马尾松PmCOMT基因的克隆及实时定量表达分析

论文摘要

在木质素生物合成里,咖啡酸-O-甲基转移酶（caffeic acid-O-methyltransferase, COMT）起重要作用。本论文以马尾松幼苗作为材料,并通过PCR技术以及RACE技术从马尾松材料中克隆出Pm COMT基因的cDNA全长。该cDNA全长为1660bp,其中预测完整ORF全长为1125bp,可编码374个氨基酸的蛋白。蛋白相对分子质量为41.81 kD;等电点（pI）为5.03,总平均亲水性为-0.311。通过生物信息学的方法对其进行分析表明,Pm COMT基因具有典型的甲基转移酶的保守结构域。通过实时荧光定量表达分析表明,COMT基因在马尾松的不同组织均有表达,其中在新梢中的表达量最高,树皮中表达量最低。

论文目录

• 1 结果与分析
•   1.1 提取马尾松总RNA及cDNA的合成
•   1.2 PmCOMT基因全长克隆
•     1.2.1 PmCOMT基因中间片段克隆
•     1.2.2 PmCOMT基因两端序列扩增
•     1.2.3 PmCOMT基因全长序列拼接
•     1.2.4 PmCOMT编码氨基酸序列对比与分析
•     1.2.5 PmCOMT基因的进化树构建
•     1.2.6 PmCOMT结构域分析
•     1.2.7 PmCOMT编码蛋白二级结构分析
•     1.2.8 三级结构预测分析
•     1.2.9 PmCOMT基因实时荧光定量表达分析
• 2 讨论
• 3 材料与方法
•   3.1 材料与试剂
•   3.2 RNA提取与反转录
•   3.3 获取COMT中间片段序列
•   3.4 获取COMT基因两端序列
•   3.5 验证拼接结果的ORF正确性
•   3.6 PmCOMT基因的生物信息学分析
•   3.7 PmCOMT基因实时荧光定量表达分析
• 作者贡献

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吴晓刚,陈佩珍,韦蔷,武星,季孔庶

关键词: 马尾松,咖啡酸甲基转移酶,基因克隆,实时荧光定量表达分析

来源: 分子植物育种 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,林业

单位: 南京林业大学南方现代林业协同创新中心林木遗传与生物技术省部共建教育部重点试验室

基金: “十三五”国家重点研发计划项目课题(2017YFD0600304),江苏高校优势学科建设工程(PAPD),南方现代林业协同创新项目共同资助

分类号: Q943.2;S791.248

DOI: 10.13271/j.mpb.017.000789

页码: 789-795

总页数: 7

文件大小: 2493K

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