导读:本文包含了原生质体转化论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:质体,保加利亚,拟南芥,质粒,银汉,柑橘,真菌。
原生质体转化论文文献综述
谢鑫,蒋君梅,王勇,任明见[1]（2019）在《高粱原生质体的制备及转化方法研究》一文中研究指出以高粱幼苗为材料,利用1%的纤维素酶Cellulose R 10和0.75%的果胶酶Macerozyme R 10处理高粱幼茎,对比不同的酶解时间,发现酶解7 h原生质体浓度最高、质量最佳。以经过氯化铯密度梯度离心法获得的高纯度质粒对获得的原生质体进行转化,用激光共聚焦进行荧光观察,结果显示,GFP和YFP在全细胞表达。本研究首次建立了高粱以高粱幼茎为材料的原生质体制备及转化体系,其方法简单、高效,可以用于高粱基因功能研究。(本文来源于《种子》期刊2019年08期）
闫思远,顾沛雯[2]（2019）在《PEG介导枸杞内生真菌NQG8Ⅱ4菌株原生质体转化》一文中研究指出为建立PEG介导的枸杞内生真菌NQG8Ⅱ4 (Fusarium nematophilum)的遗传转化体系。以NQG8Ⅱ4的幼嫩菌丝为材料,通过PEG介导的原生质体转化法,将含有潮霉素标记的质粒PDL2转入NQG8Ⅱ4的原生质体中;对获得的转化子进行PCR检测。试验获得NQG8Ⅱ4的最优原生质体制备条件为:菌龄16 h的菌丝0.05 g于含有3%崩溃酶+1%溶壁酶的混合酶液中反应2.5 h;整个试验的渗透压稳定剂为0.7 mol/L NaCl,原生质体获得量达到最大为6.70×10~7个/mL。试验共获得57个转化子,转化效率为2.85个/μg。对转化子进行PCR检测,表明外源的hph基因已经整合到NQG8Ⅱ4的基因组中。本试验成功建立了稳定的PEG介导的NQG8Ⅱ4菌株遗传转化体系,可用于研究菌株NQG8Ⅱ4在枸杞中的侵染定殖以及对枸杞促生抗病机理。(本文来源于《中国植物病理学会2019年学术年会论文集》期刊2019-07-20）
李晓[3]（2019）在《马铃薯原生质体培养再生及利用CRISPR/Cas9瞬时转化的研究》一文中研究指出马铃薯是我国重要的粮食作物。由于马铃薯遗传背景复杂、自交不亲和等特性,新品种培育进程缓慢,鲜食、加工专用的高品质马铃薯品种匮乏。利用生物技术手段对作物进行改造,能够有效缩短育种进程。原生质体瞬时表达系统能够避免外源基因在植物基因组上的整合,可以通过后期筛选获得具有目的性状且无外源基因整合的新种质材料。本研究旨在建立一套用于CRISPR/Cas9转化的高效马铃薯原生质体制备、转化再生体系,为马铃薯遗传改良和新种质资源创造提供技术支撑。以马铃薯栽培种大西洋为材料,针对原生质体制备、转化及再生两个关键环节,研究酶解液浓度、时间、渗透压、外源激素和起始密度等关键因素,建立并优化体系。选取文献报道的StGBSS基因外显子9上20 bp序列(GBSS9)为靶位点,构建pCAMBIA2300-GBSS载体。利用CRISPR/Cas9编辑技术在叶肉原生质体进行瞬时转化。主要研究结果如下:1.对分离条件进行了优化,初步确定纤维素酶浓度为0.7%,渗透压为0.4 M甘露醇浓度,酶解时间8-9 h,为原生质体分离的最佳条件。2.对培养条件进行优化,发现外源激素2,4-D的浓度为2 mg/L、起始密度为0.5×10~4个/mL-1×10~4个/mL的条件最利于培养。研究原生质体培养从细胞分裂阶段到分化成愈伤组织最终脱分化诱导成苗的各个时期的变化,建立了快速、稳定的原生质体再生体系。本研究从愈伤组织阶段到诱导出芽仅为40 d左右,缩短了原生质体成苗时间。3.PEG介导进行瞬时转化,共获得45株再生植株。通过PCR、测序鉴定其中10株。后期为了获得足够的转化苗,已进行二次转化,敲除检测也同时进行中。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2019-06-05）
史勇,金维环,刘姣姣,王林会,陈彦惠[4]（2019）在《一种改良的拟南芥原生质体的制备和转化方法》一文中研究指出[目的]为了降低拟南芥原生质体制备的试验成本,缩短制备时间,降低转化所用质粒的浓度和提高转化效率。[方法]实验以胶带法为基础,比较多种普通胶带去除拟南芥叶片下表皮的效果,通过增加裂解叶片用量,设计不同质粒浓度梯度转化原生质体,调整转化过程中PEG处理时间和对原生质体进行暗培养。[结果]发现普通纸质和布质胶带去除拟南芥叶片下表皮效果良好。将叶片酶解时间缩短到20～30 min,转化质粒用量降低到5μg/6～10×104个原生质体;将PEG转化处理时间延长到30 min,利用暗培养降低了原生质体死亡率;用冰水混合物保存原生质体,24 h内不影响转化效率。[结论]改良后的胶带法制备原生质体成本低、用时短、转化效率高、可操作性强。(本文来源于《生物技术》期刊2019年02期）
郭鑫,王莎莎,李晨,卢海强,田洪涛[5]（2019）在《基于原生质体法保加利亚乳杆菌电转化条件的研究》一文中研究指出目的:研究不同因素对保加利亚乳杆菌原生质体法电转化效率的影响,通过研究电转化的最适条件,以提高电转化的效率。方法:以保加利亚乳杆菌为受体菌株,大肠杆菌-乳酸菌穿梭型质粒pMG36e为载体,通过原生质体电转化的方法研究溶菌酶浓度、质粒浓度、电转化参数、复苏培养基组成对电转化效率的影响。结果:用SMM在37℃下制备溶菌酶(30 mg/mL)对细胞进行酶解,直至通过显微镜发现约60%的原生质体形成。用1μL质量浓度为1.2μg/μL的质粒pMG36e,在电场强度7.5 kV/cm,电阻200Ω,电容25μF的条件进行电击转化,以含有0.5 mol/L蔗糖和20 mmol/L的MgCl_2、CaCl_2且无吐温80的MRS再生培养基复苏培养2.5 h,并以含红霉素的MRS平板筛选,获得1.42×10~5CFU/μgDNA的电转化效率。结论:本研究实现了保加利亚乳杆菌的高效遗传转化,并为遗传育种提供了技术支持。(本文来源于《中国食品学报》期刊2019年03期）
王雨琪,林涵,陈羽,巩庚,徐威[6]（2019）在《不对称灭活原生质体融合技术选育川丁特罗高效转化菌株》一文中研究指出分别以紫外线和加热灭活方法处理短刺小克银汉霉(Cunninghamellablakesleana)AS 3.970原生质体,并将2种方法灭活的原生质体在聚乙二醇(PEG)6000的作用下进行融合,从融合再生菌株中筛选川丁特罗高效转化菌株。结果显示,通过不对称灭活原生质体融合技术,获得1株川丁特罗高效转化菌株C. blakesleana AS 3.970 F-6,对川丁特罗的微生物转化率为(28.3±3.1)%,比原生质体融合前转化率[(8.2±2.6)%]提高了2.45倍。(本文来源于《中国医药工业杂志》期刊2019年02期）
王正娟,苏柳如,叶秀云,林娟,杨捷[7]（2019）在《齿毛菌原生质体的制备与转化》一文中研究指出探究菌龄、稳渗剂种类、溶壁酶质量浓度、酶解温度、酶解时间和再生培养基对齿毛菌原生质体制备及再生的影响,并利用PEG介导原生质体转化.结果表明:以0.6 mol·L~(-1)甘露醇为稳渗剂,20 mg·m L~(-1)溶壁酶于30℃酶解48 h菌龄的菌丝3 h,所得原生质体形成数最多,为1×108个·m L~(-1);所得原生质体在0.8 mol·L~(-1)蔗糖为稳渗剂的2号培养基中再生率最高,为0.1%; PEG介导原生质体转化,经潮霉素B抗性平板筛选获得2个转化子.实验建立的齿毛菌原生质体制备及转化体系,为其遗传操作及分子生物学研究奠定基础.(本文来源于《福州大学学报(自然科学版)》期刊2019年01期）
戴蓬博,梁晓飞,张荣,孙广宇[8]（2019）在《基于PEG介导原生质体转化构建粉红聚端孢荧光标记》一文中研究指出粉红聚端孢是多种植物的重要病原菌。本研究通过酶解粉红聚端孢幼嫩菌丝细胞壁获得原生质体,用PEG介导原生质体转化将携带GFP基因和博来霉素抗性基因的外源DNA随机插入粉红聚端孢基因组,共获得博来霉素抗性菌株90株,转化效率达18个/μg。选取22株转化子荧光观察,发现均可表达荧光,菌株间荧光强度不同,其中10株转化子荧光表达较强。与野生型相比,突变菌株TR45的菌落生长、产孢量和致病力等生物学特性均未改变,在不含博来霉素的培养皿中继代培养10代荧光仍能稳定表达。本研究构建的高效原生质体制备和PEG介导粉红聚端孢遗传转化方法,可用于该菌基因功能研究,绿色荧光标记菌株可用于病菌侵入、田间监测、侵染循环等发生规律研究。(本文来源于《菌物学报》期刊2019年01期）
徐旋[9]（2018）在《柑橘原生质体瞬时转化体系优化及利用CRISPR/Cas9技术定点突变山金柑基因》一文中研究指出柑橘是世界产量第一的水果,由于童期长、种子多胚、某些重要的商业品种育性低甚至不育等特点,利用传统的育种方法改良柑橘进展缓慢。CRISPR/Cas9系统作为近几年快速发展的基因组编辑技术可以精确有效地诱导特定的突变,特异地改造基因组,已成为植物基因功能研究和作物遗传改良的重要手段之一。利用植物原生质体瞬时转化CRISPR/Cas9系统突变得到的植株,属于非转基因种质资源,能够省去漫长的后代筛选步骤;同时相对于农杆菌介导转化柑橘上胚轴易产生嵌合体,原生质体瞬时转化CRISPR/Cas9系统是对于单个细胞进行基因编辑,得到纯合子的概率大大提高。由于柑橘原生质体瞬时转化体系尚未成熟,本研究旨在优化柑橘原生质体瞬时转化体系,提高柑橘叶肉原生质体瞬时转化效率,以充分利用亚细胞定位、双分子荧光互补(BiFC)实验对柑橘本物种基因进行功能研究;提高柑橘愈伤组织原生质体瞬时转化效率,以利用CRISPR/Cas9系统改良柑橘种质;引进3种不同的CRISPR/Cas9载体的构建体系,并利用农杆菌介导山金柑上胚轴的遗传转化法对目的基因CsP5CS2进行敲除,以期得到阳性植株用于后期的基因功能研究。实验结果包括以下几方面:1、优化柑橘原生质体瞬时转化体系。1)真空渗透酶解法缩短酶解时间,界面离心法分离纯化原生质体,去除破碎的原生质体杂质和未被完全酶解的细胞团,大大提高分离得到的原生质体的完整性及活力至90%以上;2)改变柑橘原生质体瞬时转化过程的共转化处理方式,利用37℃水浴30 min共转化处理,使柑橘叶肉原生质体瞬时转化效率由19.10%显着提高至42.04%;3)提高PEG溶液Ca~(2+)浓度至30mmol/L,37℃水浴30 min共转化处理,使柑橘愈伤组织原生质体瞬时转化效率由3.63%显着提高至13.18%。2、柑橘原生质体瞬时转化体系的应用。利用柑橘原生质体瞬时转化进行亚细胞定位实验,定位CsSPL3基因编码的蛋白于愈伤组织原生质体细胞核表达;利用柑橘叶肉原生质体瞬时转化进行BiFC实验,结果表明CsSPL14与CsARK1蛋白互作。3、CRISPR/Cas9定点突变山金柑CsP5CS2基因。以柑橘脯氨酸合成限速酶编码基因CsP5CS2为目的基因,利用CRISPR-P网站根据靶定位点设计2个gRNA,构建载体pKSE-GFP-CsP5CS2,通过根癌农杆菌介导的山金柑上胚轴遗传转化法,得到转基因阳性芽及植株,提取转基因阳性植株DNA并测序分析,结果表明,CRISPR/Cas9系统在山金柑中对目的基因CsP5CS2起到编辑作用且具有多种编辑结果,在PAM位点前3-4个碱基处产生2 bp、8 bp、50 bp缺失以及1 bp插入等情况。所得阳性植株可为于后续CsP5CS2基因功能研究。(本文来源于《华中农业大学》期刊2018-06-01）
雷海英,白凤麟,冯宇,郭亚冲,乔楠茜[10]（2018）在《玉米叶片原生质体的制备及瞬时转化体系的建立》一文中研究指出以玉米(Zea mays L.)自交系-郑58叶肉细胞原生质体的制备条件的研究,探讨了酶解法制备玉米叶肉细胞原生质体的分离条件和影响因素。结果表明:当沿着叶脉横切叶片时,最佳酶浓度组合为纤维素酶1.0%,离析酶0.5%;最佳酶解时间为5 h;最佳渗透压甘露醇浓度为0.4 mol/L;离心力为100×g、离心1 min时原生质体的产量最高。采用30%PEG-4000将去内毒素的p CAMBIA1302-mGFP的2种质粒制备的原生质体,在细胞核部位能清晰地看到绿色荧光。(本文来源于《长治学院学报》期刊2018年02期）
原生质体转化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为建立PEG介导的枸杞内生真菌NQG8Ⅱ4 (Fusarium nematophilum)的遗传转化体系。以NQG8Ⅱ4的幼嫩菌丝为材料,通过PEG介导的原生质体转化法,将含有潮霉素标记的质粒PDL2转入NQG8Ⅱ4的原生质体中;对获得的转化子进行PCR检测。试验获得NQG8Ⅱ4的最优原生质体制备条件为:菌龄16 h的菌丝0.05 g于含有3%崩溃酶+1%溶壁酶的混合酶液中反应2.5 h;整个试验的渗透压稳定剂为0.7 mol/L NaCl,原生质体获得量达到最大为6.70×10~7个/mL。试验共获得57个转化子,转化效率为2.85个/μg。对转化子进行PCR检测,表明外源的hph基因已经整合到NQG8Ⅱ4的基因组中。本试验成功建立了稳定的PEG介导的NQG8Ⅱ4菌株遗传转化体系,可用于研究菌株NQG8Ⅱ4在枸杞中的侵染定殖以及对枸杞促生抗病机理。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
原生质体转化论文参考文献
[1].谢鑫,蒋君梅,王勇,任明见.高粱原生质体的制备及转化方法研究[J].种子.2019
[2].闫思远,顾沛雯.PEG介导枸杞内生真菌NQG8Ⅱ4菌株原生质体转化[C].中国植物病理学会2019年学术年会论文集.2019
[3].李晓.马铃薯原生质体培养再生及利用CRISPR/Cas9瞬时转化的研究[D].内蒙古大学.2019
[4].史勇,金维环,刘姣姣,王林会,陈彦惠.一种改良的拟南芥原生质体的制备和转化方法[J].生物技术.2019
[5].郭鑫,王莎莎,李晨,卢海强,田洪涛.基于原生质体法保加利亚乳杆菌电转化条件的研究[J].中国食品学报.2019
[6].王雨琪,林涵,陈羽,巩庚,徐威.不对称灭活原生质体融合技术选育川丁特罗高效转化菌株[J].中国医药工业杂志.2019
[7].王正娟,苏柳如,叶秀云,林娟,杨捷.齿毛菌原生质体的制备与转化[J].福州大学学报(自然科学版).2019
[8].戴蓬博,梁晓飞,张荣,孙广宇.基于PEG介导原生质体转化构建粉红聚端孢荧光标记[J].菌物学报.2019
[9].徐旋.柑橘原生质体瞬时转化体系优化及利用CRISPR/Cas9技术定点突变山金柑基因[D].华中农业大学.2018
[10].雷海英,白凤麟,冯宇,郭亚冲,乔楠茜.玉米叶片原生质体的制备及瞬时转化体系的建立[J].长治学院学报.2018
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