新生大鼠松果体细胞体外分离培养及增殖情况观察

论文摘要

目的:分离培养并鉴定新生大鼠松果体细胞,观察其体外增殖情况。方法:选择30只新生SD大鼠,处死后分离松果体组织,采用多聚赖氨酸对培养板予预包被处理胰酶消化、经差速贴壁分离等方法,对新生大鼠松果体细胞进行体外分离培养并传代。观察50 d内体外培养的松果体细胞的形态变化,培养7 d时采用免疫荧光法,观察原代松果体细胞5-羟色胺（5-HT）及微管相关蛋白-2（MAP-2）,实时定量PCR法检测N-乙酰基转移酶（AANAT）及生长抑素（SS）mRNA。分别取传代第1、3、5代对数生长期细胞测定细胞增殖情况。结果:新生大鼠松果体细胞呈圆球形或多角形,培养21 d时松果体细胞体积明显增大,胞质内可见深色细小囊泡状颗粒。培养7、14、21、28 d时,随培养时间延长,松果体细胞AANAT mRNA的相对表达量逐渐降低（P<0.05）,松果体细胞SS mRNA的相对表达量先升高后降低（P<0.05）。细胞传代后第1、3代细胞生长曲线近似"S"形,且第3代细胞增殖最为旺盛;随传代次数增加,第5代细胞生长曲线近似平缓,细胞逐渐衰老、死亡。结论:采用胰酶消化、差速贴壁分离等方法并结合含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,可获得纯度较高且有增殖潜力的大鼠松果体细胞,细胞在体外增殖活跃,且具有一定的生物学功能。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料选择
•   1.2 大鼠松果体细胞体外分离培养鉴定方法
•     1.2.1 取材
•     1.2.2 胰酶消化分离培养
•     1.2.3 松果体原代细胞分离纯化及传代培养
•     1.2.4 大鼠松果体细胞鉴定
•   1.3 大鼠松果体细胞体外增殖情况观察
•   1.4 统计学处理
• 2 结果
•   2.1 大鼠松果体细胞形态
•   2.2 不同时间点大鼠松果体细胞AANAT及SS mRNA的相对表达量比较
•   2.3大鼠松果体细胞体外增殖情况
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 韩星,冯星

关键词: 松果体细胞,五羟色胺,微管相关蛋白,乙酰基转移酶,生长抑素,细胞增殖

来源: 中国医学创新 2019年36期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 苏州大学附属儿童医院

基金: 国家自然科学基金资助项目（81271378,81471488）

分类号: Q813.11

页码: 28-33

总页数: 6

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