恶臭假单胞菌中3-酮脂酰ACP还原酶FabG5是脂肪酸合成关键酶

论文摘要

3-酮脂酰ACP还原酶（FabG）催化脂肪酸合成中的第一步还原反应,是细菌生长的关键酶之一.恶臭假单胞菌在环境污染治理和工业聚羟基脂肪酸（PHA）的生产中,都具有重要的应用价值.生物信息学分析显示,恶臭假单胞菌基因组编码6个FabG同源蛋白质,与大肠杆菌FabG相比较,PpFabG5序列相似性最高（76.5%）,其他几个PpFabG也都具有较高的序列相似性（约50%）.除PpFabG4之外,其他的同源蛋白质都具有催化活性位点和N端辅因子结合位点.为研究恶臭假单胞菌中这6个FabG同源蛋白质的生物学功能,本文进行了异体遗传互补、体外酶学活性分析、体内基因敲除与突变株性状分析等研究.结果显示,只有PpfabG1、PpfabG3、PpfabG5能恢复大肠杆菌fabG温度敏感突变株CL104在42℃时生长,其中PpfabG1互补株生长较弱.而在体外活性检测中,PpFabG1、PpFabG3和PpFabG5在脂肪酸合成起始反应和延伸反应中都具有催化活性,但PpFabG1活性较弱,PpFabG6仅在起始反应中具有催化活性. PpfabG5是恶臭假单胞菌生长的必需基因,不能被敲除,而其他几个PpfabG基因敲除后不影响菌体的生长,突变株的脂肪酸组成与野生菌也无差异.但PpfabG1、PpfabG2敲除后菌体的运动性下降,PpfabG3、PpfabG6突变影响了生物被膜的合成量,而PpfabG4、PpfabG6敲除突变株对H2O2的耐受性增强,表明这些基因具有不同的生理功能,可能在菌体的不同逆境中发挥作用.

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株、质粒和培养基
•     1.1.2 试剂
•   1.2 表达质粒构建
•   1.3 异体遗传互补分析
•   1.4 突变株菌株的构建
•   1.5 蛋白质表达与分离纯化
•   1.6 体外功能检测
• 2 结果与分析
•   2.1 生物信息学分析
•   2.2 PpfabGs遗传互补大肠杆菌fabG温度敏感突变株CL104
•   2.3 FabG同源蛋白的表达纯化与体外活性测定
•   2.4 恶臭假单胞菌PpfabGs突变株的构建
•   2.5 恶臭假单胞菌PpfabGs突变株生理性状分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郭剑英,陈博,李先其,况承伟,王海洪,马建荣,余永红

关键词: 恶臭假单胞菌,酮脂酰还原酶,脂肪酸合成

来源: 生物化学与生物物理进展 2019年10期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 华南农业大学兽医学院,华南农业大学生命科学学院/广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室,广东食品药品职业学院

基金: 国家自然科学基金(31601601,31671987),广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室开放课题(PFRAO201804),广东食品药品职业学院院级课题(2017ZR006)资助项目~~

分类号: Q936

DOI: 10.16476/j.pibb.2019.0132

页码: 1002-1011

总页数: 10

文件大小: 2519K

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