基于ThT荧光寿命检测蛋清溶菌酶蛋白寡聚体

论文摘要

采用时间分辨荧光技术,检测了不同形态蛋白聚集体的荧光染料硫磺素T(ThT)荧光寿命.利用蛋清溶菌酶体外制备了蛋白聚集体;采用透射电子显微镜(TEM)及ThT稳态荧光检测了结合蛋白纤维生长的动力学曲线,确定其形成寡聚体及纤维样聚集体的特征和时间.通过时间相关单光子计数(TCSPC)技术测定了蛋清溶菌酶单体、寡聚体和淀粉样纤维的ThT荧光寿命曲线,并拟合、计算其荧光寿命.根据圆二色谱(CD)分析结果推测聚集体的结构不同导致其与ThT的结合状态不同,从而影响ThT荧光寿命.结果表明,通过测定ThT荧光寿命可以区分蛋白单体、寡聚体和纤维样聚集体,并监测蛋白寡聚体的形成,为后续病理蛋白聚集过程中形成寡聚体物质的监测提供了研究基础.

论文目录

• 1 实验部分
•   1.1 试剂与仪器
•   1.2 实验过程
•     1.2.1 蛋清溶菌酶聚集体的制备
•     1.2.2 透射电子显微镜 （TEM） 表征蛋清溶菌酶聚集体形态
•     1.2.3 蛋清溶菌酶聚集的ThT荧光光谱检测
•     1.2.4 聚集体ThT荧光寿命的时间分辨荧光技术检测
•     1.2.5 蛋清溶菌酶聚集体二级结构的圆二色光谱 （CD） 分析
• 2 结果与讨论
•   2.1 蛋清溶菌酶聚集的TEM表征
•   2.2 与纤维结合的Th T的吸收及发射光谱分析
•   2.3 蛋清溶菌酶蛋白聚集体的Th T稳态荧光光谱分析
•   2.4 蛋清溶菌酶蛋白聚集体形成的Th T荧光寿命检测
•   2.5 蛋清溶菌酶聚集体结构的CD谱分析
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李成,宋吉雪,刘婷婷,李妍,刘冰南,王亮,肖珊,李琳,耿旭辉,王际辉

关键词: 寡聚体,硫磺素,时间相关单光子计数,荧光寿命

来源: 高等学校化学学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,医药卫生科技

专业: 一般化学工业,临床医学

单位: 大连工业大学生物工程学院,东莞理工学院化学工程与能源技术学院,中国科学院分离分析化学重点实验室

基金: 国家重点研发计划项目(批准号:2016YFD0400203),辽宁省自然科学基金重点项目(批准号:20170520043),中国科学院分离分析化学重点实验室开放基金(批准号:KL-1704)资助~~

分类号: R446.1;TQ617.3

页码: 90-95

总页数: 6

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