导读:本文包含了基因敲除鼠论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,蛋白,小鼠,受体,清道夫,胆固醇,高台。
基因敲除鼠论文文献综述
郭薇,房付春,徐会勇,欧阳钧[1]（2019）在《骨膜蛋白基因敲除鼠正畸牙齿移动模型的建立及验证》一文中研究指出目的:建立小鼠以及骨膜蛋白(PN)基因敲除小鼠正畸牙齿移动模型,并分析相关信号通路。方法:根据实验条件把小鼠分为4组:C57小鼠未加力组和加力组、PN基因敲除小鼠组上颌加力组和未加力组,每组5只,其中加力组加力5 d。处死后,显微CT扫描上下颌骨,并采用RT-PCR检测牙周膜中相关基因的表达水平。结果:与C57小鼠相比,PN基因敲除小鼠的牙槽骨出现明显的吸收,牙周膜连续性中断破坏。在C57小鼠中,加力组牙周膜中的PN、粘着斑激酶(FAK)和TGF-β1表达水平显着增强(P<0.05);在基因敲除鼠中,加力组牙周膜中的FAK(P<0.05)和TGF-β1表达水平显着增强(P<0.01);在同样加力的条件下,C57小鼠与PN基因敲除小鼠相比,TGF-β1显着降低(P<0.05),FAK表达水平显着升高(P<0.01)。结论:PN是正畸作用下牙周膜的改建过程一个重要分子环节,发挥着转导调控作用,TGF-β1--PN--FAK信号通路参与调控正畸作用下牙周膜的改建过程。(本文来源于《中国医学物理学杂志》期刊2019年10期）
何诗依,李铁瑛,严露,侯影,张缨[2]（2019）在《4周有氧运动对Apelin基因敲除鼠糖耐量和骨骼肌糖代谢相关基因表达的影响》一文中研究指出目的:探讨有氧运动训练对Apelin基因敲除鼠葡萄糖耐量和骨骼肌糖代谢相关基因表达变化的影响。方法:8周龄野生C57BL/6J小鼠和Apelin敲除小鼠各40只,两种鼠进一步分为安静组和运动组,每组20只,共4组,分别为:野生安静组、野生运动组、敲除安静组、敲除运动组。运动组进行前两周跑速为15 m/min、后两周跑速为20 m/min、坡度为5°的跑台运动,每周运动6天,每天运动1小时。运动组最后一次运动休息48 h后,4组中每组10只进行糖耐量实验(GTT);每组剩余的10只,进行骨骼肌指标的测定。RT-PCR测量骨骼肌Apelin及糖代谢相关基因Glut4、Gbe1、Phka1、Hk2和Pfkm mRNA表达量;Western blot法测定骨骼肌Apelin和Glut4蛋白含量。结果:(1)敲除安静组与野生安静组相比,GTT曲线下面积(AUC)显着增加(P<0.01),骨骼肌内Glut4,Gbe1,Phka1,Hk2和Pfkm mRNA和Glut4蛋白表达都显着性降低(P<0.05)。(2)敲除运动组和野生运动组相比,骨骼肌内Glut4,Gbe1,Hk2和Pfkm mRNA和Glut4蛋白的表达显着性降低(P<0.05)。敲除运动组和敲除安静组相比,小鼠GTT显着性改善,骨骼肌内Glut4,Gbe1,Phka1和Hk2 mRNA表达显着性增加(P<0.05)。(3)野生运动组和野生安静组相比,小鼠糖耐量和骨骼肌内Apelin mRNA和蛋白以及糖代谢相关基因表达没有变化。结论:(1)Apelin KO鼠的糖耐量受损,骨骼肌葡萄糖代谢相关基因的表达降低;(2)4周有氧运动可改善Apelin敲除鼠的糖耐量降低,对骨骼肌糖代谢相关基因表达有一定的积极促进作用。(本文来源于《中国运动医学杂志》期刊2019年06期）
陈栋,王莹莹,李晓聪,鲁方丽,李强[3]（2019）在《牙本质涎磷蛋白、Ⅰ型胶原蛋白在vps4b基因敲除鼠磨牙牙胚发育中的时空表达》一文中研究指出目的研究vps4b基因突变对牙齿发育相关蛋白——牙本质涎磷蛋白(DSPP)和Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ表达的影响。方法取胚胎E13.5 d、E14.5 d、E16.5 d的胎鼠头部及出生后P2.5 d、P7 d的幼鼠下颌骨组织,石蜡包埋后获取第一磨牙牙胚组织切片,采用免疫组织化学染色法检测野生型小鼠和vps4b基因敲除小鼠牙胚中DSPP、COL-Ⅰ的表达。结果野生鼠蕾状期和帽状期DSPP、COL-Ⅰ均未表达;钟状期DSPP在内釉上皮和牙乳头中有表达,COL-Ⅰ表达于牙乳头和牙囊;分泌期和矿化期DSPP、COL-Ⅰ在成釉细胞、成牙本质细胞、牙囊内均有表达,COL-Ⅰ在牙乳头内亦可见表达。小鼠vps4b基因敲除后,DSPP在钟状期牙乳头和分泌期牙乳头及牙囊内未见表达,COL-Ⅰ在钟状期及矿化期表达部位与野生型小鼠一致,分泌期在牙乳头的表达发生改变。结论vps4b基因在牙胚发育中发挥重要作用;DSPP、COL-Ⅰ的表达可能受vps4b基因的调控,并与vps4b共同调节牙齿牙本质的发育。(本文来源于《华西口腔医学杂志》期刊2019年03期）
曾勇智[4]（2019）在《Circ_0029343/miR-96调控SR-BI对apoE基因敲除鼠动脉粥样硬化的影响》一文中研究指出动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)疾病是多因素引起的慢性炎性反应。现已确认血脂异常是其重要危险因素。流行病学研究表明,高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)胆固醇(HDL cholesterol,HDL-C)水平与动脉粥样硬化性心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)的风险呈负相关。HDL的动脉粥样硬化保护作用与它们在反向胆固醇转运(reverse cholesterol transport,RCT)中发挥关键作用有关。目前开发了一些旨在提高HDL-C水平的药物,比如增加载脂蛋白A-I(apoprotein AI,apoAI)水平的药物,已经在临床前研究或冠心病患者中发挥出一些的疗效。然而,增加HDL-C水平对心血管疾病有益的推断越来越受到质疑,因为在大多数临床试验中,单纯地升高HDL-C水平并未导致心血管疾病预后改善。因此,旨在恢复HDL功能可能比迄今为止用于升高HDL-C水平的药物更能发挥治疗As的作用。清道夫B类1型受体(scavenger receptor class B type I,SR-BⅠ)是一种多配体生理性HDL膜受体蛋白,主要功能是通过选择性摄取的非内吞机制促进胆固醇酯从高密度脂蛋白转运到细胞。除了促进选择性胆固醇流入细胞外,SR-BⅠ还促进了游离的胆固醇从外周组织(包括巨噬细胞)向HDL流出。SR-BⅠ在多种组织和细胞类型中表达,包括脂肪细胞,巨噬细胞,内皮细胞等。在啮齿动物中,SR-BⅠ在肝脏和肾上腺,巨噬细胞以及生成类固醇激素的细胞上广泛表达,其中,分布在肝细胞与巨噬细胞上的SR-BⅠ与AS密切相关。巨噬细胞SR-BⅠ介导胆固醇流动是双向的,胆固醇净移动取决于胞内脂质含量以及胆固醇梯度的方向。SR-BⅠ在促进荷脂细胞的胆固醇双向流动中发挥了重要作用。巨噬细胞SR-BⅠ的失活促进apoE缺陷小鼠(apoE~(-/-))以及LDL受体缺陷小鼠(LDLR~(-/-))AS的发展。然而,巨噬细胞SR-BⅠ可能对AS的形成具有双重作用,据报道SR-BⅠ促进AS早期病变,而抑制AS晚期病变。这些观察结果表明SR-BⅠ在调节巨噬细胞胆固醇体内平衡中起双重作用。肝细胞SR-BⅠ主要参与RCT的终末环节,介导选择性脂质摄取(selective lipid uptake,SLU)进入肝脏,促进血浆的HDL-C清除。有研究表明,血浆中HDL-C水平会由于肝脏SR-BⅠ过表达而降低,并且因肝脏SR-BⅠ基因缺失而增加。然而,即使血浆中HDL-C浓度低,SR-BⅠ的上调能缓解LDLR~(-/-)鼠的AS形成,SR-BⅠ基因敲除则加剧了动脉粥样硬化的形成。因此,SR-BⅠ选择性HDL-CE摄取途径现已被评价用于防治AS的可能性。MicroRNAs(miRNAs)是一类高度保守的单链非编码小RNA(长度约22个核苷酸),通过碱基配对靶向mRNA 3'非编码区(3'untranslated regions,3'UTR),促使靶mRNA的降解或抑制其转录来调节基因的表达。已有研究表明,miRNAs分子在HDL代谢,脂质稳态等方面起重要的调节作用,并且已经作为治疗包括AS在内的心血管疾病重要靶点。文献报道miR-96与胞内脂质稳态密切相关。高脂饮食可诱导C57BL/6N小鼠体内miR-96表达上调,另外,miR-96影响固醇调节元件结合蛋白(Sterol regulatory element-binding proteins,SREBPs)的表达。生物信息学提示,在多种生物物种中SR-BⅠ的3'UTR和miR-96存在保守性结合位点,那么miR-96是否能通过靶向作用SR-BⅠ的表达,抑制胞内胆固醇摄取,流出和RCT,引起细胞内脂质积聚与血管壁脂质沉积,最终导致AS的形成。环状RNA(circular RNA,circRNA)是近年来报道的一类非编RNA(non-coding RNAs,ncRNAs),能够和miRNA竞争结合mRNA 3'UTR的miRNA反应元件(microRNA response elements,MRE),发挥竞争性内源RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA)的功能,剔除miRNA对靶mRNA的抑制作用,从而在转录后水平增加microRNA靶基因的表达。现已证实,在多种疾病的发展过程中circRNA调控网络存在异常。前期应用生物信息学成功预测了环状RNA circ_0029343能与miR-96靶向结合,并且发现其在AS斑块中能够表达,那么circ_0029343是如何调控miR-96,能否通过结合miR-96来调控miR-96靶基因的表达,从而影响AS的进程。然而,目前未见相关文献报道。为了研究circ_0029343对AS过程中生物学行为的影响,我们通过THP-1巨噬细胞,HepG2肝癌细胞以及apoE~(-/--)鼠进行验证,以circRNA可能发挥竞争性内源RNA作用为切入点,阐明circ_0029343在apoE~(-/-)鼠AS过程中的作用机制。第一章miR-96靶基因的预测及其与SR-BⅠ 3'UTR的靶向作用目的:预测SR-BⅠ 3'UTR存在与miR-96靶向结合位点,并在人THP-1单核细胞及HepG2肝癌细胞验证靶向结合的可能性。方法:1.miR-96成熟序列通过查询miRBase数据库获得,SR-BⅠ 3'UTR序列通过访问GeneBank网站获得,SR-BⅠ 3'UTR与miR-96结合情况通过访问TargetScan与miRanda网站进行分析,SR-BⅠ 3'UTR与miR-96结合的自由能在查询miRanda网站获取。2.基于上述预测分析结果,分别构建野生型psiCHECK-2-SR-BⅠ-UTR-W与突变型psiCHECK-2-SR-BⅠ-UTR-Mut重组质粒,并与腺病毒质粒pMIR96(miR-96)、miR-96抑制剂(anti-miR-96)瞬时共转染至HEK293T细胞以测定荧光素酶报告基因活性。3.将miR-96/anti-miR-96和各自相应的对照转染到THP-1单核细胞和HepG2肝癌细胞,通过RT-PCR以及Western blot方法测定SR-BⅠ的mRNA与蛋白水平。结果:1.生物信息学预测分析表明miR-96能够与人/鼠SR-BⅠ 3'UTR结合,并且两者之间结合的自由能低。2.将miR-96与野生型psiCHECK-2-SR-BⅠ-WT 3'UTR共转染后荧光素酶相对活性明显受到抑制,与anti-miR-96转染后其活性增加。而与突变型共转染后,荧光素酶相对活性则无变化。3.miR-96转染后能抑制人THP-1单核细胞和HepG2肝癌细胞中SR-BⅠ mRNA与蛋白表达,而anti-miR-96转染则出现相反的结果。结论:miR-96能够靶向作用SR-BⅠ 3'UTR,抑制人THP-1单核细胞和HepG2肝癌细胞中SR-BⅠ的表达。第二章miR-96对巨噬细胞及肝细胞选择性HDL-CE摄取的影响目的:观察miR-96是否通过抑制SR-BⅠ基因的表达来调控THP-1及HepG2细胞Dil-HDL与HDL-CE的摄取,改变胞内脂质含量。方法:1.培养人THP-1及HepG2细胞,用腺病毒pMIR96、anti-miR-96转染细胞,流式细胞术观察THP-1及HepG2细胞Dil-HDL的摄取情况,同位素~(125)I-TC与[~3H]CEt双标HDL观察THP-1及HepG2细胞选择性HDL-CE摄取情况。2.TC检测试剂盒评估胞内TC的水平,HPLC法测定THP-1细胞内TC,FC以及CE的含量,液体闪烁计数仪检测THP-1细胞内胆固醇流出,RT-PCR分别测定胰岛素诱导基因-1(insulin induced gene-1,Insig-1)、叁磷酸腺苷结合盒转运体G1(ATP binding cassette transporter G1,ABCG1)及固醇调节元件结合蛋白-1c/2 mRNA水平。结果:1.相较于control组,转染腺病毒pMIR96的THP-1及HepG2细胞,Dil-HDL摄取及选择性HDL-CE摄取均明显减少。2.HepG2细胞内TC水平减少,而THP-1细胞内脂质含量增加。anti-miR-96转染后,上述结果则出现相反的变化。此外,腺病毒pMIR96转染后,THP-1细胞内Insig-1表达下调,SREBP-lc/2表达上调。结论:1.miR-96通过抑制SR-BⅠ基因的表达减少THP-1及HepG2细胞脂质摄取。2.miR-96增加THP-1细胞内脂质含量可能源于对胆固醇流出的抑制及对胆固醇合成基因表达的增加。第叁章circ_0029343通过靶向捕获miR-96对巨噬细胞及肝细胞选择性HDL-CE摄取的影响目的:预测hsa_circ_0029343存在与miR-96靶向结合序列,并通过靶向抑制miR-96增强SR-BⅠ的功能,最终影响THP-1及HepG2细胞内脂质含量。方法:1.通过查询CircNet数据库获取SCARB1/MIR/CIRC互作网络图,通过查询starbase数据库获取circRNA与miR-96-5p结合情况,在deepBase、CircBase及Gene Bank数据库查询SR-BⅠ编码的circRNA序列。基于上述预测结果,分别构建野生型质粒pCK-circ_0029343-WT与突变型pCK-circ_0029343-Mut重组质粒,测定荧光素酶报告基因活性;RNA FISH实验观察circ_0029343在胞内定位情况。2.构建过表达circ_0029343质粒,流式细胞术观察circ_0029343过表达对THP-1及HepG2细胞Dil-HDL摄取的影响,同位素~(125)I-TC与[~3H]CEt双标HDL观察circ_0029343过表达对THP-1及HepG2细胞HDL-CE选择性摄取的影响,TC测量试剂盒评估胞内TC的水平,HPLC法测定THP-1细胞内TC,FC以及CE的含量;干扰circ_0029343表达后,再检测上述指标的变化。3.RNA pull-down及qRT-PCR检测circ_0029343与miR-96的结合情况,RNA FISH实验观察circ_0029343与miR-96在胞内定位情况;circ_0029343过表达质粒、腺病毒pMIR96及相应对照共转染后,Western blot检测circ_0029343靶向结合miR-96对THP-1与HepG2细胞SR-BⅠ表达的影响以及细胞脂质摄取及脂质含量的变化。结果:1.hsa_circ_0029343可以靶向结合miR-96-5p,并且位于THP-1细胞浆。2.circ_0029343过表达后THP-1及HepG2的Dil-HDL摄取及选择性HDL-CE摄取均明显增强,HepG2细胞内TC水平增加,而THP-1细胞内脂质含量减少;干扰circ_0029343表达后上述结果出现相反的变化。3.circ_0029343与miR-96共定位THP-1细胞浆中,circ_0029343通过靶向结合miR-96后,THP-1与HepG2细胞SR-BⅠ表达,Dil-HDL摄取及选择性HDL-CE摄取均明显增加。结论:1.circ_0029343通过靶向结合miR-96增加THP-1和HepG2细胞SR-BⅠ的表达。2.circ_0029343通过靶向miR-96增强SR-BⅠ的功能,THP-1及HepG2细胞脂质摄取增加,HepG2细胞内TC水平增加,而THP-1细胞内脂质含量减少。第四章circ_0029343通过调控miR-96影响apoE基因敲除鼠动脉粥样斑块形成目的:探讨circ_0029343靶向结合miR-96对apoE~(-/--)小鼠体内SR-BⅠ表达,RCT,血脂水平、肝脏与动脉壁脂质沉积及AS进程的影响。方法:1.高脂饮食饲养60只apoE~(-/--)小鼠,miR-96对小鼠功能实验中随机分为4组:腺病毒pMIR96 negative control(miR-NC),腺病毒pMIR96组(miR-96),miR-96 antagomir negative control(AN-NC),miR-96 antagomir组(AN)。主动脉及肝脏组织SR-BⅠ的表达用RT-PCR、Western blot及免疫组织化学检测,体内RCT效率用~3H-胆固醇放射性来测定,血浆及肝脏组织脂质水平用试剂盒检测,主动脉窦及肝脏组织病变,脂质沉积及胶原纤维的水平分别用HE、油红O及Masson叁色染色进行观察。2.circ_0029343对小鼠功能实验中分为4组:腺病毒pMIR96 negative control(miR-NC),腺病毒pMIR96组(miR-96),miR-NC与circ_0029343共转染组(miR-NC+circ_0029343),miR-96与circ_0029343共转染组(miR-96+circ_0029343),所有检测指标及方法同前。结果:1.相较于control组,miR-96组小鼠体内主动脉及肝组织SR-BⅠ表达下调,体内RCT受到损害,肝组织及血浆脂质水平升高,主动脉窦及肝脏组织病变及脂质沉积加重,而AN组小鼠上述指标则呈相反的趋势。2.circ_0029343拮抗miR-96在小鼠体内的功能,体内RCT得到改善,肝组织及血浆脂质水平下调,主动脉窦及肝脏组织病变及脂质沉积减轻。结论:1.miR-96降低apoE~(-/--)小鼠体内RCT效率,加重血管壁及肝脏组织的脂质沉积,加快AS进程。2.circ_0029343拮抗miR-96在小鼠体内的上述功能,circ_0029343拮抗miR-96在体内功能可能与增强SR-BⅠ功能有关。(本文来源于《南华大学》期刊2019-05-01）
黄霞[5]（2019）在《BMP9基因敲除鼠牙—牙槽骨复合体发育缺陷的相关研究》一文中研究指出背景:牙齿的发育是由外胚层来源的上皮细胞和神经嵴来源的间充质细胞相互作用实现的。大量的信号通路及相关的信号分子参与调控牙齿发育的过程,比如骨形态发生蛋白分子(bone morphogenetic proteins,BMPs)。在目前已分离出来的14种骨形态发生蛋白中,骨形态发生蛋9(BMP9),也称为生长转化因子2(growth and development 2,GDF2)是诱导间充质干细胞成骨分化能力最强的一种BMP分子,但BMP9在牙齿发育过程中的作用尚不清楚。目的:本实验的目的是探究BMP9信号在牙齿发育过程中的作用并初步探讨BMP9影响牙齿发育的可能机制。方法:本实验第一部分通过免疫组化染色研究BMP9在小鼠牙胚中的表达模式。第二部分实验利用已成功构建的BMP9基因敲除小鼠模型通过大体观察、micro-CT、叁维重建分析以及组织学分析研究BMP9对牙-牙槽骨发育的影响。最后在体外实验中,利用沉默表达和过表达BMP9的腺病毒感染小鼠根尖牙乳头干细胞后进行ALP染色、ALP活性分型和qPCR来观察对其成骨、成牙分化能力的影响。结果:实验第一部分,通过对不同发育阶段的小鼠磨牙牙胚进行免疫组化染色,我们发现BMP9在牙冠和牙根发育时期的成牙本质细胞,成釉细胞,牙髓细胞,牙槽骨的成骨细胞中均有表达。实验第二部分,通过大体形态研究发现BMP9基因敲除小鼠的牙齿比对照组野生型小鼠更易磨损,且牙根较短。通过micro-CT、叁维重建和组织学分析发现与野生型小鼠相比,BMP9基因敲除小鼠第一磨牙的牙根短,牙本质壁薄,根管和根尖孔粗大,这些现象与人类遗传性疾病--Ⅲ型牙本质发育不全相似。此外,BMP9基因敲除小鼠牙槽嵴变低,牙槽骨骨密度降低,骨体积分数减小。体外实验证明沉默表达BMP9可以抑制牙源性干细胞的成骨分化标志物ALP和成牙分化标志物牙本质涎磷蛋白(Dspp)、牙本质基质蛋白1(Dmp1)的表达,而过表达BMP9则会促进ALP、Dspp和Dmp1的表达。结论:BMP9可能在牙齿-牙槽骨复合体的发育中有重要作用,但其具体机制还需进一步研究。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
王莹莹[6]（2019）在《上皮根鞘在Vps4b基因敲除鼠牙根发育中的形态和增殖凋亡能力变化》一文中研究指出背景和目的上皮根鞘(Hertwig's epithelial root sheath,HERS)作为启动牙根的信号中心,在牙根发育中必不可少。牙根的正常生理过程与HERS完整的形成、适时的断裂及细胞增殖、凋亡密切相关。牙本质发育不良I型(Dentin dysplasia type I,DD-I)又称为根部牙本质发育不良,是一种牙根严重发育不良导致根短小、畸形的常染色体显性遗传病。细胞液泡分选蛋白4B(Vacuolar protein sorting 4B,VPS4B)是一种多功能蛋白,在调控细胞增殖凋亡、溶酶体降解、细胞内蛋白转运等过程中起重要作用。本课题组前期对一个DD-I家系外周血全基因组测序发现该家系致病基因为VPS4B;并且研究表明VPS4B可能是影响牙齿发育的重要基因,但是其在牙根发育过程中的具体作用不是很清楚。本实验通过Vps4b基因敲除小鼠模型,观察HERS在牙根发育过程中的形态变化,分析该基因突变对HERS细胞增殖、凋亡能力的影响,进而探讨该基因在牙根致畸中的可能作用。材料与方法将Vps4b基因敲除小鼠雌雄合笼交配,记录出生后(Postnatal,P)时间。分别于P5天、P9天、P11天、P15天、P19天引颈处死解剖分离下颌第一磨牙区下颌骨和小鼠尾巴。新生幼鼠的基因型使用PCR技术进行鉴定。将幼鼠下颌骨采用4%多聚甲醛溶液固定、10%EDTA脱钙、石蜡包埋,制备切片,使用苏木精-伊红(Haematoxylin and eosin,HE)染色的方法确定各组小鼠牙根发育时期,免疫组织化学方法对不同时期HERS细胞内细胞角蛋白14(Cytokeratin14,CK14)、增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)以及B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)进行组织定位,对比野生小鼠和Vps4b基因敲除小鼠CK14、PCNA、Bcl-2蛋白表达的差异。结果PCR的检测结果显示子代小鼠基因型为正常型Vps4b~(+/+)和杂合型Vps4b~(+/-)两种。正常小鼠HE染色显示:小鼠P5天HERS形成,牙根发育开始;P9天HERS结构连续,根分叉结构形成;P11天HERS发生断裂;P15天根1/3开始形成;P19天牙根发达到生理性长度,HERS继续断裂,其末端保持完整。正常小鼠免疫组织化学染色结果:P5天,HERS形成双层细胞结构,HERS细胞PCNA阳性表达,Bcl-2无表达;P9天,HERS仍连续并继续延伸,HERS细胞PCNA强阳性表达,Bcl-2阳性表达;P11天,HERS开始发生断裂,HERS末端保持完整,牙颈部有少量细胞PCNA阳性表达,HERS末端部分PCNA强阳性表达,Bcl-2在HERS细胞中弱阳性表达;P15天,牙根表面很少见到PCNA阳性的HERS细胞,HERS末端PCNA仍强阳性表达,HERS细胞Bcl-2弱阳性表达;P19天,牙根发育基本完成,仅HERS末端PCNA阳性表达,Bcl-2阴性表达。Vps4b基因敲除后抗CK14蛋白显示HERS在P9天开始发生断裂,P15天以后HERS不连续,HERS细胞数量减少,并形成细胞簇附着在牙根表面;与正常小鼠相比,PCNA在HERS细胞中表达强度变弱(P<0.05),HERS细胞仅在P9天、P11天Bcl-2呈阳性表达并且表达强度减弱(P<0.05)。结论在Vps4b~(+/-)小鼠牙根发育过程中HERS的连续性过早中断,提示Vps4b基因的缺失影响HERS正常形态的形成。HERS细胞PCNA、Bcl-2的表达强度减弱,推测Vps4b可能通过调节HERS细胞的增殖、凋亡进而影响牙根的发育。(本文来源于《郑州大学》期刊2019-05-01）
朱雪琴,祁胜财,陈万涛[7]（2018）在《MAL基因敲除鼠T细胞表型的检测》一文中研究指出目的:研究MAL基因敲除鼠外周血液和脾脏中T细胞的分布和比率,初步探讨MAL基因对小鼠T细胞分化的影响。材料和方法:本研究中一共使用126只C57小鼠,根据小鼠基因型、性别、年龄筛选分组分为3组,野生型组(39只)、杂合子组(56只)、纯合子组(31只)。收集小鼠血液和脾脏样本,血液样本采用眼球取血法,抗凝管进行收集血液;小鼠脾脏于PBS中研磨后,使用70μm的滤网过滤,收集脾脏细胞。本实验中,检测T细胞采用的表面标记物为:CD3-FITC、CD4-Pe-cy5.5、CD25-PE、FOXP3-APC,使用流式细胞分析技术进行检测分析。按照抗体说明书要求步骤,对细胞表面抗原和胞内抗原分别染色,检测,分析CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞及Treg(CD3+、CD4+、CD25+、FOXP3+)细胞数量和比例。结果:流式分析不同基因型小鼠T细胞的分群,纯合子和杂合子小鼠血液和脾脏中CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞比例比野生型小鼠稍高,但统计学无明显差异(P>0.05);纯合子和杂合子小鼠血液中Treg细胞比例增高,且杂合子小鼠血液中Treg细胞,比例明显高于野生型(P<0.05),但纯合子与野生型无统计学差异(P>0.05);纯合子和杂合子小鼠脾脏中Treg细胞比例降低,且两者均显着低于野生型小鼠(P<0.05)。结论:本实验结果显示,杂合子小鼠血液中Treg细胞比例高于野生型,杂合子及纯合子小鼠脾脏中Treg细胞比例比野生型低,叁组小鼠CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞比例无明显差异,证明MAL基因与小鼠Treg细胞分化,可能有相关性。结果为进一步研究该MAl基因功能奠定了基础。(本文来源于《第十二次全国口腔颌面-头颈肿瘤内科及脉管疾病学术会议暨第二次河南省抗癌协会口腔颌面肿瘤学会会议论文汇编》期刊2018-09-14）
王恒[8]（2018）在《应用重组表达的SELENOF和基因敲除鼠研究SELENOF的生物学功能》一文中研究指出硒作为生命体中的必需微量元素有着增强人体免疫能力,降低病毒感染,防治癌症等功能。而在生物体内,硒蛋白是硒元素(Se)发挥生物学作用的主要载体,迄今为止,人体中共发现有25种硒蛋白。在体内环境下,由于硒蛋白中的硒代半胱氨酸(Sec)比半胱氨酸(Cys)的活性更强且更易亲合,使它在氧化还原反应中发挥了重要作用,硒蛋白的氧化还原功能研究也因此更为完整全面,其中硫氧还蛋白氧化还原酶家族(TrxRs)、谷胱甘肽过氧化物酶家族(GPXs)和脱碘酶家族(DIOs)是目前为止了解最为清楚的硒蛋白家族。与之相比,人们对其他硒蛋白的具体结构和功能知之甚少,本文所研究的硒蛋白F(SELENOF)也是如此。文献报道SELENOF是Trx样折迭超家族中的一员;能通过其N端富含Cys的区域与UDP-葡萄糖:糖蛋白葡萄糖基转移酶(UGGT)紧密结合,增强UGGT的酶活性,推测SELENOF可与UGGT共同参与内质网(ER)上糖蛋白折迭的加工过程;且结构上与ER上的一种二硫键异构酶(PDI)高度相似,并在表面有含Sec的氧化还原活性基序(-CxU-)。虽然对SELENOF结构的探究越来越完善,但其潜在功能尚未被验证,生物学作用也尚未被发现。为了验证SELENOF的功能,并探寻SELENOF的潜在作用,本文首先在体外表达纯化了半胱氨酸替代硒代半胱氨酸的SELENOF(Sec→Cys),对其进行了硫氧还蛋白相关活性检测,使用蛋白质体外结合实验(Pull-down)找出相互作用蛋白并进行生物信息学分析;随后,为了进一步明确其在生物体内的作用,我们构建了SELENOF基因敲除小鼠模型,使用相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)方法,检测海马及肝脏组织的差异表达蛋白并进行生物信息学分析;最后,我们使用PET/CT、组织切片染色等方法对iTRAQ结果进行了进一步验证,并将iTRAQ差异表达蛋白与Pull-down结果进行比对,为SELENOF生物学功能研究提供实验数据作为基础。在成功体外纯化出SELENOF(Sec→Cys)的蛋白后,活性检测结果显示,SELENOF分别可以作为TrxR和Trx的底物参与到硫氧还蛋白反应中,并且可与氧化型谷胱氨肽(GSSG)以及过氧化氢相互反应。表明SELENOF与Trx超家族功能相似,具有氧化还原活性。Trx超家族主要通过氧化还原二硫键的方式对蛋白质折迭产生影响,而从我们的实验结果显示,SELENOF并不能氧化还原胰岛素中的二硫键,因此猜测SELENOF通过其他方式参与蛋白质的质量控制机制。Pull-down实验中共鉴定出109个与SELENOF相互作用蛋白。在SELENOF基因敲除鼠的海马组织iTRAQ结果中共筛选到86个差异表达蛋白,其中,上调的差异表达蛋白50个,下调的差异表达蛋白36个。而在肝脏组织中共筛选到69个差异表达蛋白,其中,上调的差异表达蛋白17个,下调的差异表达蛋白52个。生物信息学分析结果显示,Pull-down实验鉴定的蛋白主要参与了柠檬酸循环、蛋白质合成、核糖合成与运输、胞吞作用等生物过程。SELENOF基因敲除鼠的组学结果分析显示,SELENOF的敲除使海马内的磷酸戊糖途径上调,而肝脏的糖代谢水平下调,小鼠整体表现出血糖耐受性减弱的现象,表明SELENOF影响了包括磷酸戊糖途径在内的糖代谢过程。同时SELENOF通过影响胆固醇合成及载脂蛋白合成等生物过程,在脂代谢中发挥功能,敲除后小鼠脂代谢能力下降,高脂喂养后较于对照组呈现异常肥胖症状。表明SELENOF的敲除会导致脂质代谢的减弱,从而导致脂肪更易堆积。此外,SELENOF敲除后,参与吞噬作用相关信号通路的蛋白下调。因此,SELENOF可能主要影响了参与蛋白质与核糖合成、胞吞作用、糖代谢、脂代谢等生物过程的蛋白质。综上,本研究对SELENOF基于结构上的氧化还原功能进行了验证,并通过对SELENOF互作蛋白和基因敲除引起的差异表达蛋白进行系统性的鉴定及比对,为今后SELENOF功能研究提供了组学基础及探索方向。(本文来源于《深圳大学》期刊2018-06-30）
任坤[9]（2018）在《miR-24靶向抑制SR-BI加剧apoE基因敲除鼠动脉粥样硬化的发生发展》一文中研究指出心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)是全球范围内致死率最高的疾病之一,其病理学基础是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)。血液循环中的脂蛋白,特别是高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL),可以通过胆固醇逆向转运系统(reverse cholesterol transport,RCT)以及对抗血管壁炎症来发挥显着的抗AS效应。传统观点认为,血浆中的HDL胆固醇(HDL cholesterol,HDL-C)水平与CVD的发病率以及严重程度呈负相关关联。但是诸多药物,如烟酸抑制剂和胆固醇酯转移蛋白(cholesteryl ester transfer protein,CETP)抑制剂等,虽然可以显着升高血浆HDL-C水平,却并没有改善CVD的发病情况~([1])。新型观点则认为,HDL功能的强弱,而非其血浆浓度的高低,更能准确反映其心血管保护功能~([2-4])。B类I型清道夫受体(scavenger receptor class B type I,SR-BI)是HDL的天然高亲和性受体,可以介导HDL的诸多心血管保护功能,如RCT,抗炎和抗氧化等等。SR-BI在RCT的起始环节和终末环节都扮演着至关重要的角色。体内的SR-BI主要分布在巨噬细胞,肝细胞和类固醇细胞上,其中以巨噬细胞和肝细胞上分布的SR-BI与AS的关系最为密切~([5])。巨噬细胞SR-BI在脂质和胆固醇代谢方面起到的作用取决于胞内的脂质含量~([6])。当细胞荷脂相对较少时,SR-BI主要介导巨噬细胞向脂蛋白选择性摄取脂质,从而影响泡沫细胞形成;而当细胞荷脂相对较多时,SR-BI则介导巨噬细胞的脂质和胆固醇外流,此为RCT的重要始动环节~([6])。在apoE基因敲除鼠(apoE~(-/-))中,巨噬细胞SR-BI的失活可以加速动脉粥样斑块的形成~([7])。在LDLR基因敲除鼠(LDLR~(-/-))中,巨噬细胞SR-BI的表达在AS早期加速了粥样斑块的形成,而在AS晚期,则减缓了斑块的发展~([8])。除了脂质稳态,巨噬细胞SR-BI同样介导了HDL的抗炎效应,可以显着减少相关致炎因子的分泌水平~([9])。和巨噬细胞相比,肝脏细胞上分布的SR-BI则主要参与RCT的终末环节,即选择性摄取血浆中HDL携带的胆固醇酯(HDL cholesteryl ester,HDL-CE)。研究发现,对高脂喂养的基因修饰小鼠进行肝脏特异性SR-BI敲除可以显着升高血浆中HDL-C的水平,但却加速了AS发生,而过表达肝脏SR-BI则可以显着降低血浆中HDL-C的水平,同时减缓了AS进程~([10-12])。因此,寻找鉴定相关调节因子干预巨噬细胞和肝脏细胞SR-BI表达已成为防治AS的重要策略。MicroRNAs(miRNAs)属于内生型非编码单链小RNA分子,大约22个核苷酸长度,在基因表达的转录后调节中扮演着重要角色,具体机制包括与相应靶基因mRNA的3’非编码区(3’-untranslated regions,3’UTR)进行互补配对结合,阻碍mRNA的翻译过程或促使其降解~([13])。近年来,miRNAs分子被发现在脂质稳态,HDL代谢和炎症中扮演着重要的调控作用,已成为预防治疗AS的重要治疗选项~([14])。miR-24分子位于人类基因组9号(miR-24-1)和19号(miR-24-2)染色体长臂近端。先前关于miR-24的研究主要集中在其抗癌功能,近年来发现它与高血压,心肌梗死和心衰等疾病有很大关联~([15]),特别是在家族性高胆固醇血症的病人体内,miR-24的表达量显着增加~([16])。另外,在高脂喂养的C57BL/6小鼠中,miR-24可以影响脂肪生成基因的表达并且诱导高脂血症的发生~([17]),提示miR-24与AS的联系密切,但具体机制尚未明了。借助多种生物信息学网站分析,我们发现miR-24拥有靶向调控SR-BI的生物学基础。预实验结果表明,miR-24可以降低THP-1巨噬细胞和HepG2细胞SR-BI的mRNA和蛋白表达。据以上分析,我们提出“miR-24可能通过特异性靶向结合SR-BI 3’UTR,对其表达水平进行转录后抑制,进而减弱HDL介导的RCT过程和抗炎效应,致AS发生发展的工作假说”。第1章miR-24与SR-BI 3’UTR的靶向作用分析目的:预测miR-24与SR-BI 3’UTR靶向结合的可能性,具体的结合序列,计算结合自由能大小,并在细胞水平加以验证。方法:成熟的miR-24序列从miRNAbase数据库查询获取,完整的SR-BI 3’UTR序列从GenBank查询得到。miR-24与人/鼠SR-BI 3’UTR结合的可能性,结合序列和结合自由能大小分别在miRDB,TargetScan和RNAhybrid网站上进行分析。在上述预测的基础上,PCR扩增THP-1细胞的SR-BI 3’UTR。体外构建野生型psiCHECK?-2-SR-BI-WT 3’UTR和突变型psi CHECK?-2-SR-BI-Mut 3’UTR质粒载体,和miR-24 mimic/inhibitor一起瞬转进HEK 293T细胞,检测报告基因活性和SR-BI 3’UTR序列的水平变化。将miR-24 mimic/inhibitor以及相应的control转染至人THP-1单核细胞,鼠RAW264.7巨噬细胞以及人HepG2肝癌细胞,RT-PCR和Western blot检测SR-BI的mRNA和蛋白水平。结果:miR-24具有靶向人/鼠SR-BI 3’UTR的生物信息学基础。野生型psiCHECK?-2-SR-BI-WT 3’UTR与miR-24 mimic的共转染显着减弱了荧光素酶报告基因活性,并且降低了SR-BI 3’UTR的mRNA水平,而与miR-24inhibitor的共转染则呈现出相反的结果。miR-24 mimic/inhibitor与突变型psiCHECK?-2-SR-BI-Mut 3’UTR的共转染则没有影响到荧光素酶报告基因的活性和SR-BI 3’UTR序列的mRNA水平。同时,miR-24mimic转染能显着抑制巨噬细胞和肝细胞中SR-BImRNA和蛋白表达,而miR-24inhibitor转染则可以上调其表达。结论:miR-24可以靶向结合SR-BI3’UTR,抑制SR-BI在巨噬细胞和肝细胞中的表达。第2章miR-24对巨噬细胞胆固醇流出,脂质蓄积以及炎症因子表达水平的影响目的:观察miR-24能否通过沉默SR-BI表达来影响巨噬细胞胆固醇流出,胞内脂质蓄积和炎症因子分泌。方法:培养人THP-1单核细胞和小鼠RAW264.7巨噬细胞并分化成泡沫细胞,将miR-24 mimic/inhibitor,相应的negative control以及SR-BI si RNA转染到上述两种细胞中,RT-PCR和Western blot检测ATP结合盒转运体A1/G1(ATP binding cassette A1/G1,ABCA1/G1)的表达水平,液体闪烁计数法评估胆固醇流出情况,高效液相色谱法(HPLC)分析胞内各种脂质成分的含量,油红O染色评估胞内脂质蓄积程度。另外,用LPS处理THP-1巨噬细胞,进行相应转染或抑制剂处理后,检测Toll样受体-4(Toll like receptor-4,TLR-4),髓样分化因子-88(myeloid differentiation factor-88,MyD-88)以及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)等的表达变化,ELISA法检测培养基中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌水平。结果:两种巨噬细胞在转染miR-24 mimic/inhibitor后,ABCA1/G1的mRNA和蛋白水平并没有明显波动。添加apoA-I时,泡沫细胞脂质流出和蓄积水平均无明显变化。而培养基中添加HDL时,miR-24 mimic转染则显着减少了胞内胆固醇流出水平,增加了总胆固醇(total cholesterol,TC),游离胆固醇(free cholesterol,FC)和胆固醇酯(cholesterol ester,CE)的含量以及胞内脂滴数量。miR-24 inhibitor转染则观察到相反的现象。同时,miR-24 mimic可以激活TLR-4/MyD-88/NF-κB通路,增加IL-1β,IL-6和TNF-α的分泌水平,从而拮抗apoA-I/SR-BI介导的抗炎效应,而miR-24 inhibitor转染则出现相反结果。结论:(1)miR-24可以通过抑制SR-BI表达减弱泡沫细胞胆固醇流出,增加脂质蓄积。(2)miR-24可以通过靶向沉默SR-BI激活TLR-4/MyD-88/NF-κB通路,增加IL-1β,IL-6和TNF-α的分泌。第3章miR-24对肝脏细胞选择性摄取HDL-CE的影响目的:观察miR-24能否通过沉默SR-BI表达来影响HepG2细胞摄取Dil-HDL和HDL-CE的水平。方法:常规培养人HepG2肝癌细胞,用miR-24 mimic/inhibitor以及相应的negative control转染细胞,流式细胞术分析细胞摄取Dil-HDL的水平;选择性摄取HDL-CE的量用同位素双标HDL(~(125)I-TC-/[~3H]CEt-HDL)的方法进行评估,试剂盒检测胞内TC的含量变化,RT-PCR检测胰岛素诱导基因-1(insulin induced gene-1,Insig-1),固醇调节元件结合蛋白-1c/2(sterol regulatory element-binding protein,SREBP-1c/2),脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN),硬酯酰辅酶A去饱和酶-1(stearoyl-CoA desaturase-1,SCD-1),3-磷酸甘油酰基转移酶(glycerol 3-phosphate acyltransferase,GPAT)和3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase,HMGCR)和酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶-1/2(acyl coenzyme A-cholesterol acyltransferase,ACAT-1/2)的mRNA水平。结果:与control组相比,转染了miR-24 mimic的HepG2细胞,其摄取Dil-HDL和选择性摄取HDL-CE的水平均显着减少。同时,胞内SREBP-1c/2,HMGCR的表达水平增加,Insig-1和ACAT-1/2的表达量降低,TC含量减少。miR-24 inhibitor转染至上述细胞后则出现相反的结果。FASN,SCD-1,GPAT的表达水平则没有受到miR-24 mimic/inhibitor转染的影响。结论:(1)miR-24可以通过靶向抑制SR-BI表达降低肝HepG2细胞对脂质的摄取水平。(2)miR-24可以通过影响某些胆固醇合成基因的表达来调控HepG2细胞内的脂质水平。第4章miR-24对apoE~(-/-)小鼠体内RCT,SR-BI表达,炎症水平,肝脏和血浆脂质水平以及动脉粥样斑块形成的影响目的:探讨miR-24对apoE~(-/-)小鼠体内RCT、SR-BI表达,血脂水平、炎症因子分泌水平,肝脏脂质水平,动脉壁脂质沉积和粥样硬化斑块形成的影响。方法:对60只8周龄apoE~(-/-)小鼠行高脂饮食(10%猪油+2%胆固醇+4%奶粉+0.5%胆酸钠),随机分为如下4组:miR-24 agomir(AG)组、miR-24agomir negative control(AG-NC)组、miR-24 antagomir(AN)组和miR-24antagomir negative control(AN-NC)组。通过测量不同组织中的~3H-胆固醇放射活性来评估体内RCT效率。肝组织,主动脉组织和腹腔巨噬细胞的SR-BI,以及腹腔巨噬细胞的TLR-4,MyD-88和NF-κB表达水平用RT-PCR和Western blot检测。HPLC法检测腹腔巨噬细胞各脂质成分的含量。ELISA法测量血浆中IL-1β,IL-6和TNF-α的分泌水平。主动脉窦处的AS病变,斑块内的脂质分别用HE染色和油红O染色进行评估。结果:较之于control组,AG组小鼠体内RCT效率明显减弱,肝组织,主动脉组织和腹腔巨噬细胞的SR-BI水平表达均降低。腹腔巨噬细胞脂质含量增加,TLR-4,MyD-88和NF-κB的表达升高,肝组织中TC含量增加,血浆TC,TG,HDL-C,IL-1β,IL-6和TNF-α的水平升高,主动脉窦处AS病变面积扩大,脂质沉积增加。AN组则呈现相反的实验现象。结论:(1)miR-24损害apoE~(-/-)小鼠体内RCT过程,促进炎症反应和血管壁内的脂质沉积,加剧AS进展。(2)miR-24引发的致AS效应可能是通过靶向抑制肝细胞和巨噬细胞SR-BI表达来实现的。(本文来源于《南华大学》期刊2018-05-01）
胥谨慧[10]（2018）在《μ阿片受体在急性应激中的变化及其条件性基因敲除鼠的构建》一文中研究指出应激可以引起机体产生一系列复杂的生理和心理反应。过于强烈或持久的应激反应往往导致认知功能障碍、情绪行为改变等,甚至诱发焦虑症、抑郁症和创伤后应激障碍等严重的神经精神问题。有大量研究表明内源性阿片系统在学习记忆过程中有着重要的调控作用。同时应激反应产生的内源性阿片肽和糖皮质激素之间存在密切关系。但内源性阿片系统是否参与急性应激引起的学习记忆的损伤,其机制目前尚不明确。本实验室前期研究利用Morris水迷宫实验发现高台应激50 min损伤小鼠空间参考记忆的提取,且阻断μ阿片受体可以反转高台应激引起的空间参考记忆提取的损伤效应。以上行为学结果提示μ阿片受体系统可能参与调控急性应激引起的小鼠空间参考记忆提取,但是在急性应激过程中μ阿片受体及其配体的变化并不清楚。本课题通过分子生物学方法观察急性应激引起的μ阿片受体和配体的变化,并在此基础上构建GABA能神经元、星形胶质细胞和谷氨酸能神经元上μ阿片受体的条件特异性基因敲除鼠,为进一步研究μ阿片受体介导急性应激后记忆损伤的具体途径提供技术基础。结果分为两部分:第一部分:μ阿片受体和内源性阿片肽在急性应激中的变化(1)ELISA检测高台应激50min后小鼠海马脑啡肽含量显着升高,说明急性应激通过增强脑啡肽释放而引发记忆损伤。(2)Western Blot检测高台应激后小鼠海马μ阿片受体磷酸化水平和细胞膜上μ阿片受体的表达量,结果显示急性应激引起μ阿片受体的磷酸化水平显著升高,应激25 min细胞膜上μ阿片受体无明显变化,应激50 min细胞膜上μ阿片受体显著减少,说明急性应激激活μ阿片受体。(3)高台应激50min小鼠血清皮质酮含量显着升高,μ阿片受体拮抗剂预处理并不影响高台应激导致的皮质酮的释放增高,说明μ阿片受体活化介导的空间参考记忆的损伤效应独立于皮质酮及其受体介导的途径。第二部分:细胞特异μ阿片受体基因条件性敲除鼠的构建和鉴定(1)利用Cre/Loxp基因重组系统对特定基因进行组织特异性删除。本研究利用此原理构建细胞特异μ阿片受体基因条件性敲除鼠,PCR选择条件性敲除鼠的全敲鼠和对照鼠。(2)Western Blot检测GABA能神经元μ阿片受体基因特异性敲除鼠海马和纹状体的μ阿片受体的表达情况,结果显示μRGABA-/-海马和纹状体μ阿片受体表达减少。检测星形胶质细胞μ阿片受体基因特异性敲除鼠海马的μ阿片受体的表达情况,结果显示μRAstro-/-海马μ阿片受体表达减少。检测谷氨酸能神经元μ阿片受体基因特异性敲除鼠海马的μ阿片受体的表达情况,结果显示μRGlut-/-海马μ阿片受体表达无明显变化。(3)免疫荧光多重标记检测μRGABA-/-和μRAstro-/-基因鼠海马μ阿片受体的表达。综合以上结果GABA能神经元和星形胶质细胞μ阿片受体基因条件特异性敲除鼠构建成功。(本文来源于《陕西师范大学》期刊2018-05-01）
基因敲除鼠论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨有氧运动训练对Apelin基因敲除鼠葡萄糖耐量和骨骼肌糖代谢相关基因表达变化的影响。方法:8周龄野生C57BL/6J小鼠和Apelin敲除小鼠各40只,两种鼠进一步分为安静组和运动组,每组20只,共4组,分别为:野生安静组、野生运动组、敲除安静组、敲除运动组。运动组进行前两周跑速为15 m/min、后两周跑速为20 m/min、坡度为5°的跑台运动,每周运动6天,每天运动1小时。运动组最后一次运动休息48 h后,4组中每组10只进行糖耐量实验(GTT);每组剩余的10只,进行骨骼肌指标的测定。RT-PCR测量骨骼肌Apelin及糖代谢相关基因Glut4、Gbe1、Phka1、Hk2和Pfkm mRNA表达量;Western blot法测定骨骼肌Apelin和Glut4蛋白含量。结果:(1)敲除安静组与野生安静组相比,GTT曲线下面积(AUC)显着增加(P<0.01),骨骼肌内Glut4,Gbe1,Phka1,Hk2和Pfkm mRNA和Glut4蛋白表达都显着性降低(P<0.05)。(2)敲除运动组和野生运动组相比,骨骼肌内Glut4,Gbe1,Hk2和Pfkm mRNA和Glut4蛋白的表达显着性降低(P<0.05)。敲除运动组和敲除安静组相比,小鼠GTT显着性改善,骨骼肌内Glut4,Gbe1,Phka1和Hk2 mRNA表达显着性增加(P<0.05)。(3)野生运动组和野生安静组相比,小鼠糖耐量和骨骼肌内Apelin mRNA和蛋白以及糖代谢相关基因表达没有变化。结论:(1)Apelin KO鼠的糖耐量受损,骨骼肌葡萄糖代谢相关基因的表达降低;(2)4周有氧运动可改善Apelin敲除鼠的糖耐量降低,对骨骼肌糖代谢相关基因表达有一定的积极促进作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
基因敲除鼠论文参考文献
[1].郭薇,房付春,徐会勇,欧阳钧.骨膜蛋白基因敲除鼠正畸牙齿移动模型的建立及验证[J].中国医学物理学杂志.2019
[2].何诗依,李铁瑛,严露,侯影,张缨.4周有氧运动对Apelin基因敲除鼠糖耐量和骨骼肌糖代谢相关基因表达的影响[J].中国运动医学杂志.2019
[3].陈栋,王莹莹,李晓聪,鲁方丽,李强.牙本质涎磷蛋白、Ⅰ型胶原蛋白在vps4b基因敲除鼠磨牙牙胚发育中的时空表达[J].华西口腔医学杂志.2019
[4].曾勇智.Circ_0029343/miR-96调控SR-BI对apoE基因敲除鼠动脉粥样硬化的影响[D].南华大学.2019
[5].黄霞.BMP9基因敲除鼠牙—牙槽骨复合体发育缺陷的相关研究[D].重庆医科大学.2019
[6].王莹莹.上皮根鞘在Vps4b基因敲除鼠牙根发育中的形态和增殖凋亡能力变化[D].郑州大学.2019
[7].朱雪琴,祁胜财,陈万涛.MAL基因敲除鼠T细胞表型的检测[C].第十二次全国口腔颌面-头颈肿瘤内科及脉管疾病学术会议暨第二次河南省抗癌协会口腔颌面肿瘤学会会议论文汇编.2018
[8].王恒.应用重组表达的SELENOF和基因敲除鼠研究SELENOF的生物学功能[D].深圳大学.2018
[9].任坤.miR-24靶向抑制SR-BI加剧apoE基因敲除鼠动脉粥样硬化的发生发展[D].南华大学.2018
[10].胥谨慧.μ阿片受体在急性应激中的变化及其条件性基因敲除鼠的构建[D].陕西师范大学.2018
论文知识图
