导读:本文包含了双元表达载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:水稻,水孔蛋白,HA标签,蛋白表达
双元表达载体论文文献综述
王晓静,孙林静,孙玥,张融雪,李军玲[1]（2019）在《HA标签的水稻水孔蛋白OsPIP2;7基因植物双元表达载体构建及转基因水稻的获得》一文中研究指出为研究水稻水孔蛋白OsPIP2;7基因在非生物胁迫中的生物学功能,根据OsPIP2;7基因序列设计特异性引物,以水稻品种中花11的叁叶龄叶片RNA反转录的cDNA第一链为模板,克隆OsPIP2;7。采用嵌套PCR的方法,将3×HA标签的碱基序列连接在去除终止子OsPIP2;7基因序列的3′端,然后将此核酸片段插入到植物双元表达载体pHB中,构建pHB-OsPIP2;7-3×HA载体。以中花11成熟胚愈伤组织为材料,采用农杆菌介导的方法进行遗传转化,经过在含有潮霉素的培养基上筛选和分化,获得阳性转化子。提取转基因植株的DNA,进行潮霉素阳性植株的筛选。将阳性植株进行RNA表达检测,获得OsPIP2;7基因表达量上升的转基因阳性植株。为了检测转基因植株中OsPIP2;7蛋白的表达情况,提取OsPIP2;7基因表达上升的转基因植株膜蛋白后,用HA抗体进行杂交的Western-blot检测结果显示,OsPIP2;7-HA蛋白在转基因阳性植株体内过量表达。获得的过表达OsPIP2;7转基因新材料,将为研究OsPIP2;7基因的生物学新功能提供试验基础。(本文来源于《华北农学报》期刊2019年05期）
罗雯,艾佐佐,刘艳梅,刘旺喜[2]（2018）在《EV71抗原双元植物表达载体构建及生菜瞬时表达》一文中研究指出[目的]构建EV71 P1和3CD基因的双元植物表达载体,通过农杆菌注射渗透法实现在生菜叶片中的瞬时共表达。[方法]根据Gen Bank序列,设计合成EV71 C4亚型P1和3CD基因,分步克隆入植物表达载体p CAMBIA2301,并转化农杆菌LBA4404。农杆菌注射渗透法对意大利生菜叶片进行遗传转化,固相酶联斑点实验和免疫印迹实验检测感染叶片总蛋白提取物,分析外源基因表达效果。[结果]限制酶切验证获得共表达植物表达载体p CAMBIA2301-P1-3CD。感染叶片的外源基因表达产物中具有抗VP1抗体结合活性的蛋白,其分子量约39 k Da。[结论]成功构建EV71 3CD和P1基因双元植物表达载体,其在意大利生菜叶片中的表达产物具有免疫反应性。为利用植物生物反应器生产抗EV71口服疫苗提供了理论和实验依据。(本文来源于《生物技术》期刊2018年01期）
贺永国,李哲,黄绵佳,曾宪海,林位夫[3]（2016）在《橡胶树乳管表达HbHMGR1基因双元表达载体构建与鉴定》一文中研究指出【目的】克隆橡胶树乳管特异性强启动子HEV2.1(PHEV2.1),构建天然橡胶生物合成途径关键限速酶基因(Hb HMGR1)的乳管特异性植物表达载体,为橡胶树遗传转化奠定基础。【方法】根据已报道的HEV2.1序列(Gen Bank登录号AY247789.1)设计1对特异引物,采用PCR从橡胶树热研7-33-97基因组DNA中克隆PHEV2.1,与Hb HMGR1基因融合构建橡胶树乳管特异性植物表达载体,并以PCR和限制性内切酶酶切进行鉴定。【结果】用特异引物可从热研7-33-97基因组DNA中扩增获得1852 bp的PHEV2.1片段,其与AY247789.1启动子序列的同源性为98.6%。将PHEV2.1与Hb HMGR1基因融合构建乳管特异性植物表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1,经PCR和限制性内切酶酶切鉴定证明植物表达载体构建成功。【结论】将PHEV2.1和Hb HMGR1基因先构建到p CAMBIA3301载体上再克隆至p CAMBIA2301载体上,能有效解决直接克隆至p CAMBIA2301载体上出现Pst I突变、阻碍载体构建的难题,成功构建获得乳管特异性植物表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1。(本文来源于《南方农业学报》期刊2016年02期）
王建民,王淼,葛云侠,刘明春,刘宝山[4]（2015）在《鸡柔嫩艾美耳球虫MIC2基因的克隆与植物双元表达载体的构建》一文中研究指出随着植物基因工程的发展,用转基因植物表达外源蛋白相对于传统疫苗而言是一种更安全、更经济的表达系统。玉米是养鸡业的主体饲料,如果将鸡球虫保护性抗原基因整合到玉米基因组中并表达,再用转基因玉米饲喂鸡,便可预防鸡球虫病。鸡球虫病是养鸡业多发病,死亡率高,对该病通常以药物防控为主,但由此带来的诸如药物残留以及抗药性问题是显而易见的,因此用疫苗来预防鸡球虫病较成为较理想的方法。Etmic2是柔嫩艾美耳球虫微线分泌的蛋白,研究表明EtMIC2基因表达产物能抵御柔嫩艾美耳球虫入侵鸡肠上皮细胞,可作为疫苗的候选分子。本研究根据NCBI上E.tenella豪顿株的MIC2基因cDNA序列(FJ807654.1),设计了特异性引物,经RT-PCR扩增,并将回收产物连接至pEASY-T1 Simple Vector,转化JM109感受态细胞,经PCR和双酶切鉴定,并对鉴定为阳性的克隆质粒进行测序,将测序结果进行序列的比对分析。结果表明:本试验成功扩增出了长为1029bp的MIC2基因的全长cDNA序列,其编码343个氨基酸。与豪顿株相比同源性达99%以上,这说明MIC2基因在不同地理株之间有很高的保守性。再根据MIC2基因序列和植物双元表达载体pCAMBIA-1301设计上下游引物分别含有BglⅡ和BstEⅡ酶切位点、His标签。以克隆载体pEASY-T1-MIC2为模板,用上述引物进行PCR扩增,获得了MIC2全长基因。经纯化、回收后的片段和pCAMBIA-1301质粒用BglⅡ/BstEⅡ双酶切,连接MIC2基因,His标签序列插入植物双元表达载体pCAMBIA1301构建重组载体pCAMBIA1301-MIC2,并利用热应激法转化农杆菌EhA105。结果表明:重组载体pCAMBIA1301-MIC2经双酶切、PCR扩增和序列测定,表明MIC2基因、His标签序列已正确插入pCAMBIA 1301中。在含50mg/L卡那霉素和50mg/L利福平的YEB培养基上筛选及对转化农杆菌质粒进行MIC2基因的PCR和双酶切检测,证明植物双元表达载体pCAMBIA1301-MIC2构建正确。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十叁次学术研讨会论文集》期刊2015-07-25）
连桂云[5]（2014）在《CYP2E1和GST基因双元表达载体的构建及其在紫花苜蓿中的表达》一文中研究指出随着工业化的发展、城市化进程的深入，我国的环境污染不断加剧。土壤环境污染物种类和数量在不断增加，严重损害经济发展和人体健康。目前，土壤污染修复主要有物理/化学修复和生物修复两大类。植物修复是指为利用绿色植物去除环境中的污染物。与传统修复技术相比，植物修复技术因具有更加快速、高效、费用低、便于推广等优点，近年来呈现出良好的发展前景。本研究旨在利用基因工程技术将两个基因转入紫花苜蓿中以提高其对土壤重金属和有机物复合污染的修复能力；谷胱甘肽转移酶基因GST和细胞色素氧化酶基因CYP2E1是两种分别与重金属和有机物抗性、积累相关的基因。目前，国内外尚未出现同时利用这两个基因进行土壤修复的报道。本实验构建含有CYP2E1基因的植物表达载体：用目的基因替换表达载体pBI121上的Gus基因，构建P35S-CYP2E1-T35S表达盒，即质粒pBI121-CYP2E1。然后通过冻融法将表达载体pBI121-CYP2E1转入含目的基因GST的农杆菌LBA4404中。本实验选取“阿尔冈金”紫花苜蓿的下胚轴作为基因转化受体，通过组织培养研究，筛选并优化出胚性愈伤组织的诱导分化条件，构建并优化出适合“阿尔冈金”的遗传转化再生体系。经共转化将GST基因和CYP2E1基因导入“阿尔冈金”紫花苜蓿中。经共培养、选择培养最终获得了240株抗卡那霉素的转基因植株。筛选出的240株抗性植株应用PCR和RT-PCR进行分子学水平检测后，对其转基因植株的抗重金属和有机物功能进行了鉴定。结果表明所获得的抗性紫花苜蓿植株整合了外源目的基因GST和CYP2E1并有效表达。(本文来源于《青岛科技大学》期刊2014-03-25）
宋静静,蒙姣荣,卢晓静,邹承武,陈保善[6]（2014）在《马铃薯StTOM1和StTOM3双干扰植物双元表达载体的构建及转化验证》一文中研究指出病毒病是制约马铃薯生产的重要因素之一。在拟南芥等植物的研究中发现,抑制寄主因子可以显着降低细胞中病毒的累积量,从而缓解病害症状。本研究在获得与拟南芥寄主因子AtTOM1和AtTOM3具有同源性的马铃薯基因StTOM1和StTOM3的基础上,尝试用RNAi方法同时沉默StTOM1和StTOM3。以pUCCRNAi为中间载体,构建同时含StTOM1和StTOM3双基因干扰片段StT1-StT3的质粒pUCStT1-StT3-dRi(±),再将双基因干扰片段StT1-StT3切下并连接到双元载体pBI121上。用农杆菌介导方法,将StT1-StT3片段导入马铃薯中,获得转基因马铃薯小苗,阳性率达到83.6%。RT-PCR检测表明,转StT1-StT3马铃薯中StTOM1基因mRNA的表达水平下调了78%,StTOM3基因下调了81%。StTOM1和StTOM3沉默转基因马铃薯的获得,为将来验证和评价StTOM1和StTOM3是否为马铃薯病毒的寄主因子及在创建抗病毒马铃薯新种质的潜力,奠定了基础。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2014年01期）
胡兰,隋世慧,吴丹[7]（2013）在《MSTN RNAi双元表达载体构建及效果试验》一文中研究指出为了建立有效抑制MSTN基因表达的方法,本试验利用基因克隆技术构建MSTN RNAi双元表达载体,并利用脂质体介导转染成肌细胞、用SDS-PAGE和Western blottingf法检测蛋白质的表达。试验结果表明,以TA载体为克隆载体,pHANNIBAL为中间载体,可成功构建pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体,将其转染成肌细胞48h后,该双元表达载体可明显抑制成肌细胞MSTN基因的表达。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2013年07期）
李宁[8]（2013）在《木果楝属植物内生真菌的相关研究及苦参SfFPT基因植物双元表达载体的构建》一文中研究指出第一部分木果楝可培养内生真菌的多样性及体外抗肿瘤活性近年来,有关红树林内生真菌的活性次级代谢产物的研究显着增多,红树林内生真菌因其独特的生长环境往往具有独特的代谢途径和遗传背景,其次级代谢产物的种类和化学类型多样性也较为丰富。本研究以采自海南叁亚和泰国南部董里府(Trang Province)海岸的木果楝属植物(Xylocarpus)的枝、叶、果皮为材料,通过分离培养的方法从海洋红树林植物—木果楝属植物中分离培养相关真菌,运用分子生物学rDNA-ITS序列分析技术对其进行了分离和初步鉴定,并采用MTT法对菌液乙酸乙酯提取物进行初步体外抗肿瘤活性评价。从3种红树林木果楝属植物中共分离得到百余株内生真菌单菌落,根据菌株的形态特征,包括菌落外观形态、大小、颜色、质地、生长速度、生长培养基颜色等特征初步去重,挑选了51株内生真菌单菌落进行分子生物学鉴定,结果发现它们分属于为子囊菌门3纲9目11科15属26种及担子菌门1种。实验观察到内生真菌在木果楝属植物的叶、枝以及果皮中广泛分布,在种属水平上呈现多样性；不同产地、不同种属植物分离得到的内生真菌在种属组成和数量上存在差异,其中拟茎点霉属Phomopsis、炭疽病菌属Colletotrichum在叁种木果楝属植物中均分离得到,拟茎点霉属Phomopsis、炭疽病菌属Colletotrichum为木果楝属植物可培养内生真菌的优势菌属。16种菌株菌液乙酸乙酯提取物表现出良好的体外抗肿瘤活性。曲霉属Aspergillus terreus葡萄座腔菌属Botryosphaeria、赤霉属Gibberella青霉属Penicillium等菌株代谢产物对人结肠癌细胞HCT-116、人肝癌细胞Bel-7402、人胃癌细胞BGC823、人肺癌细胞A549和人卵巢癌细胞A2780(SK-OV-3)五种肿瘤细胞增殖生长均有良好的抑制作用。多株拟茎点霉属Phomopsis的菌液乙酸乙酯提取物对人结肠癌细胞HCT-116、人胃癌细胞BGC823有良好的选择性抑制活性。这些结果为下一步活性菌株的挑选和代谢产物的分离提供了依据。选择有良好的体外抑肿瘤活性的菌株Trichoderma sp. Xy24(0106)进行放大发酵培养,并对其代谢产物进行初步分离,得到3个化合物,经多种波谱学方法鉴定了其中一个化合物为Trichodimerol。上述研究一方面可为探究木果楝植物与其内生真菌之间的关系奠定基础,另一方面可通过对具有良好药理活性菌株的次级代谢产物进行系统分析分离以寻找具有新颖结构的先导化合物,用于创新药物研究。第二部分苦参SfFPT基因植物双元表达载体的构建黄酮类化合物具多种生物活性,如心血管活性,抗菌抗病毒活性,抗肿瘤活性等,黄酮类化合物的芳环发生异戊烯基取代后能增加其生物利用度、改善其生物活性,增加黄酮的结构多样性。本实验室前期成功地对苦参中黄酮异戊烯基转移酶基因进行克隆,得到了sfFPT基因,并于在酵母真核表达系统中进行表达及功能鉴定,成功地利用工程菌特异性催化多种黄酮类化合物的异戊烯基化。本研究的目的是通过构建植物双元表达载体,将黄酮异戊烯基转移酶基因SfFPT转化到烟草中,展开SfFPT基因在植物中表达与催化功能研究,取得了如下结果：(1)通过设计引物将SfFPT基因正向插入载体的CaMv35S启动子和NOS终止子之间,构建重组植物双元表达载体,pC05-Sf-GUS.pC05一Sf-NR、pC02-Sf-GFP。(2)将相应重组表达载体分别导入到发根农杆菌K599和根癌农杆菌LBA4404中。(3)用根癌农杆菌LBA4404-p02sf-gfp.K599-p02sf-gfp浸染烟草,尝试转基因烟草的培育,为下一步转基因烟草培育、筛选和异戊烯基转移酶基因在烟草中的表达打下了基础。(本文来源于《北京中医药大学》期刊2013-05-01）
王慧[9]（2013）在《新型乙醇诱导表达系统的初步研究及植物双元表达载体的构建》一文中研究指出来源于构巢曲霉组成的乙醇诱导系统由两部分组成,分别为AlcR蛋白和一个诱导型启动子,乙醇存在条件下,可改变AlcR蛋白构象,使得原本没有活性的蛋白激活,激活后蛋白会识别诱导型启动子,如alcA启动子上AlcR特异性识别位点,激活启动子进一步使得目的基因表达。乙醇诱导系统可在时间和空间上控制目的基因的表达,利用乙醇诱导系统AlcR/alcA进行标记基因的删除验证试验中发现,未诱导条件下乙醇诱导系统AlcR/alcA在原核生物中为组成型表达。为了研发新型乙醇诱导系统,使其在原核生物及真核生物中均为诱导型表达。对同alcA一样受到AlcR调控的启动子进行研究。实验中以构巢曲霉基因组为模板,克隆了alcS、alcM、alcP、alcU、alcR、alcA、aldA自然启动子并测序正确,构建载体pUC19-alcX(aldA)-Cre,利用Cre蛋白可识别两个同向loxp位点并发生删除或重组的Cre/loxp位点特异性重组系统,在原核生物大肠杆菌E.coli中验证在未诱导条件下,自然启动子的启动Cre蛋白表达而删除或重组两个同向loxp位点之间抗性基因情况。具体实验结果为：(1)自然启动子alcS在原核生物中,未诱导条件下启动了Cre表达,并删除了pYBA100中两个同向loxp位点之间的抗性基因片段；(2)自然启动子alcA、alcU和alcR在原核生物中,未诱导条件下启动Cre表达,并且pYBA100中两个同向loxp位点之间抗性片段发生重组现象；(3)自然启动子alcP、alcS与aldA在原核生物中,未诱导条件下没有启动Cre表达,pYBA100中两个同向loxp位点之间的抗性基因没有发生删除及重组现象。实验结果表明,在原核生物中未诱导条件下,自然启动子alcP、alcS与aldA没有启动Cre表达而发生删除或重组现象,为无泄漏启动子；自然启动子alcA、alcU、alcS和alcR启动了Cre表达而使得两个同向loxp位点之间片段发生删除或重组,为组成型表达启动子。随着除草剂抗性的转基因作物大面积推广种植,抗草甘膦转基因作物作为其中一种得到了广泛关注,而获得草甘膦抗性基因的研究日益增多。在关于抗草甘膦的已注册专利的EPSP合成酶编码序列中发现,来源于农杆菌C58的EPSPS基因仅在原核生物中进行了抗性鉴定,未在植物中进行抗性验证。本研究在以根癌农杆菌C58为模板扩增EPSPS测序正确并改造后,构建了双元表达载体,利用农杆菌介导方法转入拟南芥中。对筛选的转基因阳性苗进行草甘膦浓度抗性测定,实验结果为：在转基因叶片涂施草甘膦浓度为0.02%条件下,转基因阳性苗变黄枯萎,表现抗性低。在此基础上对近年国内获得关于抗草甘膦的基因15项专利进行总结,并对抗草甘膦基因的氨基酸序列建立了系统发育进化树进行分析。所得结果为：(1)来源于农杆菌C58的EPSPS抗性基因在植物中对草甘膦耐性极低,无实际应用价值；(2)利用这些基因的蛋白序列与已知的一些EPSPS蛋白序列建立进化树分析,发现可以按是否含保守序列LGNAGTA将其分为两类；(3)Ⅰ型中(除专利9[87]外)含LGNAGTA保守序列,Ⅱ型中则不含有；(4)源于植物的EPSPS都属于Ⅰ型。新型乙醇诱导系统可用于外源基因的表达,并可在时间和空间上进行调控目的基因的表达。不同来源的EPSPS抗草甘膦基因也可由乙醇诱导系统进行调控表达。将诱导系统与抗性基因构建载体并转入植物中,则可以实现抗性基因表达的可控。(本文来源于《内蒙古师范大学》期刊2013-04-20）
李春艳,刘建宁,高洪文[10]（2013）在《东方山羊豆GoMIPS双元表达载体的构建及鉴定》一文中研究指出从东方山羊豆(Galega.orientalis L.)中克隆出的GoMIPS(肌醇-1-磷酸合成酶)基因序列设计合成1对带有NcoI和SpeI酶切位点的引物,用RT-PCR方法从东方山羊豆幼嫩叶片总RNA中扩增出GoMIPS基因的cDNA序列,经纯化后,克隆至pMD19-T载体上,构建pMD-MIPS的中间载体,测序鉴定。然后用NcoI和SpeI限制性酶对含有目的基因的pMD-MIPS和pCAMBIA1302空载体进行双酶切,通过酶切鉴定和测序分析表明,已成功构建了CaMV35S启动子驱动GFP报告基因的双元植物表达载体pCAMBIA1302-MIPS。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2013年01期）
双元表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
[目的]构建EV71 P1和3CD基因的双元植物表达载体,通过农杆菌注射渗透法实现在生菜叶片中的瞬时共表达。[方法]根据Gen Bank序列,设计合成EV71 C4亚型P1和3CD基因,分步克隆入植物表达载体p CAMBIA2301,并转化农杆菌LBA4404。农杆菌注射渗透法对意大利生菜叶片进行遗传转化,固相酶联斑点实验和免疫印迹实验检测感染叶片总蛋白提取物,分析外源基因表达效果。[结果]限制酶切验证获得共表达植物表达载体p CAMBIA2301-P1-3CD。感染叶片的外源基因表达产物中具有抗VP1抗体结合活性的蛋白,其分子量约39 k Da。[结论]成功构建EV71 3CD和P1基因双元植物表达载体,其在意大利生菜叶片中的表达产物具有免疫反应性。为利用植物生物反应器生产抗EV71口服疫苗提供了理论和实验依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
双元表达载体论文参考文献
[1].王晓静,孙林静,孙玥,张融雪,李军玲.HA标签的水稻水孔蛋白OsPIP2;7基因植物双元表达载体构建及转基因水稻的获得[J].华北农学报.2019
[2].罗雯,艾佐佐,刘艳梅,刘旺喜.EV71抗原双元植物表达载体构建及生菜瞬时表达[J].生物技术.2018
[3].贺永国,李哲,黄绵佳,曾宪海,林位夫.橡胶树乳管表达HbHMGR1基因双元表达载体构建与鉴定[J].南方农业学报.2016
[4].王建民,王淼,葛云侠,刘明春,刘宝山.鸡柔嫩艾美耳球虫MIC2基因的克隆与植物双元表达载体的构建[C].中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十叁次学术研讨会论文集.2015
[5].连桂云.CYP2E1和GST基因双元表达载体的构建及其在紫花苜蓿中的表达[D].青岛科技大学.2014
[6].宋静静,蒙姣荣,卢晓静,邹承武,陈保善.马铃薯StTOM1和StTOM3双干扰植物双元表达载体的构建及转化验证[J].基因组学与应用生物学.2014
[7].胡兰,隋世慧,吴丹.MSTNRNAi双元表达载体构建及效果试验[J].中国兽医杂志.2013
[8].李宁.木果楝属植物内生真菌的相关研究及苦参SfFPT基因植物双元表达载体的构建[D].北京中医药大学.2013
[9].王慧.新型乙醇诱导表达系统的初步研究及植物双元表达载体的构建[D].内蒙古师范大学.2013
[10].李春艳,刘建宁,高洪文.东方山羊豆GoMIPS双元表达载体的构建及鉴定[J].家畜生态学报.2013