NTM菌种和结核分枝杆菌在胞外蛋白功能和参与通路方面的差异性。结果 1.结核分枝杆菌和3种慢生长NTM菌株之间的滤液蛋白表达模式基本一致,但2种快生长NTM的滤液蛋白与慢生长分枝杆菌间存在较大差异。结核分枝杆菌特异性表达的胞外蛋白中获得20个抗原性蛋白;堪萨斯分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、偶发分枝杆菌和脓肿分枝杆菌获得免疫原性蛋白数目分别为27、32、52、26和2个。2.NTM与MTB的胞外蛋白功能差异主要集中于一些重要的生物功能,如跨膜转运、转运酶和水解酶活性、膜锚定的转运蛋白等方面。其中2种快生长NTM偶发分枝杆菌和脓肿分枝杆菌蛋白在铜离子转运和铜离子稳态方面有别于其他菌株,而且有关羧肽酶活性的分子功能也与结核分枝杆菌有明显差异。3.通过对KEGG通路富集发现:相对于结核分枝杆菌,鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌中缺失LprA和LprG蛋白,偶发分枝杆菌和脓肿分枝杆菌缺失LprA、LprG和PstS同源蛋白。结论 1.结核分枝杆菌LprA、LprG和PstS的同源蛋白可能与不同菌株致病性有关,有可能作为结核病和NTM病诊断与鉴别诊断的分子标识物。2.快生长分枝杆菌和慢生长分枝杆菌在铜离子转运以及羧肽酶活性方面存在的差异可能与菌株的致病性、毒力以及菌株生长有关,有可能作为结核病和NTM病诊断鉴别诊断的候选标识物。第二部分MTB和NTM体外感染巨噬细胞来源的外泌体蛋白组学分析目的 对结核分枝杆菌和上述5种常见致病性非结核分枝杆菌感染巨噬细胞后分泌的外泌体蛋白进行研究,从宿主相关蛋白的角度筛选可作为结核病和非结核分枝杆菌病诊断的候选标识物,为难以获取细菌学依据的结核病和非结核分枝杆菌病的诊断和鉴别诊断寻找线索。方法 分别用结核分枝杆菌和5种非结核分枝杆菌标准株(堪萨斯分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌标、偶发分枝杆菌和脓肿分枝杆菌)对THP-1巨噬细胞进行感染,超速离心法富集细胞上清中的外泌体,对外泌体蛋白鉴定后进行Label free质谱检测,筛选宿主细胞相关的蛋白进行分析。对各个感染组特异性表达的外泌体蛋白在UniProt数据库检索进行亚细胞定位,筛选有细胞黏附作用的膜蛋白。同时通过生物信息学手段对组间存在差异表达的外泌体蛋白进行GO功能富集和KEGG通路富集,对差异性蛋白的功能特点和参与的主要通路进行分析,并筛选通路中的关键差异蛋白。结果 1.对所有感染组与未感染组的外泌体蛋白组成进行比较发现,各组共有蛋白的数目占所有鉴定蛋白总数的51.14%(1771/3461),提示各组共有蛋白比例高。2.结核分枝杆菌感染组与3种慢生长的NTM感染组的外泌体中均鉴定到1-3个与细胞黏附有关的宿主蛋白,但2种快生长NTM感染组中未鉴定到此类蛋白。3.鉴定到菌体来源的外泌体蛋白Icd2、pepA、DnaK、IprA、GlcB、KatG在同类研究中有报道。4.在KEGG通路富集中得到29个参与受体信号转导的重要蛋白,这些蛋白的功能包括JAK-STAT信号通路、Toll-NFκB/MAPK通路,以及与抑制宿主细胞凋亡和吞噬溶酶体成熟的信号转导通路。其中Myd88在结核分枝杆菌和堪萨斯感染组有表达,且在结核分枝杆菌组表达显着增高(P<0.01)。结核分枝杆菌感染组分离到可促进Akt/PKB通路抑制细胞凋亡的AKT1蛋白,偶发分枝杆菌感染组中分离到可促进宿主细胞凋亡的Bax蛋白。结论1.各组巨噬细胞的外泌体蛋白差异可提示宿主细胞是否存在分枝杆菌的感染以及所感染分枝杆菌的菌种。外泌体蛋白成分的差异可能在分枝杆菌诊断与鉴别诊断中发挥作用。2.筛选到的细胞膜锚定蛋白可能在结核分枝杆菌和慢生长NTM菌株致病中起重要作用。3.分枝杆菌感染巨噬细胞后阻碍吞噬体和溶酶体结合,可能是分枝杆菌胞内存活的共同机制。相较于NTM感染组,结核分枝杆菌感染过程中对Myd88信号传导作用的依赖性更强。第叁部分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌感染巨噬细胞后释放细胞因子的差异研究目的 了解结核分枝杆菌和上述5种NTM体外感染巨噬细胞后细胞因子的不同表达情况,为建立快速、简便地鉴别结核分枝杆菌和不同菌种非结核分枝杆菌的方法提供依据。方法 选择 IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12/23 p40、IL-27、TNF-α、IP-10、MCP-1等11个因子作为研究对象。分别用MTB标准菌株H37Rv和5种NTM标准菌株(堪萨斯分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、偶发分枝杆菌、脓肿分枝杆菌)感染巨噬细胞,在感染后4小时、8小时、24小时和48小时收集细胞培养上清,Luminex液相芯片方法检测多因子表达水平。同时用LDH法对巨噬细胞的存活率进行测定,CFU计数对巨噬细胞内分枝杆菌的生长情况评估,并在结核病患者、NTM病患者和健康志愿者血浆中进行验证。综合分析筛选可能用于结核病与NTM病诊断以及鉴别诊断的细胞因子组合。结果 1.结核分枝杆菌感染细胞组、NTM菌株感染细胞组与未感染对照组进行比较发现:各分枝杆菌感染组IP-10表达量均高于未感染组,且在各个分枝杆菌感染组均有不同程度增高。结核分枝杆菌、堪萨斯和胞内分枝杆菌感染组释放的IL-6表达量升高,而鸟分枝杆菌和2个快生长菌株感染组无明显增高。结核分枝杆菌感染后释放的IL-10与NTM感染组和未感染组均有显着性差异。结核分枝杆菌感染组的IL-12/23p40与5种NTM感染组比较有显着增高。IL-4、IFN-γ和MCP-1在感染组和未感染组无明显差别。TNF-α在感染组表达水平降低。IL-2和IL-2R-α表达量低于检测下限。2.结核病患者、NTM病患者(鸟分枝杆菌病、胞内分枝杆菌病和脓肿分枝杆菌病)与健康志愿者患者血浆细胞因子表达水平进行比较:结核病患者和3组NTM病患者的TNF-α、MCP-1、IL-2R-α和IL-6水平均显着高于健康志愿者组,且3组NTM病患者之间的TNF-α水平也有显著性差异。IL-2、IL-4、IL-12/23p40和IFN-y在结核病患者组较健康志愿者显着增高。结论 1.在巨噬细胞感染模型中,IP-10和IL-10可以区分结核分枝杆菌和NTM感染,IP-10还可以区别所感染的NTM菌种。IL-6和IL-12/23p40在结核分枝感染后表达上升,和NTM感染组有显着差异。TNF-α表达水平可区别分枝杆菌感染和未感染组。2.不同种分枝杆菌感染巨噬细胞的应答模式不同,细胞因子在不同菌株感染中的表达模式有差异性,可能与细菌的毒力和致病能力有关。IL-6、IL-12/23p40和TNF-α有望在体外和体内用作鉴别不同菌种感染的诊断指标。(本文来源于《北京市结核病胸部肿瘤研究所》期刊2019-03-01）
佘现栋,王力恒[3]（2015）在《浅谈电子化招投标领域的身份标识与鉴别》一文中研究指出电子化招投标是指通过计算机、网络等信息技术,对招投标业务进行重新梳理,优化重组工作流程,在网络上执行在线招标、投标、开标、评标和监督监察等一系列业务操作,最终实现高效、专业、规范、安全、低成本的招投标管理。随着《电子招标投标办法》、《电子招标投标系统技术规范》的公布实施,以及世界信息化大趋势下,发展电子化招投标成为了必然趋势。但是信息安全和身份认证等方面问题随之而来。本文就电子化招投标领域的生物识别技术和CA数字证书的应用进行粗浅分析。(本文来源于《科技视界》期刊2015年12期）
新肥[4]（2015）在《看肥料包装标识鉴别肥料》一文中研究指出肥料包装标识是吸引农民注意力、决定购买行为的重要因素之一。在市场抽检中,有一些肥料生产企业为了牟利,往往在标识上做文章,存在严重误导农民的行为,使农民的利益受到损害。因此,农民朋友需要了解肥料包装标识方面的有关常识,提高鉴别肥料的能力,保护自己的合法利益。一、如何从包装标识鉴别肥料1.查看肥料包装标识是否规范。主要看包装标识是否规范地标注有:产品名称,养分含量,肥料登记证号,生产许可证号(复混肥料、有机-无(本文来源于《科技致富向导》期刊2015年07期）
周颖,徐菲,胡卫平,吴大保[5]（2015）在《分子标识物Pax8、Pax2、Calretinin在卵巢肿瘤起源鉴别中的意义》一文中研究指出探讨Pax8、Pax2、Caretinin在正常女性生殖系统的表达特点:Pax8及Pax2特异表达在苗勒氏系统中且Pax8特异性高,Calretinin特异表达在间皮细胞中。分析了Pax8、Pax2、Caretinin对鉴别卵巢癌起源的的重要意义:Pax8-/Calretinin+细胞被判断为卵巢上皮来源细胞;而Pax8+/Calretinin-细胞则被判断为输卵管上皮来源;黏液性肿瘤细胞中Pax8-/Caretinin-则多判断为转移性肿瘤来源(消化系统肿瘤来源)。明确卵巢癌细胞的起源及病理诊断为卵巢癌术后个体化化疗方案的选择提供了临床指导依据。(本文来源于《慢性病学杂志》期刊2015年01期）
侯慧玉[6]（2013）在《布鲁氏菌蛋白质文库的建立及感染与免疫鉴别诊断标识抗原的研究》一文中研究指出布鲁氏菌病(Brucellosis,简称布病)是严重危害人体健康、畜牧业发展及社会经济发展的人畜共患性传染病,由布鲁氏菌(Brucella)感染引起。牛、羊等家畜是动物及人类布病的主要传染源；传播途径主要有消化道、呼吸道及皮肤黏膜等方式；人类、家畜等普遍易感。目前,布病诊断的金标准仍是细菌分离培养,但分离率低、分离难度大,耗时长,且存在一定的生物安全问题,不适用于快速诊断和大量样本的处理。因此,国内临床上采用血清学检测方法虎红平板凝集试验(RBPT)和试管凝集试验(SAT)相结合的方法诊断布病。但RBPT法假阳性率高；而SAT法易与其它微生物发生交叉反应,操作繁琐,耗时长,且无法区别SAT阳性血清是由疫苗免疫还是自然感染引起。研究发现酶联免疫吸附实验(ELISA)与传统的SAT、补体结合实验(CFT)相比,有更高的敏感度和特异度。以光滑型脂多糖(S-LPS)做为抗原的ELISA已发展为成熟的商品化试剂盒用于牛布病的诊断。但由于S-LPS也可与耶尔森氏菌等发生交叉反应,所以本研究试图选用布鲁氏菌中抗原性较强且具有代表性的重组蛋白做为抗原进行间接酶联免疫吸附实验(iELISA),从而建立以重组蛋白做为抗原的iELISA方法,为研制快速诊断布病的iELISA试剂盒奠定基础。由于自然患病牛主要感染牛种布鲁氏菌,而我国普遍应用于牛的疫苗是羊种(M5)和猪种(S2)布鲁氏菌的减毒活疫苗。运用蛋白omp31存在于除牛种之外的所有布鲁氏菌种的特性,建立以omp31为抗原的iELISA方法,可将牛种布鲁氏菌与非牛种布鲁氏菌区分开,进而鉴别SAT阳性的牛是由自然感染引起还是免疫接种引起。目前,布鲁氏菌的蛋白研究涉及的种类较多,研究的角度和侧重点不同,信息较为庞杂。针对这一现状,本研究建立了布鲁氏菌蛋白质文库,梳理了部分布鲁氏菌主要蛋白的研究进展,并将其分为外膜蛋白(OMP)、Ⅳ型分泌系统(T4FF)蛋白、胞质结合蛋白和酶类及其他,就其免疫原性与抗原性、用于诊断方面的价值及致病机理等方面加以综述。并从蛋白质文库中选取了研究资料较少且在T4FF中有重要作用的蛋白virB8进行了克隆表达,成功纯化出重组蛋白virB8,并与本实验室保存的bp26和omp31两种蛋白一同进行了iELISA方法用于检测布病的研究。测得virB8、bp26及omp31的最佳包被浓度分别为12.90ug/ml,2.60ug/ml,1.24ug/ml;血清最佳稀释度均为1：100；二抗最佳稀释度均为1：20000。用70份北京大兴区牛场健康牛血清测得virB8、bp26及omp31叁种抗原的cutoff值分别为：0.199,0.220,0.242。用RBPT与SAT结合检测河南100份牛血清,结果56份为布病阳性,44份阴性。以virB8做抗原检测判定为阳性的血清为14份,灵敏度为17.9%,特异度为90.9%,对于布病的检测没有实际的应用价值。以bp26做抗原的检测中,判定为阳性的血清共45份,其灵敏度为75%,特异度为93.2%；符合率为83%,Kappa值为0.664,说明两种检验方法中高度一致。对两种检测方法进行配对卡方检验,P值<0.05,故认为差异有统计学意义,两种检测方法存在差异,SAT优于以bp26做抗原的iELISA方法。以omp31做抗原检测判定结果均为阴性,推定此次采集的河南牛血清中诊断为患病的牛均由自然感染引起。尽管bp26做为抗原的iELISA实验对诊断布病有一定的积极意义,但灵敏度仍不高,下一步将继续筛选布氏菌标识抗原,探索多种抗原联合诊断布病的iELISA方法。本研究的结果为建立更加系统、全面、权威的布氏菌蛋白质文库奠定了基础；对筛选重组抗原应用于iELISA方法检测布病具有重要的意义,为研制多种重组抗原联合应用检测布病奠定了基础；同时为区分SAT阳性的牛是自然感染还是疫苗免疫提供了切实可行的方法,对畜牧业及经济的发展做出了贡献。(本文来源于《中国疾病预防控制中心》期刊2013-05-01）
高诗会[7]（2013）在《结核分枝杆菌新核酸标识的ISSR分型筛选及在鉴别检测中的初步应用》一文中研究指出目的：分析微卫星五联简单重复序列在分枝杆菌基因组中的分布情况，并评价其简单序列重复区间（ISSR）分型能力，为分枝杆菌的基因分型及核酸标识的筛选提供新的研究工具；同时，利用该分型体系筛选获得结核分枝杆菌新的核酸标识并初步用于分枝杆菌临床菌株的鉴别检测。方法：利用MICdb2.0软件分析微卫星数据库收录的分枝杆菌基因组中五联简单重复序列(CAGCG)n和(CCAGC)n的分布特征，并以此两序列为基础分别设计ISSR引物1（5＇-CAGCGCAGCGCAGCG-3＇）和ISSR引物2（5＇-CCAGCCCAGCCCAGC-3＇），用于分枝杆菌种间和种内菌株的基因分型分析。通过ISSR分型技术平台筛选MTC的特征片段，克隆测序获得特征序列并进行序列同源性分析；以特征序列为基础设计MTC特征引物，并对737株分枝杆菌菌株（其中MTC620株，NTM117株）进行鉴别检测；同时，利用16s rRNA序列（分枝杆菌属特征序列）和IS6110序列（MTC特征序列）的鉴别结果对MTC特征引物的检测效果进行评估；另外，采用荧光定量PCR和巢式PCR方法对MTC特征引物在临床痰标本中进行检测，评估其阳性和阴性检出率。结果：生物信息学分析显示(CAGCG)n和(CCAGC)n在数据库收录的大部分分枝杆菌基因组中均有较高含量，其中(CAGCG)n在H37Rv、H37Ra、CDC1551和牛分枝杆菌基因组中出现的次数分别为40、40、39和39次，且主要分布在编码序列区（分别为39、40、35和38次）；(CCAGC)n在H37Rv、H37Ra、CDC1551和牛分枝杆菌基因组中出现的次数分别为15、15、16和14次，且都分布在编码序列区。ISSR引物对分枝杆菌菌种的基因分型分析显示，种间表现出高度的遗传多样性；ISSR引物对MTB临床菌株和NTM临床分离株的分型结果显示，它们聚簇能力较强，但可进一步分成不同的亚型，提示该引物对种内菌株也表现出良好的分辨力。通过ISSR分型获得了588bp和999bp的2个MTC特征片段；序列同源性分析显示，这两段序列为MTC菌株的特征序列，前者位于结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组序列的315947-316534位，后者位于结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组序列的316237-316997位；以这两段序列为基础设计MTC的鉴别引物MTC1F/R和MTC2F/R；16s rRNA基因在732株分枝杆菌标准菌株和临床分离株中的扩增结果均为阳性； IS6110序列的阳性检出率为97.42%（604/620），阴性检出率为100%（117/117）；MTC1F/R的阳性检出率为99.84%（619/620），阴性检出率为100%（117/117）。MTC2F/R的阳性检出率为99.68%（618/620），阴性检出率为100%（117/117）。368份痰标本（其中276份结核病标本，92份非结核病标本）的荧光定量检测显示，16s rRNA序列的阳性检出率为66.67%（184/276），阴性检出率为86.96%（80/92）；IS6110基因序列的阳性检出率为60.87%（168/276），阴性检出率为100%（92/92）；MTC1内引物序列的阳性检出率为78.26%（216/276），阴性检出率为96.74%（89/92）；MTC2内引物序列的阳性检出率为34.78%（96/276），阴性检出率为98.91%（91/92）。180份痰标本（其中130份结核病标本，50份非结核病标本）的巢式PCR检测方法显示，IS6110基因序列的阳性检出率为98.46%（128/130），阴性检出率为92.00%（46/50）；MTC1引物的阳性检出率为86.92%（113/130），阴性检出率为92.00%（46/50）；MTC2引物的阳性检出率为76.92%（100/130），阴性检出率为98.00%（49/50）。结论：以(CAGCG)n和(CCAGC)n建立的ISSR分型体系，可用于分枝杆菌种间和种内菌株的遗传多样性分析。通过ISSR分型技术筛选出的2个MTC特征序列可作为新的核酸扩增靶标用于MTC和NTM的鉴别诊断。(本文来源于《苏州大学》期刊2013-04-01）
汪荣,韩志江,朱大荣[8]（2010）在《乳头定位标识在胸部平片中鉴别乳头影与非乳头影的价值》一文中研究指出目的:观察男性乳头与女性乳头在胸部平片上的显示特点,探讨乳头定位标识在鉴别肺部或胸壁结节与乳头影中的价值。材料和方法:回顾性分析40岁以上的健康体检者960例,其中男性320例,双下肺对称结节显示(本文来源于《2010中华医学会影像技术分会第十八次全国学术大会论文集》期刊2010-09-17）
黄志平[9]（2010）在《如何从外包装标识鉴别保健食品》一文中研究指出专家预测,未来中国将成为全球第一大保健食品消费国。随着市场规模的迅速扩大,一些不法分子、非法厂家在利益驱动下,违法生产加工销售假劣保(本文来源于《首都医药》期刊2010年17期）
刘宝芝,焦强[10]（2010）在《我市整治桶装饮用水市场》一文中研究指出本报讯 （记者 刘宝芝 通讯员 焦强）桶装饮用水的质量关系着市民的健康。记者走访发现，我市饮用水市场假冒伪劣桶装饮用水充斥市场，销售价格混乱，亟待加强整顿。在质监系统开展的饮用水生产加工企业专项整治中，3家企业和小作坊被下达了责令改正通知书，一家小作坊责(本文来源于《石家庄日报》期刊2010-08-06）
标识与鉴别论文开题报告范文
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
第一部分菌体胞外蛋白可作为MTB和NTM诊断与鉴别诊断的免疫原性标识物的筛选目的 筛选和鉴定结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)、非结核分枝杆菌(Non-tuberculous Mycobacteria,NTM)相应的免疫原性蛋白,发现可用于结核病和非结核分枝杆菌病诊断与鉴别诊断的适宜诊断标识物。为新诊断方法的开发提供潜在的标识物,为结核病和非结核病的诊断和鉴别诊断寻找新途径。方法 选择结核分枝杆菌标准菌株H37Rv和5种最常见的致病NTM标准菌株(包括3种慢生长分枝杆菌:堪萨斯分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌株;2种快生长分枝杆菌:偶发分枝杆菌和脓肿分枝杆菌)进行研究。收集菌株培养滤液中的蛋白,浓缩后进行酶解处理,对蛋白样本评估后、利用Label free蛋白质组学技术对肽段进行鉴定,基于UniProt数据库搜库检索,在SignaIP服务器中对蛋白质的信号肽进行查找,以筛选膜相关蛋白或分泌蛋白。结合SWISS-MODEL建立叁维模型,在IEDB数据库中对这些胞外蛋白的T细胞抗原表位和B细胞抗原表位进行预测。同时,通过生物信息学分析对胞外蛋白的GO功能注释和KEGG通路注释进行富集,对比不同NTM菌种和结核分枝杆菌在胞外蛋白功能和参与通路方面的差异性。结果 1.结核分枝杆菌和3种慢生长NTM菌株之间的滤液蛋白表达模式基本一致,但2种快生长NTM的滤液蛋白与慢生长分枝杆菌间存在较大差异。结核分枝杆菌特异性表达的胞外蛋白中获得20个抗原性蛋白;堪萨斯分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、偶发分枝杆菌和脓肿分枝杆菌获得免疫原性蛋白数目分别为27、32、52、26和2个。2.NTM与MTB的胞外蛋白功能差异主要集中于一些重要的生物功能,如跨膜转运、转运酶和水解酶活性、膜锚定的转运蛋白等方面。其中2种快生长NTM偶发分枝杆菌和脓肿分枝杆菌蛋白在铜离子转运和铜离子稳态方面有别于其他菌株,而且有关羧肽酶活性的分子功能也与结核分枝杆菌有明显差异。3.通过对KEGG通路富集发现:相对于结核分枝杆菌,鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌中缺失LprA和LprG蛋白,偶发分枝杆菌和脓肿分枝杆菌缺失LprA、LprG和PstS同源蛋白。结论 1.结核分枝杆菌LprA、LprG和PstS的同源蛋白可能与不同菌株致病性有关,有可能作为结核病和NTM病诊断与鉴别诊断的分子标识物。2.快生长分枝杆菌和慢生长分枝杆菌在铜离子转运以及羧肽酶活性方面存在的差异可能与菌株的致病性、毒力以及菌株生长有关,有可能作为结核病和NTM病诊断鉴别诊断的候选标识物。第二部分MTB和NTM体外感染巨噬细胞来源的外泌体蛋白组学分析目的 对结核分枝杆菌和上述5种常见致病性非结核分枝杆菌感染巨噬细胞后分泌的外泌体蛋白进行研究,从宿主相关蛋白的角度筛选可作为结核病和非结核分枝杆菌病诊断的候选标识物,为难以获取细菌学依据的结核病和非结核分枝杆菌病的诊断和鉴别诊断寻找线索。方法 分别用结核分枝杆菌和5种非结核分枝杆菌标准株(堪萨斯分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌标、偶发分枝杆菌和脓肿分枝杆菌)对THP-1巨噬细胞进行感染,超速离心法富集细胞上清中的外泌体,对外泌体蛋白鉴定后进行Label free质谱检测,筛选宿主细胞相关的蛋白进行分析。对各个感染组特异性表达的外泌体蛋白在UniProt数据库检索进行亚细胞定位,筛选有细胞黏附作用的膜蛋白。同时通过生物信息学手段对组间存在差异表达的外泌体蛋白进行GO功能富集和KEGG通路富集,对差异性蛋白的功能特点和参与的主要通路进行分析,并筛选通路中的关键差异蛋白。结果 1.对所有感染组与未感染组的外泌体蛋白组成进行比较发现,各组共有蛋白的数目占所有鉴定蛋白总数的51.14%(1771/3461),提示各组共有蛋白比例高。2.结核分枝杆菌感染组与3种慢生长的NTM感染组的外泌体中均鉴定到1-3个与细胞黏附有关的宿主蛋白,但2种快生长NTM感染组中未鉴定到此类蛋白。3.鉴定到菌体来源的外泌体蛋白Icd2、pepA、DnaK、IprA、GlcB、KatG在同类研究中有报道。4.在KEGG通路富集中得到29个参与受体信号转导的重要蛋白,这些蛋白的功能包括JAK-STAT信号通路、Toll-NFκB/MAPK通路,以及与抑制宿主细胞凋亡和吞噬溶酶体成熟的信号转导通路。其中Myd88在结核分枝杆菌和堪萨斯感染组有表达,且在结核分枝杆菌组表达显着增高(P<0.01)。结核分枝杆菌感染组分离到可促进Akt/PKB通路抑制细胞凋亡的AKT1蛋白,偶发分枝杆菌感染组中分离到可促进宿主细胞凋亡的Bax蛋白。结论1.各组巨噬细胞的外泌体蛋白差异可提示宿主细胞是否存在分枝杆菌的感染以及所感染分枝杆菌的菌种。外泌体蛋白成分的差异可能在分枝杆菌诊断与鉴别诊断中发挥作用。2.筛选到的细胞膜锚定蛋白可能在结核分枝杆菌和慢生长NTM菌株致病中起重要作用。3.分枝杆菌感染巨噬细胞后阻碍吞噬体和溶酶体结合,可能是分枝杆菌胞内存活的共同机制。相较于NTM感染组,结核分枝杆菌感染过程中对Myd88信号传导作用的依赖性更强。第叁部分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌感染巨噬细胞后释放细胞因子的差异研究目的 了解结核分枝杆菌和上述5种NTM体外感染巨噬细胞后细胞因子的不同表达情况,为建立快速、简便地鉴别结核分枝杆菌和不同菌种非结核分枝杆菌的方法提供依据。方法 选择 IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12/23 p40、IL-27、TNF-α、IP-10、MCP-1等11个因子作为研究对象。分别用MTB标准菌株H37Rv和5种NTM标准菌株(堪萨斯分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、偶发分枝杆菌、脓肿分枝杆菌)感染巨噬细胞,在感染后4小时、8小时、24小时和48小时收集细胞培养上清,Luminex液相芯片方法检测多因子表达水平。同时用LDH法对巨噬细胞的存活率进行测定,CFU计数对巨噬细胞内分枝杆菌的生长情况评估,并在结核病患者、NTM病患者和健康志愿者血浆中进行验证。综合分析筛选可能用于结核病与NTM病诊断以及鉴别诊断的细胞因子组合。结果 1.结核分枝杆菌感染细胞组、NTM菌株感染细胞组与未感染对照组进行比较发现:各分枝杆菌感染组IP-10表达量均高于未感染组,且在各个分枝杆菌感染组均有不同程度增高。结核分枝杆菌、堪萨斯和胞内分枝杆菌感染组释放的IL-6表达量升高,而鸟分枝杆菌和2个快生长菌株感染组无明显增高。结核分枝杆菌感染后释放的IL-10与NTM感染组和未感染组均有显着性差异。结核分枝杆菌感染组的IL-12/23p40与5种NTM感染组比较有显着增高。IL-4、IFN-γ和MCP-1在感染组和未感染组无明显差别。TNF-α在感染组表达水平降低。IL-2和IL-2R-α表达量低于检测下限。2.结核病患者、NTM病患者(鸟分枝杆菌病、胞内分枝杆菌病和脓肿分枝杆菌病)与健康志愿者患者血浆细胞因子表达水平进行比较:结核病患者和3组NTM病患者的TNF-α、MCP-1、IL-2R-α和IL-6水平均显着高于健康志愿者组,且3组NTM病患者之间的TNF-α水平也有显著性差异。IL-2、IL-4、IL-12/23p40和IFN-y在结核病患者组较健康志愿者显着增高。结论 1.在巨噬细胞感染模型中,IP-10和IL-10可以区分结核分枝杆菌和NTM感染,IP-10还可以区别所感染的NTM菌种。IL-6和IL-12/23p40在结核分枝感染后表达上升,和NTM感染组有显着差异。TNF-α表达水平可区别分枝杆菌感染和未感染组。2.不同种分枝杆菌感染巨噬细胞的应答模式不同,细胞因子在不同菌株感染中的表达模式有差异性,可能与细菌的毒力和致病能力有关。IL-6、IL-12/23p40和TNF-α有望在体外和体内用作鉴别不同菌种感染的诊断指标。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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