两种耐热磷酸化酶的构建及高效催化合成红景天苷

论文摘要

目的:使用表达耐热蔗糖磷酸化酶的大肠杆菌重组工程菌E. coli BL21/pET-Spase和耐热纤维二糖磷酸化酶的大肠杆菌重组工程菌E. coli BL21/pET-Cpase,发酵培养后粗酶液作为催化剂,以价格低廉的蔗糖为原料合成红景天苷。方法:分别构建耐热蔗糖磷酸化酶和耐热纤维二糖磷酸化酶大肠杆菌重组菌,然后将重组菌、蔗糖、酪醇和磷酸混合,得到反应混合物,使反应混合物在45℃下转化,而产生红景天苷。结果:在耐热蔗糖磷酸化酶酶液1200 U/L、耐热纤维二糖磷酸化酶酶液500 U/L、蔗糖110 g/L、酪醇30 g/L和磷酸50 m M的浓度下,反应条件为pH 7.0、温度45℃、转速50转/分、反应时间32小时后,红景天苷浓度达到23.7 g/L。结论:本研究使用蔗糖磷酸化酶和纤维二糖磷酸化酶联合催化的工艺,成功地高收率合成了红景天苷。同时,本研究构建的耐热磷酸化酶酶活高,处理简单,为拓展糖苷类似物的合成提供了一种新的方法。

论文目录

• 前言
• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌种和质粒
•     1.1.2 培养基
•     1.1.3 主要试剂
•     1.1.4 主要仪器
•   1.2 方法
•     1.2.1 耐热蔗糖磷酸化酶大肠杆菌重组菌的构建
•     1.2.2 耐热纤维二糖磷酸化酶大肠杆菌重组菌的构建
•     1.2.3 两种重组菌诱导表达
•     1.2.4 红景天苷的合成
•     1.2.5 HPLC检测条件
•   1.3 统计学分析
• 2 结果
•   2.2 双酶催化合成红景天苷的活性检测
•   2.3 双酶催化合成红景天苷催化条件的优化
•     2.3.1 缓冲液pH对产物浓度的影响
•     2.3.2 反应温度对产物浓度的影响
•     2.3.3 反应时间对产物浓度的影响
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 何聪芬,黄爱清,王巧娥,张贵友,余磊,王洪钟

关键词: 耐热蔗糖磷酸化酶,耐热纤维二糖磷酸化酶,红景天苷

来源: 现代生物医学进展 2019年10期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,中药学

单位: 北京工商大学北京市植物资源研究开发重点实验室,清华大学生命科学学院

基金: 北京工商大学北京市植物资源研究开发重点实验室开放课题基金资助项目,国家自然科学基金项目(21476124)

分类号: Q78;R28

DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2019.10.001

页码: 1801-1806

总页数: 6

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