导读:本文包含了聚合酶基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:转基因,基因,突变,引物,质粒,腺苷,快速。
聚合酶基因论文文献综述
陈载鑫,何丹,谢岭平,李柳燕,许红丽[1]（2019）在《两种聚合酶在等位基因特异性引物延伸法检测SNP中的应用比较》一文中研究指出目的比较TaqTMHotStarDNA聚合酶和TspTMPlatinum DNA聚合酶在等位基因特异性引物延伸法检测SNP中的应用效果。方法取120例抗血栓治疗患者全血进行DNA提取、多重PCR扩增,将产物分2份,1份用TaqTMHotStarDNA聚合酶进行等位基因特异性引物延伸,1份用TspTMPlatinum DNA聚合酶进行等位基因特异性引物延伸,然后进行杂交反应,用Luminex 200系统检测CYP2C19基因多态性,同时将所有样本送第叁方进行基因测序。结果 TaqTMHotStarDNA聚合酶组检测结果与测序结果完全一致,TspTMPlatinum DNA聚合酶则会出现一些偏差,说明TaqTMHotStarDNA聚合酶参与的检测结果分辨率明显高于TspTMPlatinum DNA聚合酶参与的检测结果。结论两种聚合酶在等位基因特异性引物延伸法检测SNP中均可以取得一定的检测结果,但是为了结果的可靠性建议在检测过程中使用TaqTMHotStarDNA聚合酶。(本文来源于《泰山医学院学报》期刊2019年11期）
李妮,王海杰,吕诗韵,杜沧浩,孙鸽[2]（2019）在《EV713D聚合酶基因体外重组质粒的构建、表达及活性检测》一文中研究指出目的构建编码肠道病毒71型(EV71)3D聚合酶基因的重组质粒,表达和纯化3D聚合酶并检测其活性。方法将编码3D聚合酶的基因片段克隆至pGEX-4T-1原核表达载体,重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析、TEV酶酶切、Ni-NTA柱亲和纯化后获得高纯度3D聚合酶蛋白,放射测量法是体外酶活力测定方法中较常见的一种方法,本研究通过测定插入poly(U) RNA放射性标志UMP的量确定3D聚合酶的活性。结果经酶切、PCR、测序鉴定pGEX-4T-3D重组质粒构建成功,3D聚合酶基因片段大小为1 386 bp。与未诱导相比,经IPTG诱导后带有GST标签的3D聚合酶成功表达,表达产物的相对分子质量约为79×10~3,TEV酶酶切掉GST标签后的相对分子质量约为55×10~3。纯化的3D聚合酶经体外延伸反应后跑变性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳得知,3D聚合酶溶解液DMSO组相比于3D聚合酶强抑制剂EDTA组,在DMSO组中,可以观察到强电泳条带,表明放射性同位素标志程度强,表明反应速率快,即3D聚合酶酶活较好。结论构建了EV71 3D聚合酶基因重组质粒,其表达产物3D聚合酶为以EV71 3D聚合酶为靶点的抗EV71药物筛选奠定基础。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2019年09期）
万里江,朱珍[3]（2019）在《恩替卡韦耐药的乙型肝炎患者HBV聚合酶基因变异分析》一文中研究指出目的探讨恩替卡韦耐药患者乙肝病毒(HBV)P区基因位点突变发生的频率和特点。方法通过测序法分析102例恩替卡韦耐药株感染者HBV P区173,180,184,202,204和250共6个位点的变异情况。结果乙肝病毒P区耐药相关位点中180位点的突变频率最高。不同性别的患者中,只有180位点变异频率,差异有统计学意义(P<0.05)。不同年龄段患者中所有位点突变率,差异均无统计学意义(P>0.05)。发生rtL180M变异的患者中,有97.18%(69/71)的患者204位点也发生了变异。在204位点各种变异类型中,有70.41%(69/98)的患者180位点也发生了变异。结论乙肝病毒P区耐药位点突变主要集中在180和204位点。测序法可全面反映P区位点的变异情况,对预防耐药、合理制订抗乙肝病毒治疗方案十分重要。(本文来源于《临床医药文献电子杂志》期刊2019年72期）
王燕,董晓庆,董潇潇,许文炯,张洪英[4]（2019）在《重组聚合酶扩增技术(RPA)定量检测淋巴细胞中的HIV-1pol基因》一文中研究指出目的建立一种方便快捷的重组聚合酶介导等温扩增技术定量检测HIV-1 DNA的方法。方法参考文献合成1对引物,选择内参基因,用标准品扩增结果绘制标准曲线,对HIV血清学确证阳性(HIV抗体阳性)样本的淋巴细胞总DNA进行检测。结果 HIV-1 DNA标准品在102～106拷贝线性关系良好,R=0. 99,HIV血清学确证阳性病人淋巴细胞检测结果均为HIV DNA阳性。结论本研究初步建立了内标法定量快速检测淋巴细胞中HIV-1 DNA的方法,为HIV感染检测提供一个新的方法。(本文来源于《医学动物防制》期刊2019年10期）
吴青峻,田文鑫,于瀚博,黄川,焦鹏[5]（2019）在《肺癌组织中DNA聚合酶β基因突变的研究》一文中研究指出背景与目的 DNA聚合酶β是参与DNA损伤修复的关键酶之一,国外有学者认为其编码基因Polb在30%的肿瘤中存在遗传突变,但受到所用标本量的限制,这一结论是否准确尚无定论。本研究基于基因测序技术,通过对69例肺癌患者组织标本的基因筛查,旨在明确DNA聚合酶β的基因突变在中国汉族人群肺癌患者中的发生频率。方法利用盐析法提取69例肺癌患者的癌及癌旁组织基因组DNA,并用于扩增Polb基因全部14个外显子区及启动子区。通过与NCBI数据库中野生型基因序列进行比对,系统分析肺癌组织中的Polb基因突变及其频率。结果相对于野生型,本研究共发现5种突变类型,其中3种(-196G>T,-188_-187insCGCCC,-168C>A)位于启动子区,2种(587C>G, 612A>T)位于外显子区,突变类型-188_-187insCGCCC和587C>G尚未见文献报道,后者可引起第196位氨基酸由苏氨酸突变为丝氨酸。另一方面,癌和癌旁组中均可检测到所有5种突变类型,提示这些突变并非肺癌组织所特有。结论肺癌组织中未发现特异性表达的Polb基因突变位点,Polb基因突变可能不是中国汉族肺癌患者的肿瘤标志物。(本文来源于《中国肺癌杂志》期刊2019年07期）
杨晨,李娟,丁清龙,周露[6]（2019）在《实时荧光定性聚合酶链式反应标准方法检测转基因产品的验证及应用》一文中研究指出目的验证实验室大豆、玉米和水稻及其制品转基因检测方法,并应用于实际样品检测。方法根据GB 19495.4-2018《转基因产品检测实时荧光定性聚合酶链式反应(PCR)检测方法》要求对无转基因标识的样品进行转基因成分检测。结果方法验证满意。40批次样品(大豆、玉米和水稻及其制品)中发现1批次的转基因成分检出,检出率为2.5%。结论市场中绝大部分未标示转基因成分的大豆、玉米和水稻及其制品确实未检出转基因成分,仅有极少数产品含有转基因成分,但未进行有效标识。(本文来源于《食品安全质量检测学报》期刊2019年13期）
谢实龙,汪小福,丁晨露,祝旋,汤婷[7]（2019）在《转基因大豆MON89788实时荧光重组酶聚合酶扩增检测方法的建立》一文中研究指出MON89788是较早被批准商业化种植的转基因大豆(Glycine max)品种,种植范围广,产品流通量大。本研究利用重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification, RPA),针对MON89788的转化体特异性序列设计了引物和探针,利用正反向引物筛选的方法获得了最佳引物组合,并对反应的温度、引物和探针的浓度进行了优化选择。结果表明,RPA在29.5～43.1℃范围内都能扩增,对温度的容忍度较大,高浓度的探针会影响实时荧光RPA的扩增效率。同时对实时荧光RPA检测体系的特异性、灵敏度和适用性等进行测试,最终建立了MON89788实时荧光RPA检测方法。该检测方法特异性强,对MON89788的绝对检测限(absolute limit of detection, aLOD)可达到40拷贝,相对检测限(relative limit of detection, rLOD)为0.05%,对实际样品的检测在39℃,10 min内完成,是实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)检测时间的0.07～0.13倍。该恒温、快速的检测方法为转基因成分的快速检测提供了新的技术支持,有望用于转基因成分的现场快速检测。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年07期）
李晨雄,宋洁云,宋绮莹,刘峥,王海俊[8]（2019）在《多聚双磷酸腺苷核糖聚合酶-1基因与儿童肥胖和非酒精性脂肪肝的关联》一文中研究指出目的研究多聚双磷酸腺苷核糖聚合酶-1(PARP1)基因rs1136410多态性与儿童青少年肥胖和非酒精性脂肪肝(NAFLD)的关系,为阐明儿童青少年肥胖和NAFLD的发病机制与制定早期预防策略提供依据。方法选取北京市2 030名7～18岁中小学生进行身体测量,并对部分学生进行肝脏B超检查。利用基质支持的激光释放/电离飞行时间质谱分析(MALDI-TDF MS)对PARP1基因rs1136410多态性进行检测。采用多元Logistic回归分析rs1136410多态性与儿童青少年肥胖或NAFLD的关系。结果 2 030名中小学生中,检出肥胖者705名。在所有样本中,PARP1基因rs1136410的G和A的等位基因频率分别为43.86%和56.14%。校正性别、年龄和研究人群后发现,PARP1基因rs1136410多态性每增加1个A等位基因,发生肥胖的风险增加为1.17倍(95%CI=1.02～1.33,P=0.03),发生非酒精性脂肪肝的风险增加为1.43倍(95%CI=1.11～1.85,P=0.01);进一步校正BMI后,rs1136410多态性与NAFLD无相关性(P=0.70)。结论 PARP1基因rs1136410多态性与儿童青少年肥胖和NAFLD有相关性,该基因多态性对NAFLD的作用可能是通过影响BMI实现。(本文来源于《中国学校卫生》期刊2019年06期）
谢实龙[9]（2019）在《转基因成分重组酶聚合酶扩增（RPA）快速检测方法的建立》一文中研究指出随着越来越多的转基因作物及其制品进入市场,势必会对其安全监管体系提出更高的要求。近年来恒温核酸扩增技术的快速发展促进了RPA扩增技术在转基因检测中的应用,RPA技术良好的性能、简单的操作、便捷的设备、低廉的价格,迅速引起高度关注及开发研究热潮,可以真正实现便携式的检测设备。本实验旨在利用实时荧光RPA扩增技术建立转基因作物及其产品快速检测,并为其他检测体系的建立提供参考。本研究主要有以下叁部分实验构成:实验一为了实现对转基因作物及产品的初步快速筛查,通过ISAAA Briefs发布的数据分析,挑选出4种应用最广泛的转基因通用元件CaMV35s、BT、NOS、PAT,根据转基因通用元件特异性序列设计引物与探针,结合冻干粉技术建立6连管实时荧光RPA快速筛查体系。该体系具有较高的特异性和灵敏度,能有效的检出最低48拷贝数的模板。对实际样品的筛查中,筛查结果稳定可靠,在转基因成分检测中具有广泛的应用价值。实验二为了实现对转基因大豆MON89788品系检测,根据其转化体特异性序列设计引物与探针,建立了转基因大豆MON89788的RPA实时荧光检测方法,并就影响RPA扩增的关键因子,如最佳引物的筛选、引物与探针终浓度的配制、反应温度等进行了系统研究分析。该检测方法特异性强,对MON89788的绝对检测限达到40拷贝,相对检测限为0.05%。实验叁根据转基因玉米品系MON863转化体特异性序列设计了引物与探针,建立了转基因大豆MON863的RPA实时荧光检测方法,测试不同的反应温度和探针和引物的浓度,优化出了最佳反应条件。使用便携式仪器实时监测RPA的荧光。通过实时RPA结合基于NaOH的DNA提取方法来省略纯化步骤直接扩增来自粗细胞裂解物的游离DNA提取物,并且实时显示扩增结果,并与RT-PCR检测的结果和检测耗时比较,其中两种方法的检测结果一致,RT-RPA的平均检测时间为8.46分钟,RT-PCR的平均检测时间为37.23。与RT-PCR相比,RT-RPA花费的时间要少得多。包括1分钟的准备样品,RT-RPA整个检测过程大约10分钟。综上所述,基于实时荧光重组酶聚合酶扩增技术建立的快速检测方法,表现出高度准确性和特异性,耗时短、操作简单,该方法不仅适用于转基因成分的现场筛选,在其他诸多领域同样具有很大的应用潜力。(本文来源于《阜阳师范学院》期刊2019-06-14）
李华,杨玲玲,杜红旗[10]（2019）在《重组Tth DNA聚合酶基因的克隆表达及活性鉴定》一文中研究指出Tth DNA聚合酶具有聚合酶与反转录酶两种功能,而且耐高温,但是国内并未实现高效生产.本研究以粗提的嗜热栖热菌Thermus thermophilus基因组为模板,采用PCR分段扩增和酶切连接的方法获得Tth DNA聚合酶基因全长序列;然后构建重组质粒pXT99b/Tth并转化表达菌E.coli DH5α,利用IPTG诱导Tth基因表达,并采用热处理、Ni2+柱纯化融合His-tag的Tth DNA聚合酶,最后利用PCR、RT-PCR鉴定其活性.结果显示,本研究获得Tth DNA聚合酶基因全长2 505bp,成功表达并获得高纯度高活性的重组Tth DNA聚合酶,1L发酵液所得粗酶液中,酶活性约有800 000U,酶的比活约为6 315U/mg.本研究最终实现了Tth DNA聚合酶的高效国产化并降低了实验成本.(本文来源于《河南大学学报(自然科学版)》期刊2019年03期）
聚合酶基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建编码肠道病毒71型(EV71)3D聚合酶基因的重组质粒,表达和纯化3D聚合酶并检测其活性。方法将编码3D聚合酶的基因片段克隆至pGEX-4T-1原核表达载体,重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析、TEV酶酶切、Ni-NTA柱亲和纯化后获得高纯度3D聚合酶蛋白,放射测量法是体外酶活力测定方法中较常见的一种方法,本研究通过测定插入poly(U) RNA放射性标志UMP的量确定3D聚合酶的活性。结果经酶切、PCR、测序鉴定pGEX-4T-3D重组质粒构建成功,3D聚合酶基因片段大小为1 386 bp。与未诱导相比,经IPTG诱导后带有GST标签的3D聚合酶成功表达,表达产物的相对分子质量约为79×10~3,TEV酶酶切掉GST标签后的相对分子质量约为55×10~3。纯化的3D聚合酶经体外延伸反应后跑变性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳得知,3D聚合酶溶解液DMSO组相比于3D聚合酶强抑制剂EDTA组,在DMSO组中,可以观察到强电泳条带,表明放射性同位素标志程度强,表明反应速率快,即3D聚合酶酶活较好。结论构建了EV71 3D聚合酶基因重组质粒,其表达产物3D聚合酶为以EV71 3D聚合酶为靶点的抗EV71药物筛选奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
聚合酶基因论文参考文献
[1].陈载鑫,何丹,谢岭平,李柳燕,许红丽.两种聚合酶在等位基因特异性引物延伸法检测SNP中的应用比较[J].泰山医学院学报.2019
[2].李妮,王海杰,吕诗韵,杜沧浩,孙鸽.EV713D聚合酶基因体外重组质粒的构建、表达及活性检测[J].中国病原生物学杂志.2019
[3].万里江,朱珍.恩替卡韦耐药的乙型肝炎患者HBV聚合酶基因变异分析[J].临床医药文献电子杂志.2019
[4].王燕,董晓庆,董潇潇,许文炯,张洪英.重组聚合酶扩增技术(RPA)定量检测淋巴细胞中的HIV-1pol基因[J].医学动物防制.2019
[5].吴青峻,田文鑫,于瀚博,黄川,焦鹏.肺癌组织中DNA聚合酶β基因突变的研究[J].中国肺癌杂志.2019
[6].杨晨,李娟,丁清龙,周露.实时荧光定性聚合酶链式反应标准方法检测转基因产品的验证及应用[J].食品安全质量检测学报.2019
[7].谢实龙,汪小福,丁晨露,祝旋,汤婷.转基因大豆MON89788实时荧光重组酶聚合酶扩增检测方法的建立[J].农业生物技术学报.2019
[8].李晨雄,宋洁云,宋绮莹,刘峥,王海俊.多聚双磷酸腺苷核糖聚合酶-1基因与儿童肥胖和非酒精性脂肪肝的关联[J].中国学校卫生.2019
[9].谢实龙.转基因成分重组酶聚合酶扩增（RPA）快速检测方法的建立[D].阜阳师范学院.2019
[10].李华,杨玲玲,杜红旗.重组TthDNA聚合酶基因的克隆表达及活性鉴定[J].河南大学学报(自然科学版).2019
论文知识图
