siRNA靶向抑制eIF2α基因对非酒精性脂肪性肝病自噬及凋亡的影响

论文摘要

目的探讨siRNA靶向抑制eIF2α基因对非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）细胞模型自噬及凋亡的影响。方法体外0.6 mmol/L油酸诱导HepG2细胞脂质沉积建立NAFLD细胞模型,将HepG2细胞分为对照组、模型组、eIF2α-siRNA干扰组、NC-siRNA干扰组。油红O观察各组细胞内脂滴分布。采用Real-time PCR检测各组细胞eIF2αmRNA表达情况。LC3质粒标记绿色荧光蛋白（GFP-LC3）转染HepG2细胞后,荧光显微镜下观察细胞内绿色点状聚集的自噬小体分布,Honchst 33258染色观察细胞凋亡情况。Western blotting检测自噬、凋亡相关蛋白P62、LC3Ⅱ、Beclin-1、Bcl-2、Bax、Caspase-3及p-eIF2α、eIF2α的表达。结果 Real-time PCR及Western blotting实验表明,与对照组相比,模型组eIF2α蛋白及mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）;与模型组相比,eIF2α-siRNA干扰组eIF2α蛋白及mRNA表达明显下降。与对照组相比,模型组p-eIF2α表达增加;与模型组相比,eIF2α-siRNA干扰组p-eIF2α表达明显下降。荧光显微镜观察提示,与对照组相比,模型组自噬体数量明显降低;与模型组相比,eIF2α-siRNA干扰组自噬体数量明显增加。Hoechst 33258染色分析提示,与对照组相比,模型组凋亡率明显增加;与模型组相比,eIF2α-siRNA干扰组凋亡率明显减少。Western blotting检测提示,与对照组相比,模型组细胞Bax、P62、Caspase-3蛋白表达均增加,而Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均降低（P均<0.05）,经过eIF2α-siRNA干扰后,eIF2α-siRNA干扰Bax、P62、Caspase-3蛋白表达均降低,而Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ增加。结论 siRNA靶向抑制eIF2α基因通过增强自噬及抑制细胞凋亡改善NAFLD,细胞模型脂肪变性。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要材料
•   1.2 细胞培养
•   1.3 油红O染色
•   1.4 siRNA转染细胞
•   1.5 Hoechst 33258染色
•   1.6 GFP-LC3荧光融合蛋白检测
•   1.7 Real-time PCR
•   1.8 Western blotting检测蛋白表达
•   1.9 统计学分析
• 2 结果
•   2.1 各组细胞p-eIF2α、eIF2α蛋白及eIF2α mRNA的影响
•   2.2 siRNA靶向抑制eIF2α对HepG2细胞内脂肪沉积影响
•   2.3 siRNA靶向抑制eIF2α对HepG2细胞内自噬体的影响
•   2.4 siRNA靶向抑制eIF2α对HepG2细胞内凋亡的影响
•   2.5 siRNA靶向抑制eIF2α对HepG2细胞内凋亡及自噬相关蛋白影响
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吴鹏波,宋琪,俞媛洁,饶倩,张国,郭一天,谭诗云

关键词: 非酒精性脂肪性肝病,自噬,细胞凋亡

来源: 胃肠病学和肝病学杂志 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 消化系统疾病

单位: 武汉大学人民医院消化内科,消化系疾病湖北省重点实验室,广西壮族自治区人民医院消化内科

基金: 中央部属高校青年教师资助项目(2042017kf0099),湖北省自然科学基金(2018CFB236),湖北省卫生和计划生育委员会面上项目(WJ2017M019),武汉大学人民医院引导基金(RMYD2018M29)

分类号: R575.5

页码: 1326-1330

总页数: 5

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