导读:本文包含了猪瘟囊膜糖蛋白基因论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人工饲料育,家蚕,杆状病毒表达系统,猪瘟病毒,囊膜糖蛋白E2基因
猪瘟囊膜糖蛋白基因论文文献综述
郑小坚,缪竞诚,曹广力,朱江,顾全丰[1]（2005）在《人工饲料育家蚕/杆状病毒表达猪瘟病毒囊膜糖蛋白E_2基因》一文中研究指出以重组病毒Bm-BacPAK6-E2接种全龄人工饲料育及5龄桑叶育家蚕皓月×菁松幼虫、蛹,观察重组病毒的感染发病情况,调查病蚕、蛹的采血量并进行SDS-PAGE分析.结果表明,全龄人工饲料育家蚕接种重组病毒的成功率、采血量等指标均与5龄桑叶育相近,SDS-PAGE蛋白质电泳在家蚕幼虫、蛹血淋巴中均检测到1条与目的蛋白理论分子量(63 kD)相符的特异性蛋白条带,初步认为是重组病毒Bm-BacPAK6-E2的融合表达产物.(本文来源于《苏州大学学报(自然科学版)》期刊2005年02期）
李东芳[2]（2005）在《农杆菌介导猪瘟囊膜糖蛋白基因E2转化马铃薯的研究》一文中研究指出猪瘟是对养猪业危害严重的一种A类传染病,其致病源是猪瘟病毒(CSFV),E2囊膜糖蛋白是CSFV的主要保护抗原蛋白,应用真核细胞表达系统表达E2蛋白免疫动物,对强毒的攻击有很好的保护作用。 实验将马铃薯茎块特异表达启动子—Patatin启动子与猪瘟病毒囊膜糖蛋白基因E2连接起来,并克隆到植物核转化载体pBI121上,构建猪瘟病毒E2基因的马铃薯特异表达载体pBIPE2,此载体含有:抗性基因(Kan),茎块特异表达启动子(Patatin Promoter)以及目的基因(猪瘟病毒囊膜糖蛋白基因E2)。将带有目的基因的载体质粒pBIPE2导入农杆菌,用其浸染马铃薯叶片,诱导再生后,获得抗Kan再生植株。PCR检测,Southern杂交结果表明外源基因已经整合到再生植株基因组中。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2005-06-01）
王海震,李学仁,周斌,陈溥言[3]（2004）在《猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因A/D区的构建及原核表达研究》一文中研究指出利用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增出猪瘟病毒石门株(CSFV Shimen strain)囊膜糖蛋白E2全基因,再以E2基因为模板扩增其中适于在E.coli中表达且抗原性较好的基因片段(E2蛋白A/D抗原区基因序列),将扩增的两片段串联插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建成重组质粒pET-2e,将pET-2e转化受体菌BL21(DE3),经IPTG诱导,重组转化菌可高效表达目的基因,表达量平均可达菌体蛋白总量的36.6%。免疫印迹表明,所表达的蛋白是CSFV特异的。实验结果表明,克隆在硫氧还蛋白(Thioredoxin protein,TrxA)下游的目的基因与TrxA获得了高效融合表达,并且目的蛋白具有免疫学反应活性,为以CSFV重组蛋白作为抗原建立检测CSF血清抗体水平方法的建立奠定了基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集（下册）》期刊2004-09-01）
徐学清[4]（2004）在《猪瘟病毒E2囊膜糖蛋白主要抗原区基因在巴斯德毕赤酵母中的表达和初步应用》一文中研究指出猪瘟病毒是对养猪业危害极大的病原之一，对猪瘟抗体水平进行正确监测是防治猪瘟的重要前提，本研究围绕检测猪瘟抗体水平试剂盒的研制开展了如下实验： 1．设计两对引物扩增E2蛋白的A／D抗原区和B／C抗原区基因，并将扩增出的373bp和261bp目的片段分别插入毕赤酵母表达载体p PICZ_αC中，构建成重组质粒pPICZ_α-AD和p PICZ_α-BC，并筛选得到含A／D基因的高拷贝转化子5株，含B／C基因的高拷贝转化子3株，经甲醇诱导表达、SDS—PAGE、间接ELISA和Western blot试验，结果表明：两个基因片段都能被分泌表达，且都含有具有良好反应原性，但A／D区基因表达产物E2AD蛋白结合抗体的能力比B／C区基因表达产物E2BC蛋白高。 2．研究了培养条件与表达产量的关系，确定高拷贝重组酵母表达E2蛋白的最佳条件为：在BMGY中培养至菌体OD_(600)值达3～3.5时，将菌体转入相当于4倍体积BMGY、pH6.0的BMMY培养基中培养72h，每24h加入甲醇使终浓度达0.5％～1.0％。在最佳条件下E2AD蛋白的表达量可达275.38ug／mL，是E2BC蛋白的22.39倍，是A／D区基因原核表达产物E2HA蛋白的35.53％；通过比较不同温度下保存E2AD蛋白的降解率得出酵母培养物上清应保存于-20℃。 3．以E2AD蛋白作为包被抗原初步建立了检测猪瘟抗体水平的间接ELISA方法，并对该方法的实验步骤进行了优化，优化后的步骤是：0.688μg／100uL抗原4℃过夜包被后，用1％BSA封闭3h，再与1％BSA稀释的血清作用45min，接着与酶标二抗在37℃作用30min或室温下作用45min，然后用TMB在37℃作用15min或室温下作用20min，最后用0.15％HF终止反应，用此优化方法检测了30份来自发病猪场的待检猪瘟阳性血清样品，并将其与以E2BC蛋白及以E2HA蛋白作为包被抗原的两种间接ELISA方法和兰州兽医所的间接血凝试剂盒方法相比较，发现间接ELISA方法比间接血凝试剂盒方法敏感，以叁种不同蛋白建立的间接ELISA方法的敏感性从高到低依次为：E2HA＞E2AD＞E2BC。(本文来源于《南京农业大学》期刊2004-06-01）
苏小运[5]（2003）在《猪瘟兔化弱毒编码E2囊膜糖蛋白A/D抗原区基因的原核表达和重组蛋白的初步应用》一文中研究指出本文利用不同大肠杆菌表达系统(所用表达载体分别为：pThioHisB和pET-32a(+))表达了猪瘟兔化弱毒编码E2蛋白A／D抗原区的基因，并对其表达特性进行了比较。选取含pET-E2HA重组质粒的BL21(DE3)，即BL21E2HA大量表达重组蛋白，通过盐酸胍溶解，通过His Bind柱纯化了重组蛋白，定量并以其为包被抗原建立了间接ELISA方法。利用此方法测定了约150份囊素与猪瘟兔化弱毒疫苗共同免疫猪血清的猪瘟抗体水平；比较了此方法和间接血凝试剂盒测定猪瘟抗体水平的灵敏度。主要实验内容包括： 1．构建了两株重组质粒：pTH-E2和pET-E2，所用表达系统分别为pThioHisB和pET-32a(+)，优化了表达条件并比较了两种质粒的表达特性，发现pET系统在表达此段基因时产量明显优于pThioHisB系统； 2．选择pET-E2进行后继工作：将3个串联的HA(人血凝素表位)基因插入到pET-E2重组质粒的BamHⅠ和HindⅢ位点之间，得到pET-E2HA重组质粒，含有此质粒的BL21(DE3)命名为BL21E2HA，并将其成功的表达； 3．利用BL21E2HA大量表达重组蛋白，将细菌裂解，超声波破碎、离心分离包涵体，盐酸胍溶解后过His Bind柱，纯化了重组蛋白； 4．利用BSA制备标准曲线，并对处于不可溶状态的纯化后重组蛋白进行了定量。在此基础上，用其作包被抗原建立了间接ELISA方法；利用此间接ELISA方法，测定了约150份囊素与猪瘟兔化弱毒疫苗共同免疫猪血清的猪瘟抗体水平，发现经囊素共同免疫后，猪瘟抗体水平有明显提高，这从另一方面证明，该方法具有一定的实用价值，可以进行猪瘟抗体水平的测定； 5．比较了间接ELISA方法和现有的间接血凝试剂盒测定猪瘟抗体水平时的灵敏度，发现该方法明显优于后者。 6．构建了一个用以检测在细胞培养上猪瘟病毒粒子存在的重组质粒。(本文来源于《南京农业大学》期刊2003-05-01）
郑小坚[6]（2003）在《猪瘟病毒囊膜糖蛋白E_2基因融合表达载体的构建及初步表达》一文中研究指出猪瘟病毒(CSFV)囊膜糖蛋白E2是CSFV的主要保护性抗原，可诱导产生中和抗体和保护性免疫。本研究将CSFV F114株的E_2基因克隆进GST融合原核表达载体pGEX-4T-1的EcoRI和BamHI位点，获得重组原核表达载体pGEX-4T-E_2。以大肠杆菌BL21为宿主菌进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE结果显示，在约63kD处有一特异性条带，其分子量与由目的基因所推导的蛋白质分子量相符，推测为E_2与GST融合表达基因产物。将E_2基因克隆进杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californiamultiple nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)转移载体pAcSecG2T的EcoRI和BamHI位点，获得了带有核型多角体病毒囊膜蛋白gp67信号肽序列与GST-E_2融合表达杆状病毒重组转移载体pAcSecG2T-E_2。在脂质体的介导下，pAcSecG2T-E_2载体与线性化家蚕杆状病毒Bm-BacPAK6共转染家蚕培养细胞Bm-N，空斑筛选分离纯化重组病毒(Bm-BacPAK6-E_2)。PCR检测表明所分离的重组病毒含有目的片段E_2基因。SDS-PAGE检测表明，在感染重组病毒后，无论是家蚕细胞，还是家蚕幼虫、蛹的血淋巴中都可以检测到一条分子量约为63kD的特异性条带，推测为外源基因的表达产物。本研究在原核细胞与家蚕杆状病毒表达系统中均成功地融合表达了CSFV F114E_2基因，为进一步纯化表达的E_2抗原蛋白和CSFV诊断试剂的开发应用奠定了基础，为研制CSFV新型亚单位疫苗进行了有益的探索。(本文来源于《苏州大学》期刊2003-04-01）
郑小坚,沈卫德[7]（2003）在《猪瘟病毒及其囊膜糖蛋白E_2基因的研究进展》一文中研究指出简要阐述近年来猪瘟病毒及其囊膜糖蛋白E2基因在分子生物学、分子免疫学和基因工程疫苗研究领域的最新研究进展。(本文来源于《常熟高专学报》期刊2003年02期）
李红卫,刘湘涛,李小兵,韩雪清,殷震[8]（1999）在《我国猪瘟病毒兔化弱毒株囊膜糖蛋白E0基因的克隆及序列测定》一文中研究指出采用异硫氰酸胍一步法从４８０代猪瘟病毒兔化弱毒株（ＨＣＬＶ）脾毒中提取总ＲＮＡ，以该ＲＮＡ为模板，进行反转录，然后采用套式ＰＣＲ扩增出ＨＣＬＶ的囊膜糖蛋白Ｅ０基因，琼脂糖凝胶电泳表明其大小与预计相符。将扩增出的Ｅ０基因克隆到ｐＧＥＭＴ载体中，用自动序列分析仪对其进行序列测定。将测得的序列及推导的氨基酸序列与国外测得的Ｃ株相应序列进行比较，结果发现，它们之间核苷酸序列同源性为９９．０８％，氨基酸序列同源性为９８．４２％。(本文来源于《中国病毒学》期刊1999年02期）
金扩世,李红卫,章金刚,王新平,涂长春[9]（1997）在《猪瘟兔化弱毒囊膜糖蛋白EI基因的扩增与克隆》一文中研究指出本试验直接从细胞培养液中提取猪瘟兔化弱毒（ＨＣＬＶ）ＲＮＡ，并根据猪瘟病毒（ＨＣＶ）Ａｌｆｏｒｔ株和Ｂｒｅｓｃｉａ株的核苷酸序列，将ＥＩ基因分两段，设计并合成了４条引物。采用反转录－多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），成功地扩增出了ＨＣＬＶ保护性囊膜糖蛋白ＥＩ基因。以ｐＧＥＭ－Ｔ和ｐＵＣ１９为载体，将ＥＩ基因的两个片段分别进行克隆并转化到大肠杆菌ＪＭ１０１。经过分析鉴定，证明所扩增的片段为ＨＣＬＶＥＩ基因(本文来源于《中国畜禽传染病》期刊1997年02期）
金扩世,涂长春,殷震[10]（1996）在《猪瘟病毒保护性囊膜糖蛋白E1基因的研究进展》一文中研究指出猪瘟病毒保护性囊膜糖蛋白Ｅ１基因的研究进展金扩世，涂长春，殷震（中国人民解放军农牧大学研究所，长春１３００６２）猪瘟（ＨｏｇＣｈｏｌｅｒａｏｒＳｗｉｎｅＦｅｖｅｒ，ＨＣ／ＳＦ）是由猪瘟病毒（ＨＣＶ）引起的猪的一种严重的传染病，也是一种古老的世界范围内...(本文来源于《病毒学报》期刊1996年03期）
猪瘟囊膜糖蛋白基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
猪瘟是对养猪业危害严重的一种A类传染病,其致病源是猪瘟病毒(CSFV),E2囊膜糖蛋白是CSFV的主要保护抗原蛋白,应用真核细胞表达系统表达E2蛋白免疫动物,对强毒的攻击有很好的保护作用。 实验将马铃薯茎块特异表达启动子—Patatin启动子与猪瘟病毒囊膜糖蛋白基因E2连接起来,并克隆到植物核转化载体pBI121上,构建猪瘟病毒E2基因的马铃薯特异表达载体pBIPE2,此载体含有:抗性基因(Kan),茎块特异表达启动子(Patatin Promoter)以及目的基因(猪瘟病毒囊膜糖蛋白基因E2)。将带有目的基因的载体质粒pBIPE2导入农杆菌,用其浸染马铃薯叶片,诱导再生后,获得抗Kan再生植株。PCR检测,Southern杂交结果表明外源基因已经整合到再生植株基因组中。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
猪瘟囊膜糖蛋白基因论文参考文献
[1].郑小坚,缪竞诚,曹广力,朱江,顾全丰.人工饲料育家蚕/杆状病毒表达猪瘟病毒囊膜糖蛋白E_2基因[J].苏州大学学报(自然科学版).2005
[2].李东芳.农杆菌介导猪瘟囊膜糖蛋白基因E2转化马铃薯的研究[D].中国农业科学院.2005
[3].王海震,李学仁,周斌,陈溥言.猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因A/D区的构建及原核表达研究[C].中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集（下册）.2004
[4].徐学清.猪瘟病毒E2囊膜糖蛋白主要抗原区基因在巴斯德毕赤酵母中的表达和初步应用[D].南京农业大学.2004
[5].苏小运.猪瘟兔化弱毒编码E2囊膜糖蛋白A/D抗原区基因的原核表达和重组蛋白的初步应用[D].南京农业大学.2003
[6].郑小坚.猪瘟病毒囊膜糖蛋白E_2基因融合表达载体的构建及初步表达[D].苏州大学.2003
[7].郑小坚,沈卫德.猪瘟病毒及其囊膜糖蛋白E_2基因的研究进展[J].常熟高专学报.2003
[8].李红卫,刘湘涛,李小兵,韩雪清,殷震.我国猪瘟病毒兔化弱毒株囊膜糖蛋白E0基因的克隆及序列测定[J].中国病毒学.1999
[9].金扩世,李红卫,章金刚,王新平,涂长春.猪瘟兔化弱毒囊膜糖蛋白EI基因的扩增与克隆[J].中国畜禽传染病.1997
[10].金扩世,涂长春,殷震.猪瘟病毒保护性囊膜糖蛋白E1基因的研究进展[J].病毒学报.1996