导读:本文包含了反义鲨烯合酶基因论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:青蒿素,反义基因,载体构建
反义鲨烯合酶基因论文文献综述
罗晓莉,周耀芳[1]（2013）在《青蒿反义鲨烯合酶基因植物表达载体PBI121-SS的构建》一文中研究指出目的:利用基因工程对野生青蒿进行人工操纵来提高其青蒿素生产能力。方法:从已有载体pROKII-SS通过PCR获得鲨烯合酶基因(SS),然后连接pMD-18载体,测序后,酶切,连接表达载体PBI121-SS,通过菌液PCR,抽取质粒,酶切检测。结果:通过上述方法植物表达载体PBI121-SS构建成功,并转化农杆菌LBA4404。(本文来源于《中国民族民间医药》期刊2013年21期）
孔建强,王丽娜,支晓慧,程克棣,王伟[2]（2010）在《反义鲨烯合酶基因对酵母工程菌中紫穗槐-4,11-二烯产量的影响》一文中研究指出克隆了四种鲨烯合酶基因片段,将其反向克隆到酿酒酵母表达载体pYeDP60/G中,获得四种含反义鲨烯合酶基因片段的酿酒酵母表达载体:pYeDP60/G/SQS12,pYeDP60/G/SQS34,pYeDP60/G/SQS56和pYeDP60/G/SQS78。将上述四个表达载体分别和pGADADS,pGBT9/A/HMG/G/FPP共转化酿酒酵母W303-1B和WK1,获得含反义鲨烯合酶基因片段的紫穗槐-4,11-二烯酵母工程菌。对上述四种酵母工程菌进行发酵培养,通过GC-MS对发酵产物进行检测,结果发现,这四种酵母工程菌均能产生紫穗槐-4,11-二烯,含反义鲨烯合酶基因片段的酵母工程菌中紫穗槐-4,11-二烯的产量比对照要高,鲨烯含量略有下降。实验表明反义鲨烯合酶基因的反义RNA确实能抑制鲨烯合酶基因的表达,从而促进代谢流流向紫穗槐-4,11-二烯合成途径,增加了紫穗槐-4,11-二烯的产量。(本文来源于《2010施慧达杯第十届全国青年药学工作者最新科研成果交流会论文集》期刊2010-07-01）
陈建林,方华明,王红,刘本叶,李国凤[3]（2009）在《反义石竹烯合酶基因对青蒿素生物合成的调控》一文中研究指出青蒿素是存在于中药青蒿(Artemisia annua L.)中的一种含有过氧桥的倍半萜内酯化合物,是中国科学家自主研发的当今最有潜力的抗疟药剂,较传统药剂很少或无毒副作用,因此青蒿素的生产备受人们关注。目前世界上青蒿素的唯一来源是从青蒿植株中直接提取,但是青蒿植株中的青蒿素含量很低(平(本文来源于《第八届全国药用植物及植物药学术研讨会论文集》期刊2009-07-25）
王丽娜[4]（2008）在《反义抑制鲨烯合酶基因表达对产紫穗槐烯酵母工程菌生物合成的影响》一文中研究指出青蒿素是目前治疗疟疾的首选药物,但天然来源受到多种因素制约,通过基因工程方法生产其中间体青蒿酸、进而化学半合成青蒿素是解决资源问题的重要途径之一。为构建青蒿酸高产酵母工程株系,本论文开展了紫穗槐-4,11-二烯(简称:紫穗槐烯,AD)的生物合成途径工程研究并取得如下进展:1.ADS整合型酿酒酵母工程菌的构建:根据同源双交换的原理,构建可以在酿酒酵母的λDNA序列处进行双交换的紫穗槐-4,11-二烯合酶(ADS)基因(ADS)的整合载体。λDNA序列在酿酒酵母基因组中大约有200个拷贝,把外源基因整合在这个位点可以大大提高外源基因在酿酒酵母中表达的拷贝数。构建ADS整合载体首先要把酿酒酵母的强启动子ADH和终止子连在载体上,然后把ADS基因亚克隆到强启动子ADH和终止子之间,再连接一个营养缺陷型筛选标记基因URA3,还要把λDNA序列分成两个交换臂连在所有待整合基因的两端。用这个构建好的载体转化营养缺陷型酿酒酵母,筛选出ADS整合型工程菌。得到的菌株经过发酵培养后,用GC-MS检测发酵产物,经过计算,其中一株工程菌产紫穗槐烯的量达到117.0mg·L~(-1)。2.ADS整合型工程菌和ADS附加体型工程菌AD产率比较:将本论文构建的ADS整合型工程菌和实验室以前构建的ADS附加体型工程菌各选3株,同时发酵培养,然后进行发酵液提取和GC-MS检测。结果显示,整合型工程菌的AD产率明显高于附加体型工程菌的AD产率(P＜0.01)。3.鲨烯合酶基因(SQS)反义RNA表达载体的构建:设计反义RNA时,人们普遍应用由翻译起始位点向上下游延伸0.5kb—3.0kb的片段作为重组质粒的逆向插入序列,5′和3′非翻译区(UTR)往往具有良好的效果。本研究把SQS mRNA的4个基因片段:SQS1(5′-UTR),SQS7(3′-UTR),SQS3*4(5′UTR加5′编码区)以及SQS5*6(3′-编码区加3′-UTR)分别反向插入到pYeDP60的GAL10/CYC1半乳糖诱导型启动子的下游,构建成4个相应的SQS反义RNA表达载体pYeD/SQS1、pYeD/SQS7、pYeD/SQS3*4、pYeD/SQS5*6。4.SQS反义RNA表达对AD酿酒酵母工程菌生物合成的影响:用上述4个SQS反义RNA表达载体分别转化ADS整合型酵母工程菌,得到含有SQS反义RNA的ADS酵母工程菌。用GC-MS检测发酵产物中的AD和鲨烯(SQ)的量,初步研究发现,转入SQS反义表达载体后,鲨烯(SQ)和AD的产率比转入前均有所下降。可能的原因是:所分析的重组菌样本量比较少,而这些重组菌中转入的反义基因片段除了引起SQS表达下调以外,还引起ADS表达的部分抑制。本论文还开展了重组SARS未知功能小蛋白的大肠杆菌表达、纯化及抗体制备研究:5.SARS-CoV未知功能小蛋白的表达、纯化、鉴定及抗体制备:在大肠杆菌BL21trxB(DE3)中,表达了重组SARS-CoV未知功能小蛋白X4、X5和ORF10。对X5和ORF10重组蛋白进行了Ni~+亲和层析纯化。ORF10纯化时,用低浓度咪唑(60mM·L~(-1))梯度洗脱,获得22KD和44KD两个蛋白条带;在用高浓度咪唑(120mM·L~(-1))梯度洗脱时,只有分子量大小为22KD的蛋白条带。制备这两种条带并送中国科学院生物物理研究所进行LC-MS/MS测定,结果显示:在22KD和44KD两种蛋白样品中均能检测到与ORF10蛋白序列100%同源的若干个片段,两种样品所测得的片段分别占总ORF10蛋白序列理论值的38.3%和45.1%,由此推测:所获得的重组蛋白就是ORF10蛋白,其中44KD的蛋白条带可能是该蛋白的二聚体的形式,这也很可能是病毒进入人体后起作用的形式。在纯化X5蛋白时,用和ORF10一样的纯化方法却没有得到X5蛋白,推测X5蛋白是以包涵体形式存在。用尿素变性溶解包涵体,然后所得上清用亲和柱层析,Tris缓冲液复性的办法得到了高产率、高纯度的蛋白。用复性后的蛋白免疫兔子得到了高效价的X5蛋白的抗血清。Western免疫印迹显示尿素变性纯化再复性的X5蛋白的抗体能够和菌体中表达的X5蛋白结合。以包涵体形式表达的X5蛋白纯化后的产率达到93.3mg·L~(-1)是以非包涵体形式表达的ORF10蛋白纯化后产率的5倍。(本文来源于《中国协和医科大学》期刊2008-06-01）
冯丽玲[5]（2007）在《青蒿反义鲨烯合酶基因转化培育青蒿素高产植株的研究》一文中研究指出青蒿素是由我国科研人员自主研发并为国际所公认的一种抗疟有效单体。野生青蒿中青蒿素含量过低，难以满足疟疾治疗中对青蒿素的迫切需求。由于常规育种在青蒿素高产方面的作用有限，因此在青蒿素合成代谢途径已被阐明的情况下，通过基因工程对野生青蒿的青蒿素生产能力进行人工操纵不失为大幅度提高青蒿素含量的最佳选择。已有证据表明，当植株接触真菌刺激物时，其鲨烯合酶基因(SS)表达下调，从而导致类固醇积累减少，同时倍半萜合成增加，暗示类固醇合成阻遏可能导致倍半萜合成途径活化。为了培育青蒿素高产的转基因青蒿植株，我们用Ti质粒衍生的双元载体上携带反义SS基因的工程农杆菌对青蒿外植体进行遗传转化。本文描述了转反义SS基因后内源SS基因的抑制及其后果：在所获得的3棵转基因植株中，通过Southern印迹杂交已对反义SS基因整合的拷贝数进行计数(1个至多个拷贝)。半定量RT-PCR分析结果显示，反义SS基因的功能表达已导致内源SS基因表达下调，使SS mRNA水平下降，类固醇含量也从0.8mg／g鲜重降低到0.4-0.5mg／g鲜重，降幅达50％。转基因青蒿植株青蒿素含量(12.3mg／g干重)远比非转基因青蒿植株青蒿素含量(4.5mg／g干重)为高。为了进一步将碳流引向青蒿素，我们对转基因植株进行了短暂的冷胁迫处理(4℃，30min)，结果使青蒿素含量进一步提高，其中最高者达到16.6mg／g干重。因此，采取类固醇合成阻遏与冷诱导青蒿素合成基因高效表达的联合策略可以显着促进青蒿素的高产，可望最终培育出转基因高产青蒿素新品系。(本文来源于《广州中医药大学》期刊2007-04-01）
宋玉刚[6]（2006）在《反义鲨烯合酶基因表达对青蒿素生物合成的影响》一文中研究指出青蒿素是从中药青蒿中提取的新型抗疟药物,然而,青蒿素在青蒿中的含量非常低。近年来,随着青蒿素生物合成途径相关酶基因的克隆,基因工程成为提高青蒿素含量的有效途径之一。在对青蒿进行遗传转化过程中,高效稳定的丛生芽诱导体系是青蒿转化成功的关键。然而,随着继代次数的增多,青蒿丛生芽诱导能力存在退化现象。本文首先研究了滤纸对青蒿丛生芽诱导的影响和在遗传转化中的应用,进而研究了反义鲨烯合酶基因表达对青蒿素生物合成的影响。主要结果如下:研究了在丛生芽诱导培养基上加铺滤纸对青蒿丛生芽诱导的影响,结果发现,加铺滤纸后青蒿丛生芽诱导率显着提高,丛生芽诱导率能够达到97%左右。在此高效丛生芽诱导体系的基础上,我们进一步探讨了滤纸在青蒿遗传转化中的应用。结果表明,在筛选培养基上加铺一层滤纸,青蒿的抗性丛生芽诱导率能够达到59.7%,其中在12.5%的抗性丛生芽中能够得到抗性生根植株,生根植株PCR检测均为阳性,在部分PCR检测阳性的植株中检测到了GUS的稳定表达。利用上述改进的青蒿遗传转化体系,我们得到了反义鲨烯合酶基因的青蒿转化植株。PCR检测和Southern杂交检测结果证明了反义鲨烯合酶基因已经整合到青蒿基因组中。RT-PCR检测发现,在转基因株系ASQ3和ASQ5中鲨烯合酶基因在mRNA水平上得到部分抑制,鲨烯含量比对照降低了20%左右;青蒿素的含量分别提高了23.2%和21.5%,结果表明抑制鲨烯合酶表达能够有效促进青蒿中青蒿素的生物合成。(本文来源于《中国科学院研究生院（植物研究所）》期刊2006-05-01）
张毅,刘彦,王红,叶和春,李国凤[7]（2005）在《转青蒿反义鲨烯合酶基因对烟草鲨烯合酶基因表达的影响》一文中研究指出利用反义技术,通过根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导,将青蒿(Artemisiaannua)的反义鲨烯合酶基因导入烟草(Nicotianatabacum)株系W38中。在转基因烟草中,鲨烯合酶的表达成功地得到抑制,其mRNA的水平降低。对鲨烯合酶的下游产物之一胆固醇的检测显示,转基因烟草的胆固醇含量低于对照,同时以法呢基焦磷酸为前体的二萜支路产物之一的GA3含量得到提高。实验结果表明,反义抑制烟草鲨烯合酶可以降低植物甾醇的生物合成,并促进类异戊二烯途径中以法呢基焦磷酸为前体的其它代谢支路的生物合成。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2005年04期）
反义鲨烯合酶基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
克隆了四种鲨烯合酶基因片段,将其反向克隆到酿酒酵母表达载体pYeDP60/G中,获得四种含反义鲨烯合酶基因片段的酿酒酵母表达载体:pYeDP60/G/SQS12,pYeDP60/G/SQS34,pYeDP60/G/SQS56和pYeDP60/G/SQS78。将上述四个表达载体分别和pGADADS,pGBT9/A/HMG/G/FPP共转化酿酒酵母W303-1B和WK1,获得含反义鲨烯合酶基因片段的紫穗槐-4,11-二烯酵母工程菌。对上述四种酵母工程菌进行发酵培养,通过GC-MS对发酵产物进行检测,结果发现,这四种酵母工程菌均能产生紫穗槐-4,11-二烯,含反义鲨烯合酶基因片段的酵母工程菌中紫穗槐-4,11-二烯的产量比对照要高,鲨烯含量略有下降。实验表明反义鲨烯合酶基因的反义RNA确实能抑制鲨烯合酶基因的表达,从而促进代谢流流向紫穗槐-4,11-二烯合成途径,增加了紫穗槐-4,11-二烯的产量。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
反义鲨烯合酶基因论文参考文献
[1].罗晓莉,周耀芳.青蒿反义鲨烯合酶基因植物表达载体PBI121-SS的构建[J].中国民族民间医药.2013
[2].孔建强,王丽娜,支晓慧,程克棣,王伟.反义鲨烯合酶基因对酵母工程菌中紫穗槐-4,11-二烯产量的影响[C].2010施慧达杯第十届全国青年药学工作者最新科研成果交流会论文集.2010
[3].陈建林,方华明,王红,刘本叶,李国凤.反义石竹烯合酶基因对青蒿素生物合成的调控[C].第八届全国药用植物及植物药学术研讨会论文集.2009
[4].王丽娜.反义抑制鲨烯合酶基因表达对产紫穗槐烯酵母工程菌生物合成的影响[D].中国协和医科大学.2008
[5].冯丽玲.青蒿反义鲨烯合酶基因转化培育青蒿素高产植株的研究[D].广州中医药大学.2007
[6].宋玉刚.反义鲨烯合酶基因表达对青蒿素生物合成的影响[D].中国科学院研究生院（植物研究所）.2006
[7].张毅,刘彦,王红,叶和春,李国凤.转青蒿反义鲨烯合酶基因对烟草鲨烯合酶基因表达的影响[J].农业生物技术学报.2005