导读:本文包含了表皮干细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:干细胞,表皮,细胞,皮肤,创面,角质,衰老。
表皮干细胞论文文献综述
程亚楠,周小平,陈晓梅[1]（2019）在《补益营卫方对衰老表皮干细胞增殖的影响》一文中研究指出目的研究补益营卫方对衰老皮肤表皮干细胞增殖的影响,探讨其延缓皮肤衰老的可能机制。方法 10只3月龄SAMR1种小鼠作为年轻组,40只8月龄SAMP1种小鼠作为老年组和补益营卫方高、中、低剂量组,每组10只,药物组分别按高、中、低剂量灌胃饲养。老年组和年轻组生理盐水灌胃,连续6周。灌胃饲养结束前两周给小鼠腹腔注射BrdU,取背部皮肤冷冻切片。免疫荧光法检测各组表皮干细胞增殖标志物ki67的表达。原代C57BL/6小鼠表皮干细胞的分离及培养,MTT法选择5%加药浓度绘制生长曲线。MTT法检测表皮干细胞增殖率。结果与年轻组比较,老年组增殖标志物ki67的表达水平显着降低(P<0.05);经药物干预后,衰老表皮干细胞增殖标志物ki67的表达水平均升高,其中中、高剂量组表皮干细胞数目显着增多(P<0.05)。与年轻常规组比较,老年常规组原代培养的干细胞增殖率显着降低(P<0.05);经药物干预后,衰老表皮干细胞增殖率显着升高(P<0.05)。结论补益营卫方可能通过影响增殖标志物ki67的表达与干细胞增殖率,提高表皮干细胞的活性,增加表皮干细胞数量,延缓皮肤衰老。(本文来源于《时珍国医国药》期刊2019年10期）
倪海涛,范晓明,王越,仵敏娟[2]（2019）在《JAM-A经MicroRNA-221靶向PTEN促人表皮干细胞增殖加快的机制研究》一文中研究指出人表皮干细胞(epidermal stem cells,hEpSCs)是皮肤组织特异性干细胞,可以增殖分化为各种表皮细胞,具有维持表皮自我更新、保持正常表皮结构以及促进创面修复等作用。其增殖分化可受到很多因素的调控,比较常见的是一些促进表皮干细胞增殖的因子及抑制细胞增殖的因子。另有研究证实,microRNA可参与调控细胞增殖。连接黏附分子JAM-A敲低后hEpSCs增殖加快,(本文来源于《中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编》期刊2019-08-18）
谭宏月[3]（2019）在《Arachna转分化人表皮干细胞分泌物通过抑制T细胞活化辅助治疗炎症性皮肤病》一文中研究指出背景表皮干细胞(ESC)具有增殖并分化成表皮中各类细胞功能,并维持皮肤正常表皮结构,与皮肤更新密切相关。目前研究显示ESC具有多种功能不同的亚群,我们团队研究发现一些特殊类型的表皮干细胞除了再生功能,更重要的是发挥免疫调控作用,在炎症性皮肤病具有潜在的辅助治疗作用。目的研发一种来源于特殊类型人源ESC分泌的提取物产品,改善炎症皮肤微环境。方法利用负压诱导成具有稳定增殖能力和发挥免疫调控作用优势的Arachna转分化人表皮干细胞亚群,并进行传代筛选和鉴定,将稳定传代的Arachna-ESCs应用质谱分析及蛋白鉴定,进行特殊肽组合提取并与HACAT细胞(LPS和TNFα/IFN-γ刺激的角质细胞)进行共培养,同时皮下注射治疗Af-诱导的特异性皮炎模型鼠。分别应用100倍、50倍、20倍浓度的Arachna-ESCs提取物皮下注射至研发者左上肢前臂形成3个皮丘,进行初步安全性测试,同时进行皮肤外涂吸收相关实验。随后送检CFDA进行相关质检并注册备案,招募相关炎症性皮肤病患者进行试验性治疗。结果 Arachna-ESCs分泌物显着抑制TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症因子,同时上调IL-10和TGF-β1;在AD模型小鼠,显着改善皮炎相关表现,降低血清中IgE水平,同时上调体内CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平;在招募的患者中,其外用涂抹对于配合炎症性皮肤病治疗具有协同作用。结论 Arachna-ESCs分泌物可配合标准治疗,作为炎症性皮肤病治疗潜在辅助手段。(本文来源于《2019首届全国湿疹皮炎皮肤过敏学术会议论文汇编》期刊2019-06-27）
冯欢,刘仕勇,周燕,康华利,黄小兵[4]（2019）在《miRNA-198靶向调控表皮干细胞内FGFR1表达诱导慢性创面形成的机制研究》一文中研究指出目的:研究miR-198对慢性创面形成的影响,探讨miR-198靶向调控表皮干细胞内成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1表达的可能机制与相关性。方法:所有大鼠以表皮干细胞培养划分为叁组,对照组20只,采用基础饲料,40只复制糖尿病模型大鼠组,共32只建糖尿病大鼠慢性创面模型成功,其中16只为慢性创面组,另外16只通过快速尾静脉注射miR-198抑制剂转染系统溶液,命名为转染抑制载体组,通过免疫组织化学检测表皮干细胞表达,计算慢性创面的愈合率。通过细胞生长曲线测试和细胞周期分析miR-198对表皮干细胞的影响,实时定量PCR检测各组表皮干细胞中FGFR1表达。用Western-blot法检测各组细胞中FGFR1及下游Ras和MAPK蛋白的表达。结果:与对照组比较,慢性创面组miR-198表达量明显增高(P<0.01),转染抑制载体miR-198后,表皮干细胞中表达显着性下调(P<0.01),细胞周期分析发现慢性创面组会抑制表皮干细胞增殖,转染抑制载体(Anti-miR-198)阻断miR-198后表皮干细胞增殖得到恢复。免疫组化检测显示,慢性创面培养组FGFR1阳性表达数量增加,随着转染抑制miR-198载体的影响,FGFR1在转染抑制载体组表达增加更明显(P<0.01)。Westernblot检测显示,在慢性创面模型中,转染抑制载体(Anti-miR-198)后,FGFR1的蛋白表达明显增加,转染抑制载体组Ras和MAPK的蛋白表达明显降低。结论:miR-198可能负向调控表皮干细胞FGFR1,抑制miR-198可以增强表皮干细胞FGFR1表达,加快表皮干细胞增殖和分化,从而能促进慢性创面愈合。(本文来源于《中国美容医学》期刊2019年05期）
刘哲男[5]（2019）在《一种简便、高效的从成人皮肤组织分离原代人体表皮干细胞的方法》一文中研究指出目的:人体的表皮干细胞,又名人类角质形成细胞(HCKs),具有高分化潜能,能够增殖并分化出多种皮肤细胞,人们可利用此潜能进行临床疾病的再生治疗以及细胞学研究。而现阶段提取成人表皮干细胞的方法步骤较为繁琐,且提取的原代细胞数量有限,使其在后续的应用上受到限制。本研究旨在针对现阶段表皮干细胞提取方法存在的不足进行改良,并探讨其改良方案及改良后的提升效果。方法:将手术中切除的成人皮肤组织置于70%乙醇中30秒,清洗表面血块等杂物,并用剪刀对组织稍加修整。放入含有2%-3%青链霉素的PBS缓冲液进行简单的消毒,进一步清洗。共浸泡两次,每次3分钟,以达到灭菌消毒的目的。然后用手术刀将组织完全切碎成匀浆状态,将匀浆样组织转入50ml离心管中加入酶消化液(1g组织用20ml酶消化液,2.5mg/ml I型胶原酶和2.5mg/ml解离酶),混匀。将其放入37℃水浴锅内震荡消化60分钟。再加入0.25%的胰蛋白酶(1:5)到含组织的50ml离心管中继续消化30分钟;最后加入DNA酶I(10mg/ml)37℃消化5分钟。组织消化好后加相同体积的含有10%胎牛血清(FBS)的终止培养基反复吹打(大约20下)100μm细胞过滤器过滤,离心,弃上清,细胞沉淀用含10%胎牛血清的终止培养基重悬,离心;弃上清,所得的细胞沉淀用表皮培养基重悬,接种到细胞培养瓶或100mm细胞培养皿。培养皿里加入1:1000浓度为10mM的Rho关联蛋白激酶抑制剂Y-27632,培养2-3天。每2-3天换液。细胞密度生长至80%时进行传代、冻存或后续研究。同时,利用传统方法对相同皮肤组织进行细胞提取与培养:用10ml PBS冲洗,然后,用10ml 70%乙醇冲洗30秒,用10ml洗涤液(含2%青霉素和链霉素的PBS)浸泡两次,每次5分钟。用无菌剪刀修剪组织,在100mm细胞培养皿中去除皮下脂肪层,然后称重皮肤组织。将组织转移到另一个100mm无菌培养皿中,将真皮一侧朝下,然后用手术刀将皮肤组织切成3-4mm宽的条状。将2.5 mg/ml的解离酶液10 ml加到培养皿中,再置入皮肤组织,4℃孵育过夜。第二天,用镊子把真皮层上的表皮剥下来,用手术刀片将剥离下来的表皮切碎成匀浆状态,然后,用10ml 0.25%的胰蛋白酶在50ml的离心管中重悬,在37℃的水浴中震荡消化20分钟。通过加入等量的中和溶液来中和胰蛋白酶的活性。分离的表皮细胞悬浮液上下震荡20次,再用10ml移液管将细胞悬浮液通过100μm细胞过滤器,以去除任何残留的组织碎片。然后离心,重悬,清洗后再离心。用表皮细胞培养基将离心管底部的细胞团块重悬,移入培养皿进行培养。2-3天换液,细胞长满时传代。接下来,比较两种方法的耗时与复杂性,以及对所提细胞数量与质量的比较。我们将分别用两种方法培养的原代细胞于第3天、第5天进行观察,并比较第7天细胞数目上的不同,再将细胞培养至可传代的密度,分别记录所耗时间。另外,为了测定表皮干细胞的干性与纯度,我们将改良方法所获得的原代、第3代表皮干细胞进行细胞爬片,并在其生长至合适密度时对其进行K5、Loricrin、Veminten的免疫荧光染色。结果:(1)传统方法分离人体表皮干细胞时需经历一个过夜的酶消化过程,较为耗时,并且会影响细胞生命力。另外,由于需要将表皮从真皮上剥离,增加了方案的复杂性,还会损失部分表皮细胞。对于一些难以将表皮剥离的组织,这种方法的提取效率会大打折扣。而通过新方法的改良则省去了剥离表皮这一步骤,简化了提取过程,提高了效率。总时间约九十多分钟的酶消化过程也大大缩短了新方法的耗时,同时在一定程度上保证了细胞的生命力。(2)对于传统方法提取出的原代表皮干细胞,细胞生长速率较慢;而新方法利用了Y-27632增强表皮细胞功能的作用,使提取的角质形成细胞生长速率快且呈菌落式增殖。对新方法提取的原代细胞及传代后的细胞进行K5、loricrin、Vimentin免疫荧光染色,发现细胞的分化潜能高,维持了上皮基底细胞的特性。结论:体外培养的人体原代表皮干细胞已经被越来越多的应用于临床与科研领域。因此对于提取出的原代表皮干细胞的数量与质量有较高的要求,而传统提取成人原代细胞的方法不能很好的满足以上两个要求。本实验改进了现有方法的不足之处,缩短了酶消化时间,简化了细胞提取步骤,并利用Rho蛋白激酶抑制剂Y-27632提高原代角质形成细胞的增殖与贴壁,从而增加了细胞或的数量与细胞的干性。因此,本实验研究出的新方法可以获得高质量、足量的人体表皮干细胞,可以更好地应用于临床与科研领域。(本文来源于《山东大学》期刊2019-04-24）
于紫月[6]（2019）在《为了让你更年轻 表皮干细胞上演“C位”争夺战》一文中研究指出皮肤松弛、反应迟缓、各器官机能下降，似乎每一条人生之路都通向同一个终点——衰老。时间面前，不论是叱咤风云的大人物，还是蹉跎度日的小人物，都躲不过这道坎儿。如果能将人体衰老的机制研究透彻，我们或许就能找到“永葆青春”的钥匙。近日发表在《自然》杂志(本文来源于《科技日报》期刊2019-04-16）
许正伟,贺宝荣,刘团江,郭华,郝定均[7]（2019）在《碱性成纤维细胞因子对SD大鼠表皮干细胞分化为神经干细胞的影响》一文中研究指出目的研究碱性成纤维细胞因子(bFGF)对大鼠表皮干细胞分化为神经细胞的影响。方法分离获得饲养了1～3天的新生SD大鼠表皮基底层组织,利用10 min快速贴壁法消化、分离获得表皮干细胞,于倒置显微镜下观察表皮干细胞的形态。培养表皮干细胞的培养基为K-SFM,然后按照不同密度表皮干细胞进行分组处理(0.1×10~7/mL,0.3×10~7/mL,0.5×10~7/mL,0.1×10~6/mL),每组加入20 ng/mL的bFGF,利用细胞免疫组织化学法检测细胞标志物Nestin和NSE的变化,以及观察细胞形态发生的变化。结果成功分离得到SD大鼠表皮干细胞;bFGF诱导后,0.3×10~7/mL组和0.1×10~7/mL组细胞第3天即可见细胞开始伸展生长,在约1周时细胞开始分化成神经细胞;且在细胞形态发生双极化改变的数目趋势上也具有一致性;Nestin和NSE检测均呈阳性表达。结论 bFGF有助于诱导表皮干细胞向神经细胞的分化,而且该诱导作用具有一定的细胞密度依赖性。(本文来源于《安徽医药》期刊2019年03期）
吴燕虹,陈琪,李勤,程飚,张斌[8]（2018）在《血小板衍生生长因子对表皮干细胞增殖与迁移能力的影响》一文中研究指出目的探讨PDG对表皮干细胞增殖与迁移能力的影响。方法从提供者皮肤组织中分离表皮干细胞,并采用免疫组化的方法对表皮干细胞指标分子CK19与β1整合素进行鉴定;将PDGF干预表皮干细胞后,采用MTT法检测细胞增殖情况;采用流式细胞术检测细胞周期;采用Transwell小室实验检测细胞迁移;采用WB检测PCNA蛋白的表达水平。结果分离的表皮干细胞中CK19与β1整合素呈阳性表达;PDGF作用于表皮干细胞后,细胞增殖率显着上调,细胞周期从G1期进入S期明显缩短,细胞迁移能力增强。结论 PDGF能够促进表皮干细胞的细胞增殖与细胞迁移能力。(本文来源于《中国美容整形外科杂志》期刊2018年12期）
尹诗璐,秦泽莲[9]（2018）在《表皮干细胞的特点及应用于皮肤软组织创面修复的实验研究进展》一文中研究指出意外伤害造成的复杂大面积创面以及各种疾病导致的慢性难愈性创面往往难以修复。自体皮片或皮瓣移植是目前整形外科常用的修复方法,然而供皮区所形成的新的创面往往带来一定的功能及形态损伤。随着微创外科理念的广泛深入,如何通过最小的创伤达到最佳修复效果成为各外科专业的研究(本文来源于《中国微创外科杂志》期刊2018年10期）
张敏[10]（2018）在《CD271联合TrkA受体通过促进表皮干细胞的增殖和迁移促进创面愈合的初步研究》一文中研究指出研究背景烧伤后创面愈合问题显着降低了患者的心理和身体的生存质量,甚至会威胁他们的生命。近年来许多治疗方法应用到临床创面治疗上,包括干细胞治疗,但是目前依然没有完美有效的治疗方法。因此,我们急需一种完美修复创面而且价格又可以承受的治疗方法应用于烧伤的创面治疗。表皮干细胞主要来源于皮肤基底层,占基底层细胞数的2%4%,具有分化为表皮角质形成细胞和皮肤其他附属器官的潜能,并且是皮肤组织创伤再生和修复的理想的种子细胞。表皮干细胞的表面标记物有Cytokeratin(CK)19和lntegrin-β 1(β 1),分化为成熟的角质形成细胞后则CK10表达阳性。CD271,是神经生长因子的受体,即p75受体,可以调节多种干细胞的增殖、凋亡和分化,并且还有研究表明CD271可能在促进皮肤的创面愈合过程中起着重要作用,然而表皮干细胞中的CD271促进创面愈合的具体机制却不明了。作为神经生长因子的另一个受体TrkA,既往研究提示CD271和TrkA可以互相调控彼此的表达,CD271和TrkA的比率关系也可以影响细胞的增殖能力等。然而在皮肤中,尤其是表皮干细胞中CD271是否受到TrkA的调控作用并不明确。另外ERK、AKT和JNK信号通路也可能参与皮肤的创面愈合过程。本实验意在研究在皮肤创面愈合过程中,CD271的过表达的表皮干细胞是否可以促进创面愈合,以及CD271是否联合TrkA在创面愈合过程中通过促进表皮干细胞的迁移和增殖进而促进创面愈合。目的探讨CD271是否影响表皮干细胞的生物学特性及是否促进创面愈合,并且进一步研究表皮干细胞中的TrkA在CD271引起的创面愈合过程中的作用和机制。材料和方法1、体外细胞实验(1)表皮干细胞的分离培养本实验所涉及到的动物实验的处理依从山东大学动物伦理委员会的行为规范。提取新出生的乳鼠皮肤,使用25%的戊巴比妥溶液麻醉乳鼠,处死乳鼠,75%的酒精消毒皮肤,铺巾,取下乳鼠背部腹部的全部皮肤,放入2~3ml冰的PBS溶液中。在超净台操作,采用DispaseII酶消化的方法取下表皮层,丢弃真皮层,将剥离的表皮层用PBS冲洗叁次,使用无菌剪刀剪碎,放入0.05%的胰酶室温下消化10分钟,用表皮细胞的全培养基终止消化,用200目的滤网过滤后,l000rmp,5分钟,室温离心,弃去上清,加入适量的表皮干细胞专用KSFM培养基(Serum-free medium,Gibco)混匀,放入37℃、5%CO2的细胞孵育箱里面培养。3天后更换培养基,提前预热37℃的PBS轻轻冲洗不能贴壁的细胞,当细胞长到80%~90%以上的时候给予传代。(2)转染慢病毒把表皮干细胞(P3)铺在96孔板里,培养24小时,然后提前一天转染慢病毒,以1×105/孔的细胞铺到24孔板中。培养细胞数量为2×105/孔左右,转染慢病毒。用含6 u g/ml polybrene的2~3ml新鲜的培养基替换旧的培养基后,然后再加入适量的病毒悬液。37°C孵育。4小时后加入2ml新鲜培养基以稀释polybrene。继续培养细胞,再用新鲜培养基替换原来含有病毒的旧的培养基,再继续培养细胞。用敲除了 CD271的慢病毒(含有荧光蛋白),在转染病毒48小时后,转染效率高,可见有很多荧光表达,72小时后会更加明显。(3)应用K252a降低TrkA的表达将CD271正常表达和CD271过表达的表皮干细胞培养在表皮干细胞专用培养基中并铺板使密度大概为1× 105左右,并使用100nM K252a(Santa Cruz Biotechnology Company,CA)预处理 24 小时。(4)细胞增殖能力检测将CD271过表达、低表达及正常对照组表皮干细胞(P4),以及给予K252a试剂干预后的表皮干细胞使用细胞克隆、CCK-8和细胞增殖检测试剂盒等方法进行检测。(5)细胞迁移能力检测为了检测细胞的迁移能力,我们使用了 Transwell实验。小室膜孔径8 μm,各组细胞种于小室上层,小室上层为无表皮生长因子的培养基,下层为表皮干细胞专用培养基。用孵箱培养各组细胞24小时,用PBS冲洗,再用棉签擦去Transwell上室内的细胞,用95%的乙醇固定微孔膜下层的细胞,再苏木素染色2分钟,通过采用表皮生长因子作为诱导,计数相同面积下穿透聚碳酸酯膜的细胞数量,以此判断细胞的迁移能力。(6)细胞凋亡能力检测流式细胞术可以用于检测表皮干细胞的凋亡能力。Q2代表着凋亡的比率,Q4代表着死亡的比率。将表皮干细胞,大约IX 106个细胞每孔,消化下来再用5 μ 1的PE-7-AAD和Annexin-V-FITC染色,在室温下避光染色15分钟。Hoechst 3342/PI或者TUNEL/DAPI双染实验检测细胞的凋亡。将处理过的的表皮干细胞,大约1×106个细胞每孔,提前24小时种到24孔板里。再用PBS清洗后,Hoechst33342/PI或者TUNEL/DAPI加入到培养基里并孵育15分钟。在荧光显微镜底下观察,并即时拍照计数死亡和所有的细胞。2、体内动物实验(1)深II度烧伤模型设计随机抽取C57BL/6小鼠(6周,雄性,2025克)。首先给予25%戊巴比妥溶液麻醉6周龄的雄性小鼠,35mg/kg,成功麻醉后,将小鼠背毛剃除干净,碘伏酒精消毒,在100℃水浴直径0.5厘米的铜块放于小鼠背部4秒钟,制作深II度烧伤模型。动态观察小鼠烧伤创面愈合的过程,在0天、7天、14天和21天分别取材。(2)皮肤全层缺失的模型设计C57BL/6小鼠(6周,雄性,20～25克),给予正常饮食,将小鼠麻醉(给予25%戊巴比妥,35mg/kg),剃去小鼠的毛发,并75%酒精消毒,使用直径大小0.5厘米的模具在小鼠背部制作创面,然后使用5ml的林格液复苏麻醉的小鼠。在0天、3天和7天拍照测量创面面积,并在7天时取小鼠创面包括周边2mm的皮肤,用于做免疫组织化学染色和Western blot实验分析。(3)K252a药物抑制TrkA表达的动物模型制备K252a 是 TrkA 受体的抑制剂[36,37]。购自 Santa Cruz Biotechnology 公司。15μgK252a(10μg/mg)溶解在含2%的DMS0的生理盐水中,在-20°C的黑暗环境中保存。C57BL/6小鼠(20~25克,雄性,6周)随机分成4组,每组5只。在Control组和CD271组腹腔注射含2%DMS0的生理盐水,在K252a组和CD271+K252a组则注射溶解有K252a药物的2%DMS0生理盐水(5μg/kg)。提取皮肤组织蛋白,Western blot方法检测TrkA的表达情况。(4)表皮千细胞干预创面愈合的实验4.1 C57BL/6小鼠(6周,雄性,20~25克)随机分组,每组6只小鼠,按照上述的步骤制作深II度烧伤模型。将等体积(150 μl PBS)且等细胞数量(1X 10～7)的四代CD271正常表达和CD271过表达的表皮干细胞注射到制作创面后的当天、3天和5天的创面周围5mm的真皮层。随后在当天、7天、14天和21天时测量创面面积并拍照。创面的面积采用游标卡尺测量。在第21天的时候取创面及周边的皮肤,检测相关指标的表达情况。4.2使用K252a(5 μg/kg)腹部注射制作TrkA表达缺失的小鼠模型。Western blot检测在皮肤组织中TrkA表达缺失后,按照上述描述(2)制作直径0.5厘米的皮肤全层缺失的创面模型。同理将等体积且等细胞数量的正常及CD271过表达的表皮干细胞注射到制作创面后的当天、3天和5天的创面周围皮肤的真皮层中,然后在当天、3天和7天时测量创面面积并拍照。在第7天的时候取创面及周边的皮肤,检测相关指标的表达情况。(5)免疫组织化学染色1)脱蜡:60°C条件下烘片,将片子然后依次放入无水的乙醇,95%的乙醇,85%的乙醇,70%的乙醇和蒸馏水中,2)抗原修复:把抗原修复液预热,再把切片放入修复液中,继续加热约1分钟后关掉电源,自然冷却到室温,3)免疫组织化学染色的实验过程:内源性过氧化物酶室温下封闭20~30分钟后;然后按照一抗说明书稀释一抗(β 1,CD271,CK19和CK10),滴加一抗后4°C过夜孵育;37°C下滴加Polymer helper后孵育20～30分钟;在37°C下滴加生物素化二抗后孵育20～30分钟;最后用DAB染色后在显微镜底下观察;最后用苏木素染色;等片子干燥后封片,加中性树胶覆盖片子,晾干;显微镜拍照。(6)Western blot 检测按照实验步骤提取各组细胞和动物皮肤组织中的蛋白,灌胶、电泳、转膜孵育一抗过夜后,显影检测实验中CD271和表皮干细胞表面标记物,如CK10、CK19和β 1的表达。同时测定磷酸化Akt,ERK和JNK信号通路的表达变化情况。3、统计学分析对上述实验数据使用SPSS 17.0软件进行统计学分析。两组之间正态分布的数据的比较使用单因素方差分析,t检验。多组之间数据的比较使用AN0VA检验。本实验研究中所得的数据均使用(平均值土标准差)表示。当P<0.05的时候,说明数据具有明显的统计学意义。实验结果1、细胞实验(1)CD271调控表皮干细胞的分化表皮干细胞的分化能力在皮肤创面愈合过程中发挥作用。因此我们实验研究了 CD271在表皮干细胞中的分化作用。将表皮干细胞培养在胶原包被的培养瓶中,通过转染慢病毒我们得到CD271过表达的表皮干细胞(CD271-vo eSCs)和CD271低表达的表皮干细胞(CD271-kd eSCs)以及转染了空病毒的对照组表皮干细胞(Control eSCs)。可以通过判断带有绿色荧光的细胞来判断病毒是否转染细胞成功,并可以粗略判断转染效率。免疫组织化学染色和Western blot结果显示我们得到CD271-vo表皮干细胞和CD271-kd表皮干细胞以及对照组表皮干细胞。CD271在表皮干细胞的分化作用利用CK10、CK19和β 1的表达量多少来表示。当CD271过表达时,CK10表达升高而CK19表达下降,相反的,当CD271低表达时,CK10表达降低而CK19和βl表达升高。这些结果表明CD271可以有效的调控表皮干细胞的分化。(2)CD271调控表皮干细胞的增殖凋亡和迁移能力接下来我们检测了 CD271对于表皮干细胞凋亡和增殖方面的影响。我们使用了流式细胞术、细胞克隆和CCK-8等方法检测细胞的增殖。对比Control组表皮干细胞,CD271-vo表皮干细胞G2期增多,CD271-kd表皮干细胞G2期减少。在细胞克隆和CCK-8测细胞增殖的实验中我们也可以得到类似的结果。表皮干细胞的凋亡能力用Hochest/PI染色、TUNEL/DAPI染色和流式细胞术检测,得到跟增殖能力测定实验观点一致的结论。Transwell实验用来检测细胞的迁移能力,CD271-vo表皮干细胞的迁移能力增高而CD271-kd表皮干细胞迁移能力下降。这些结果显示CD271促进了表皮干细胞的增殖能力和迁移能力。(3)CD271可以调节TrkA的表达TrkA是神经生长因子的另一个受体。有研究表明TrkA和CD271表达的比率可以通过神经生长因子影响细胞的增殖和存活。所以我们使用了免疫组织化学染色和Western blot对TrkA在细胞中的表达情况进行了检测。当CD271表达增高时TrkA表达降低,当CD271表达降低时TrkA表达增高。(4)K252a抑制表皮干细胞的TrkA表达后,CD271过表达的表皮干细胞的凋亡能力增加前文已经说到,K252a是抑制TrkA受体的试剂。通过转染慢病毒和加药,我们得到对照组的表皮干细胞(Control eSCs),CD271过表达的表皮干细胞(CD271 eSCs),与K252a共培养的正常表皮干细胞(K252a eSCs)和CD271过表达的表皮干细胞(CD271 eSCs+K252a)。通过流式细胞术检测Control组,CD271 eSCs组,K252a eSCs组和CD271 eSCs+K252a组这四组细胞表达CD271的情况。我们采用流式细胞术测Q2+Q4的比率水平来比较各组之间凋亡能力。我们发现与不加K252a的Control组和CD271 eSCs组相比,加K252a后的两组的Q2+Q4比率均增高,并且CD271过表达同时TrkA抑制的CD271 eSCs+K252a组在各组中凋亡水平的增高是最明显的。与TUNEL染色结果一致。TrkA抑制后即使CD271过表达,也会增加表皮干细胞的凋亡能力。(5)K252a抑制表皮干细胞的TrkA表达后,CD271过表达的表皮干细胞的增殖能力降低K252a是常用的抑制TrkA表达的抑制剂。通过Western blot判断TrkA被抑制的效率,我们的实验中TrkA完全抑制表达,然后再做流式细胞术测定细胞周期。我们发现与不加K252a组相比,加K252a后的两组的G2期均下降,并且CD271过表达同时TrkA抑制的CD271 eSCs+K252a组在各组中是增殖能力降低最明显的。与细胞克隆实验结果一致。TrkA抑制后即使CD271过表达也可以降低表皮干细胞的增殖能力。(6)K252a抑制表皮干细胞的TrkA表达后,CD271过表达的表皮干细胞的迁移能力下降K252a是抑制TrkA受体的试剂。我们Transwell实验测细胞穿膜的细胞数目水平来比较各组之间迁移能力。我们发现与不加K252a的Control组和CD271 eSCs组相比,加K252a后的K252a组和CD271+K252a组的穿过膜的细胞数目显着减少,并且CD271过表达同时TrkA抑制的表皮干细胞组在各组中是穿出细胞数目是最少的。TrkA抑制后可以降低表皮干细胞的迁移能力,并且CD271过表达但TrkA不表达也会引起表皮干细胞的迁移能力下降。(7)抑制TrkA表达后,ERK和Akt信号通路的表达降低为了探索可能参与的信号通路,我们提取了 Control组的表皮干细胞,CD271 eSCs组的表皮干细胞,与K252a共培养的K252a eSCs组表皮干细胞和CD271eSCs+K252a组的表皮干细胞这四组细胞的蛋白。利用Western blot的方法测定了 pERK,pAkt和pJNK的蛋白表达水平变化。与Control组的表皮干细胞相比,pERK和pAkt在CD271 eSCs中表达增多,而且在CD271 eSCs+K252a中表达最少。同时发现表皮干细胞与K252a共培养时,pJNK表达增高,并且与CD271的表达高低无关。2、动物实验(1)CD271在烧伤创面愈合过程中表达增多检测CD271在创面愈合过程中的变化情况,CD271表达在创面愈合的中、后期表达越来越高。把在100°C沸水中浸的铜块放在已经剃除毛发的小鼠背部4秒钟,得到深II度烧伤的创面模型。深II度烧伤会累及残留了表皮干细胞的皮肤的表皮层及真皮层。通过检测表皮干细胞的表面标记物(CK19、β1),我们发现表皮干细胞在创面愈合过程中不断增加,参与创面愈合的过程。我们可以看到创面在第7天和14天时开始愈合,并在第21天时完全愈合。我们在创面愈合过程不同的阶段取材,动态观察创面愈合的过程。我们发现CD271在第7天的时候下降了,但是在第14天和21天时表达增高了。然而CK10在第7天的时候表达降低,而在第14天和21天时表达增高。而免疫组织化学染色显示,CD271和CK19在创面愈合过程中主要表达在增厚的表皮层。β1在基底层也表达增高了。CK19的表达在第7天的时候减少了,在第21天的时候增加。这些结果表明伴随着表皮干细胞的增加,CD271参与创面中、晚期愈合过程。(2)CD271过表达的表皮干细胞可以促进创面愈合通过CD271正常表达和CD271过表达的表皮干细胞干预创面愈合以此判断CD271对创面愈合情况的影响。与注射CD271正常表达的表皮干细胞相比,注射CD271过表达的表皮干细胞的创面在愈合时间和愈合质量上都有提升。这些结果表明CD271过表达的表皮干细胞更加可以促进创面愈合。(3)TrkA可以辅助CD271促进创面的愈合通过腹腔注射K252a(5ug/kg)得到TrkA表达缺失的小鼠,取小鼠皮肤提取蛋白,通过Western blot方法验证得到皮肤中TrkA表达缺失的小鼠模型。制备好全层皮肤缺失的小鼠。愈合模型实验:将小鼠分为给予正常表达表皮干细胞的正常对照组(Control组),给予CD271过表达表皮干细胞的CD271组,预处理过K252a的给予CD271正常表达的表皮干细胞的K252a组和预处理过K252a的给予CD271过表达的表皮干细胞的CD271+K252a组。在术后的当天、3天和5天的时候,Control组和K252a组给予CD271正常表达表皮干细胞,CD271组和CD271+K252a组给予CD271过表达表皮干细胞的处理。在创面的周边皮肤5mm,注射到皮肤的真皮层。从第3天开始,我们可以看到CD271过表达组创面愈合最快,CD271+K252a愈合最慢,但是在TrkA阻滞后的情况下,CD271过表达并不能引起创面的愈合加快。取上述各组创面愈合第7天时的皮肤组织,进行相关的实验得出,CD271+K252a组的创面愈合边缘,集聚着数量最少的处在增殖期的细胞,和最少量的表皮干细胞。结论我们的实验揭示了CD271促进表皮干细胞的分化、增殖和迁移,CD271在深II度烧伤创面愈合过程的中、后期,也就是再上皮化和重构过程中的起着重要作用。目前的发现可以将CD271和表皮干细胞视作很有前途的治疗创面愈合的靶点。CD271在创面的早期降低,而在中、后期增高,表明CD271在创面愈合的中、后期阶段起作用。我们在创面愈合的早期通过表皮干细胞干预创面的愈合进程,得出表皮干细胞可以促进创面愈合,而CD271可以加速表皮干细胞的增殖分化和迁移,以此促进皮肤的创面愈合过程的结论。除此之外,神经生长因子的另一个受体TrkA的表达在CD271过表达的表皮干细胞中表达降低了。之前的研究显示TrkA的作用不明确,可能促进,也可能抑制细胞的生物学特性,也有实验表明TrkA和CD271的比率会影响细胞的生物学行为。因此为了进一步明确TrkA在CD271促进创面愈合的作用,在后续的实验中,我们抑制TrkA的表达后发现即使CD271的增高并不会引起表皮干细胞的促进创面愈合作用。即在CD271的过表达的情况下,TrkA受体的存在可能启动了比率机制引起表皮干细胞的增殖和迁移。本实验还展示了在促进创面愈合过程中,CD271和TrkA可能会通过ERK和Akt信号通路起作用。综上所述,这项实验阐述了 CD271可以通过促进表皮干细胞的增殖分化迁移促进创面愈合;CD271联合TrkA在创面愈合过程中起着重要作用,而且表明了一个潜在的机制——在TrkA存在的条件下,CD271通过促进表皮干细胞的增殖和迁移进而可以促进皮肤创面的愈合。(本文来源于《山东大学》期刊2018-09-25）
表皮干细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
人表皮干细胞(epidermal stem cells,hEpSCs)是皮肤组织特异性干细胞,可以增殖分化为各种表皮细胞,具有维持表皮自我更新、保持正常表皮结构以及促进创面修复等作用。其增殖分化可受到很多因素的调控,比较常见的是一些促进表皮干细胞增殖的因子及抑制细胞增殖的因子。另有研究证实,microRNA可参与调控细胞增殖。连接黏附分子JAM-A敲低后hEpSCs增殖加快,
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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