His-pull down联合质谱鉴定谷氨酸棒杆菌中乙酰羟酸合酶IlvN的相互作用蛋白

论文摘要

以谷氨酸棒杆菌关键酶乙酰羟酸合酶调节亚基IlvN的相互作用蛋白研究为切入点,筛选出与其存在相互作用的蛋白。针对实验室选育的1株缬氨酸高产菌株Corynebacterium glutamicum XV,利用his-pull down技术捕获与乙酰羟酸合酶存在相互作用的蛋白质,通过液质联用的方法对差异蛋白进行鉴定,经蛋白电泳和液质分析后,鉴定得到45种蛋白,其中,大部分蛋白为参与翻译过程的核糖体蛋白,此外,还包括参与能量产生与转换、氨基酸转运与代谢、碳水化合物转运与代谢、脂转运与代谢、信号传导等过程的蛋白质。乙酰羟酸合酶是支链氨基酸合成过程中的一个重要关键酶,与其存在相互作用的蛋白涉及代谢过程中的多个方面,这些相互作用的蛋白对于支链氨基酸的合成代谢可能产生影响,所得蛋白相互作用结果对进一步指导协调代谢工程改造具有重要的意义。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 ilvN基因的克隆以及原核表达载体构建
•     1.3.2 构建蛋白表达菌株
•     1.3.3 IlvN蛋白诱导表达
•     1.3.4 IlvN蛋白纯化
•     1.3.5 提取C. glutamicum XV胞内蛋白
•     1.3.6 His-pull down实验
•     1.3.7 蛋白酶解
•     1.3.8 液质检测与蛋白鉴定
• 2 结果与分析
•   2.1 重组质粒的酶切鉴定结果
•   2.2 IlvN蛋白的表达、纯化
•   2.3 His-pull down进行IlvN相互作用蛋白的筛选
•   2.4 IlvN相互作用蛋白的鉴定
• 3 展望

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 侯正杰,张权威,莫晓琳,夏利,谭淼,孙全伟,马倩,陈宁

关键词: 谷氨酸棒杆菌,分支链氨基酸,蛋白相互作用

来源: 食品与发酵工业 2019年16期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学,化学,一般化学工业

单位: 天津科技大学生物工程学院,代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室,天津市微生物代谢与发酵过程控制技术工程中心

基金: 天津市科学基金项目(17JCQNJ09500),国家自然科学基金项目(21808186)

分类号: O657.63;TQ920.1

DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.020456

页码: 11-17

总页数: 7

文件大小: 403K

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