利用研磨仪快速提取基因组DNA用于PCR

论文摘要

目的:采用机械法破碎细胞壁释放DNA,以达到快速用于PCR的目的。方法:用全自动研磨仪破碎细胞,设计16个频率和时间的组合,探究不同研磨频率和研磨时间的组合对DNA提取的影响,并将每个组合提取的DNA进行PCR。同时,利用研磨仪结合液氮进行研磨,以此来提取完整的基因组DNA。结果:不同的研磨频率和研磨时间的组合提取的DNA经PCR扩增后,均能得到目的条带。综合考虑选出DNA快速提取的最佳组合为研磨频率60 Hz,研磨2 min。直接研磨不能提取出完整的基因组DNA,若利用研磨仪结合液氮进行研磨,则可以快速提取出完整的基因组DNA,研磨条件为40 Hz,研磨2 min。在茂源链霉菌、三角褐指藻和酿酒酵母中利用研磨仪研磨法快速提取的DNA均实现了目的片段的扩增,最后用该方法提取的DNA在茂源链霉菌中实现了4023 bp较大片段的扩增。结论:建立了快速提取DNA用于PCR的方法,该方法在茂源链霉菌、三角褐指藻和酿酒酵母中均取得成功,证明该方法具有普遍的适用性,该方法提取的DNA也适用于较大目的片段的PCR实验。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 引物与PCR反应条件
•   1.3 用于PCR的基因组快速提取
•   1.4 全基因组的快速提取
•   1.5 提取条件的优化
• 2 结果
•   2.1 最佳DNA提取方法的确定
•   2.2 全基因组的提取
•   2.3 用于PCR的基因组快速提取方法在不同物种中的验证
•     2.3.1 在茂源链霉菌中的验证
•     2.3.2 在三角褐指藻中的验证
•     2.3.3 在酿酒酵母中的验证
•   2.4 用快速提取的基因组扩增较大的目的片段
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 胡荣飞,陈璐瑶,张小妮,吴均坚,何文锦,陈由强,薛婷

关键词: 研磨仪研磨,快速提取,茂源链霉菌,三角褐指藻,酿酒酵母

来源: 生物技术通讯 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 福建师范大学生命科学学院海洋生物医药与制品产业化开发技术公共服务平台,福建师范大学南方海洋研究院福建省微藻种质改良工程技术研究中心

基金: 国家糖料产业技术体系（CARS-170501）

分类号: Q789

页码: 668-673

总页数: 6

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