树鼩脊髓星形胶质细胞的分离鉴定

论文摘要

目的建立树鼩脊髓来源的星形胶质细胞的体外分离、鉴定方法以及原代培养技术。为体外利用树鼩星形胶质细胞开展相关研究提供实验材料。方法给新生树鼩实施安死术后采集脊髓组织,于解剖显微镜下去除脊髓膜和血管,减少成纤维细胞、血管内皮细胞和红细胞的影响,然后使用胰蛋白酶和DNaseⅠ联合消化脊髓组织,分离培养。根据星形胶质细胞和成纤维细胞、小胶质细胞的贴壁时间差异,使用差速贴壁法去除成纤维细胞;然后在细胞铺满后,使用恒温摇床振荡的方式去除少突胶质细胞;通过连续3次纯化,去除神经元。对所培养的细胞进行胶质纤维酸性蛋白(GFAP)细胞免疫荧光染色鉴定。结果采用胰蛋白酶和DNaseⅠ联合消化后差速贴壁培养,能够分离获得星形胶质细胞。细胞具有典型的原浆型和纤维型特征,原浆型呈多角状,突起少而粗壮;纤维型突起丰富且向外铺展开;细胞免疫荧光结果显示GFAP表达阳性,且纯度可达到95%。结论成功建立了树鼩的脊髓星形胶质细胞的体外分离纯化培养方法。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 实验动物
•     1.1.2 主要仪器与试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 脊髓原代星形胶质细胞分离
•     1.2.2星形胶质细胞纯化培养
•     1.2.3 星形胶质细胞形态学观察
•     1.2.4 星形胶质细胞免疫荧光鉴定
•     1.2.5 MTT法测定星形胶质细胞生长曲线
• 2 结果
•   2.1 形态学观察
•   2.2 细胞免疫荧光染色
•   2.3 树鼩星形胶质细胞生长曲线
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王璇,王文广,李娜,袁园,张志成,孙晓梅

关键词: 星形胶质细胞,脊髓,分离鉴定,树鼩

来源: 实验动物与比较医学 2019年01期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学

单位: 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队云南省眼科疾病防治研究重点实验室

基金: 云南省应用基础研究计划面上项目(2018FB045),云南省科技人才和平台计划项目(2017HC019),重点实验室运行补助专项(2017DG008)

分类号: Q95-33

页码: 15-20

总页数: 6

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