导读:本文包含了免疫优势表位论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,抗原,优势,杆菌,免疫,细胞,流感。
免疫优势表位论文文献综述
聂恺阳,吴云燕,易琳,吴祖雄,陈金顶[1]（2019）在《重组优势T、B细胞表位的猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达及免疫原性研究》一文中研究指出为探究猪圆环病毒2型(PCV2)优势T、B细胞表位对Cap蛋白免疫原性的影响,本研究将前期研究筛选到的PCV2 Rep和Cap蛋白中的T、B细胞表位,分别构建pET-rB-Cap、pET-rT-Cap和pET-rT-B-Cap重组质粒,并转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达后,采用SDS-PAGE和western blot检测3种重组蛋白:rB-Cap、rT-Cap和rT-B-Cap。结果显示,上述3种重组蛋白均高效表达且具有良好的反应原性。将70只4周龄～6周龄的BALB/c雌鼠随机分为7组,分别免疫不同的重组蛋白或者全病毒灭活疫苗,并对其产生的免疫原性进行检测。结果显示,各实验组小鼠的血清抗体水平均显着高于PBS组(p<0.01),其中rT-B-Cap组小鼠抗体水平显着高于PCV2全病毒灭活疫苗组和rCap组(p<0.01)。综上所述,PCV2 Cap蛋白同时串联T、B优势抗原表位时的免疫原性显着提高。本研究为PCV2多表位疫苗及基于Cap蛋白的亚单位疫苗的研究提供了新的途径。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年09期）
冯健,李运明,刘毓刚,王艳艳,胡宗海[2]（2019）在《空肠弯曲菌PEB1的B细胞免疫优势表位的鉴定及保护效果的评价》一文中研究指出目的利用表位预测分析技术筛选空肠弯曲菌(C. jejuni)黏附蛋白PEB1的B细胞免疫优势表位,并评价其免疫保护效果。方法采用氨基酸步移策略,合成18 mer氨基酸重迭肽段。ELISA系统筛选鉴定PEB1的B细胞免疫优势表位。采用KLH偶联免疫优势表位肽免疫BALB/c小鼠,ELISA测定优势表位肽诱导的IgG抗体效价。末次免疫后7 d,经口灌胃感染C. jejuni 11168,在感染后的28 d,定量检测感染攻毒后各组小鼠的空肠组织C. jejuni的定植量以及q RT-PCR技术检测炎性细胞因子TNF-α的相对表达水平。通过HL-60细胞调理吞噬实验测定表位肽诱导产生抗体所介导的调理吞噬杀伤功能。免疫B细胞缺失小鼠,感染攻毒后检测肠组织C. jejuni的定植量。结果 PEB155-72aa、PEB197-114aa、PEB1211-228aa均能与PEB1抗血清产生强烈IgG抗体反应。抗PEB155-72aa、抗PEB197-114aa和PEB1211-228aa血清均能与重组的PEB1产生较强的抗原抗体反应。与CFA/IFA组相比,免疫PEB155-72aa、PEB197-114aa、PEB1211-228aa后血清中的抗体能够显着增强抗体介导的HL-60细胞的调理吞噬作用(P <0. 01),均显着降低C. jejuni在空肠组织中的定植量,同时也均显着降低炎性细胞因子TNF-α的相对表达水平(P <0. 01)。PEB155-72aa-KLH+CFA/IFA组,PEB197-114aa-KLH+CFA/IFA组,PEB1211-228aa-KLH+CFA/IFA组中,免疫B cell Knock out(B细胞缺失)小鼠攻毒后,C. jejuni在空肠组织中的定植量均显着高于WT(野生型)小鼠的定植量(P <0. 01)。结论成功鉴定出3个具有良好免疫原性和免疫保护作用的优势B细胞抗原表位(PEB155-72aa、PEB197-114aa、PEB1211-228aa),可用于C. jejuni疫苗的后续开发研究。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2019年04期）
卿蕊,向晴可,刘众齐,肖非,阳帆[3]（2018）在《幽门螺杆菌外膜蛋白Omp18免疫优势表位的预测与鉴定》一文中研究指出目的:分析预测幽门螺杆菌(Hp)外膜蛋白Omp18的免疫优势表位,并进一步验证确定其免疫优势片段的免疫原性。方法:通过生物信息学软件DNAStar分析预测幽门螺杆菌外膜蛋白Omp18的潜在优势表位,并由北京赛百盛基因技术有限公司合成相应的优势片段;片段通过口服免疫的方式免疫接种雌性BALB/c小鼠,每周1次共免疫4次。末次免疫10 d后处死小鼠,取血清检测IgG、IgA水平,取肠道灌洗液检测sIgA水平;取小鼠脾细胞ELISA法检测细胞上清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6水平,并通过MTT比色法检测脾细胞增殖情况;末次免疫10 d后Hp标准株攻击小鼠2次,4周后处死小鼠,取胃组织进行快速尿素酶实验,并计算每组的感染率。结果:ELISA法检测各片段免疫小鼠血清IgG、IgA以及肠道sIgA水平均高于对照组,且差异有显着统计学意义(P<0. 05);各免疫组脾细胞上清INF-γ、IL-2水平均显着高于对照组(P<0. 05),而IL-4、IL-6水平较对照组则差异无显着统计学意义(P>0. 05);MTT比色法结果显示各片段刺激后小鼠淋巴细胞均有显着增殖(P<0. 05);快速尿素酶实验结果提示各片段免疫后均能显着减少小鼠胃组织中Hp的感染(P<0. 05)。结论:通过生物信息学软件分析预测的外膜蛋白Omp18优势片段均具有较好的免疫原性,且对Hp感染有一定的保护作用。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2018年12期）
吴中秀[4]（2018）在《不可分型流感嗜血杆菌Hap黏附素T-B优势抗原表位及其免疫原性研究》一文中研究指出目的:流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)为寄生于人鼻咽部及上呼吸道的革兰阴性小杆菌,是婴幼儿脑膜炎、肺炎和急性中耳炎等感染性疾病的主要病原体。根据是否有荚膜,流感嗜血杆菌可分为荚膜型和无荚膜型。荚膜型流感嗜血杆菌可用荚膜抗体分为6个血清型,称为可分型流感嗜血杆菌(typeable H.influenzae,THi)。无荚膜型流感嗜血杆菌无法用荚膜多糖抗体分型,称为不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable H.influenzae,NTHi)。接种流感嗜血杆菌荚膜多糖疫苗可有效保护机体免受THi感染,但对无荚膜NTHi无免疫保护作用。更为重要的是,由于荚膜多糖疫苗的免疫选择作用,近年来NTHi逐渐替代THi成为临床优势流行的流感嗜血杆菌菌型,不仅感染率逐年增高,且耐药率均不断增加。接种疫苗是预防和控制NTHi菌株流行并降低其感染率的重要措施,但迄今国内外尚无NTHi疫苗产品。有文献报道,Hap黏附素不仅是NTHi和THi均可表达、位于外膜的黏附因子,同时还可诱导机体产生具有免疫保护作用的黏膜S-IgA和血清IgG。抗原表位(epitope)是抗原分子中决定免疫原性短肽片段,基于抗原表位肽的多抗原肽(multiple antigenic peptides,MAP)疫苗是当前新型基因工程疫苗研究主要方向之一。了解NTHi临床菌株中Hap黏附素编码基因(hap)分布及其序列保守性、筛选并鉴定Hap黏附素优势T和B细胞(T-B)联合抗原表位及其免疫原性,可为研发NTHi的MAP疫苗奠定基础。实验方法:采用生物信息学软件分析NTHi菌株hap基因序列保守性并预测其T-B联合抗原表位。采用PCR扩增NTHi临床菌株hap基因5'端156 bp和3'端855 bp片段(hap-5'-156和hap-3'-855)后测序。构建Hap黏附素N端52 aa和C端285 aa片段(Hap-N52和Hap-C285)7个T-B联合抗原表位肽噬菌体展示系统。采用Western Blot和ELISA分别检测重组噬菌体PⅢ蛋白(rPⅢ)展示的T-B联合抗原表位肽抗原性和免疫反应性。结果:Hap基因产物为NTHi膜表面蛋白。不同NTHi菌株hap基因5'端156pb和3'端855 bp序列相对保守,中间区变异较大。56株NTHi临床菌株均能检出hap-5'-156和hap-3'-855片段,其核苷酸和氨基酸序列相似性为92.3%～100%。Hap-N52片段中 Hap-N5-24 以及 Hap-C285 片段中 Hap-C4-27、Hap-C114-129、Hap-C150-173、Hap-C200-227和Hap-C241-267为评分较高且变异较小的预测T-B联合抗原表位。Western Blot 和 ELISA 检测结果显示,rPIII 展示的 Hap-C4-27 或 Hap-C150-173 表位肽能与NTHi抗血清产生较强的杂交条带,96.9%(63/65)和92.3%(60/65)NTHi感染患儿血清标本中Hap-C4-27或Hap-C150-173表位肽IgG抗体阳性。结论:hap基因在NTHi临床菌株中分布广泛且5'端156 bp和3'端855 bp序列保守。Hap-C4-27和Hap-C150-173为Hap优势T-B联合抗原表位,可作为NTHi多抗原肽疫苗的候选表位。(本文来源于《浙江大学》期刊2018-03-01）
张颖颖,王荣山,陈旭,金洪星,严杰[5]（2017）在《不可分型流感嗜血杆菌OMP6优势T-B联合抗原表位及其免疫原性研究》一文中研究指出目的了解无荚膜不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)临床菌株P6外膜蛋白(OMP6)编码基因(omp6)分布及其序列保守性,筛选并鉴定OMP6序列中优势T和B细胞(T-B)联合抗原表位及其免疫原性。方法采用PCR扩增NTHi临床菌株全长omp6基因,T-A克隆后测序。采用生物信息学软件分析OMP6序列保守性与膜定位并预测其T-B联合抗原表位。采用噬菌体展示联合免疫印迹法和ELISA分别检测重组噬菌体PIII蛋白(rPIII)展示的OMP6中T-B联合抗原表位肽免疫原性和免疫反应性。结果 35株NTHi临床菌株均能检出omp6基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.3%~100%和99.3%~100%。OMP6为外膜表面蛋白,具有OMP6-2-25、OMP6-61-86和OMP6-98-126叁个预测T-B联合抗原表位。Western Blot和ELISA结果显示,OMP6-2-25能与NTHi抗血清产生较强的杂交条带,96.9%(59/62)、69.4%(43/62)和74.2%(46/62)NTHi感染患儿血清标本OMP6-2-25、OMP6-61-86和OMP6-98-126抗原表位肽抗体阳性。结论 OMP6是分布广泛且序列保守的NTHi跨膜蛋白,OMP6-2-25为OMP6优势T-B联合抗原表位,可作为NTHi多抗原肽疫苗的候选表位。(本文来源于《中国人兽共患病学报》期刊2017年12期）
张锦鹏,张冠文,宣国云,孟强,张哲[6]（2017）在《汉滩病毒包膜糖蛋白嵌合DNA疫苗的细胞免疫评价及其优势表位的筛选》一文中研究指出目的:筛选Gn和Gc抗原优势表位,为汉滩病毒疫苗研究提供方向.方法:通过构建汉坦病毒包膜糖蛋白Gn与Gc嵌合溶酶体相关膜蛋白的DNA疫苗pVAX-LAMP/Gn,pVAX-LAMP/Gc,利用酶联免疫斑点实验(ELISpot)长期评估了BALB/c小鼠体内的细胞免疫应答.结果:在刺激T淋巴细胞的短效与长效免疫中,pVAX-LAMP/Gc组的效应优于其他组,并筛选出优势抗原表位.结论:目前许多新型汉滩病毒疫苗研究缺少细胞免疫应答评价和记忆免疫应答评价.筛选出的Gn和Gc的抗原优势表位,可以为新型汉滩病毒疫苗的研制奠定良好的基础.(本文来源于《转化医学电子杂志》期刊2017年10期）
李滨[7]（2016）在《佐剂通过诱导差异性免疫优势表位应答影响疫苗效果》一文中研究指出研究背景:疫苗接种作为抗细菌,病毒及其它病原体感染的重要手段,现已广泛应用。尽管新型疫苗不断被设计开发,然而广泛应用于人体的疫苗尚未取得突破性进展。其中重要的原因是受限于疫苗佐剂的研发。在过去几十年,几种新型的佐剂被研制出来,但其临床安全性及效果尚未证实。目前除铝佐剂及MF59之外,尚未有第叁种可有效用于人体的疫苗佐剂。很多疫苗在经历了一系列安全评价,动物实验后,却最终在二期(本文来源于《第十一届全国免疫学学术大会分会场交流报告集》期刊2016-11-04）
李婷婷,修冰水,郭兴道,张癸荣[8]（2016）在《人血白蛋白免疫优势抗原表位的筛选及鉴定》一文中研究指出目的筛选人血白蛋白(HSA)免疫优势抗原表位,为建立一种高特异性HSA制品快速检测方法提供基础。方法采用生物信息学方法比较人与其他物种(猪、马、牛、羊)白蛋白基因序列并预测其抗原表位,获得HSA免疫优势抗原表位;利用大肠杆菌优势密码子获得相应基因,插入PGEX-4T-2载体克隆表达得到重组HSA表位抗原;间接ELISA评价上述重组表位的特异性。结果筛选3个HSA抗原表位,分别位于H1〔126~162氨基酸(aa)〕、H2(314~355aa)、H3(373~424aa),获得相应基因片段;得到重组抗原的相对分子质量(Mr)分别为3.01×104、3.06×104和3.17×104;抗原活性检测显示373~424aa序列表位具有较高活性,其酶标抗体竞争抑制反应的IC50为1.635 mg/L,高于酶标HSA抗体。结论实验获得了特异性HSA免疫优势抗原表位,对研制一种快速、特异的HSA检测试剂具有重大意义。(本文来源于《国际药学研究杂志》期刊2016年05期）
吴云燕[9]（2016）在《PCV2优势T、B细胞表位与截短cap基因串联的构建、原核表达及免疫原性研究》一文中研究指出猪圆环病毒2型(PCV2)是目前全球养猪业具有重要经济意义的重要病毒性病原体之一,现将与其感染相关的疾病统称为猪圆环病毒相关病(PCVAD),其中危害最严重的是仔猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)。PCV2主要侵害机体的免疫系统,造成严重的免疫抑制,从而容易发生其他致病性微生物的继发或混合感染,严重危害猪群健康。自2006年猪圆环病毒2型疫苗问世以来,疫苗的免疫接种成为防治猪圆环病毒病的主要手段。目前四种商品化疫苗已在世界范围内广泛使用,其中两种都是以PCV2 Cap蛋白作为免疫原,实验和现场研究已经清晰地表明PCV2疫苗具有降低病毒血症、消除PCVAD、增加生长性能等方面的功效,但是在免疫接种的猪群中仍然会发生PCVAD,这意味着现有商品化疫苗的免疫接种无法完全阻止PCV2感染或传播;此外,还有全病毒培养获得的病毒滴度低、灭活不彻底导致毒力返强、价格昂贵和保护率差等可能性。因此,开发新的安全有效的疫苗对控制PCV2感染是十分必要的。PCV2 ORF2编码的Cap蛋白是病毒主要的结构蛋白并且具有型特异性表位,一直以来也是PCV2重组疫苗的靶向物,但是针对其他因素对Cap蛋白免疫原性影响的研究却很少。因此,本研究致力于寻找一种能增强Cap蛋白免疫原性的方法以期提高Cap蛋白亚单位疫苗的免疫效果。为了在原核表达系统表达PCV2截短Cap蛋白与T、B细胞表位的串联重组蛋白,并评价其免疫原性,我们根据之前的报道分别筛选了Rep和Cap蛋白上的T、B细胞表位后送去合成基因,然后将截短cap基因和合成的表位基因依次插入到pET-32a载体,共获得叁种重组质粒:pET-B-cap、pET-T-cap和pET-T-B-cap。依次PCR、双酶切和DNA测序鉴定,结果证明成功构建叁种重组表达质粒,之后转化E.coli BL21(DE3)感受态,在IPTG诱导下表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析验证,大小分别约为49、46和54 kDa,主要以包涵体形式存在,并具有较好的反应原性。分别用获得的rB-Cap、rT-Cap和rT-B-Cap蛋白制备的疫苗免疫SPF级BALB/c小鼠,间接ELISA抗体检测结果显示以上疫苗都能激发较高水平的Cap蛋白抗体,其中以rT-B-Cap组的抗体水平最高,且显着高于r Cap和商品化全病毒灭活疫苗组,表明同时串联T、B优势抗原表位的Cap蛋白免疫原性得到提高。优势表位串联Cap蛋白较好的抗原性凸显了以Cap蛋白为基础的疫苗在防治PCV2病毒感染方面的显着效果,并且也可能提供了一种用于提高基于表位的疫苗抗原性的方法。(本文来源于《华南农业大学》期刊2016-06-01）
刘苏东[10]（2016）在《结核分枝杆菌免疫优势CTL和Th1表位的筛选与鉴定》一文中研究指出研究背景结核病(Tuberculosis, TB)是因人体感染结核分枝杆菌(Mycobacterial tuberculosis, MTB)而发生的慢性传染病,主要病灶是肺部,称为肺结核(Pulmonary tuberculosis, PTB)。近年来,随着人口流动的增加、HIV与MTB伴发感染、耐多药(multidrug-resistant)和广谱耐药(extensively drug-resistant)菌株的流行,使全球结核病死灰复燃,呈现卷土重来之势。全球1/3的人口感染了MTB,2014年新发结核病例960万、因结核病死亡150万。我国是全球第二大结核病高负担国,45%的人口感染了MTB,每年新发结核病例100万、因结核病死亡5万,相当于每10分钟就有1人死于结核!结核病严重危害人类健康,已成为重大的公共卫生问题和社会问题!快速、灵敏的诊断方法缺乏,造成结核病诊断延误或误诊。尽管抗生素的发明曾一度控制结核病的流行,但抗生素的用药疗程长达半年乃至一年,副作用明显,而且越来越多的结核病患者对多种抗生素产生了耐药性。据WHO统计,全球3.3%的新发病例和20%的复发病例为耐多药结核,其中9.7%为广谱耐药结核；我国是全球耐多药结核负担最重的国家之一,每年新发耐多药结核患者12万、广谱耐药结核患者近1万；前者治愈率不足50%,即使治愈后,人体很难完全清除体内的MTB,在自身免疫力降低时,容易复发；后者则基本无药可治。因此,疫苗仍是控制结核病流行的最佳策略。目前临床上唯一使用的卡介苗(BCG)在数十年的反复传代和保存中,已经缺失了一些毒力因子和免疫保护作用基因,以及环境分枝杆菌的干扰,使得BCG的保护效果更差,仅对预防儿童重症结核有效,对成人肺结核无显着的保护作用。因此,研制新型诊断试剂和疫苗势在必行!结核杆菌属于胞内寄生菌,体液免疫对其作用有限,在抗结核免疫反应中,作用最关键的是特异性T细胞,包括CD4+Th1和CD8+T细胞。活化的CD4+Th1释放IFN-γ、TNF-α等细胞因子,激活和趋化巨噬细胞,提高其对胞内结核菌的杀灭和抗原递呈能力。CD8+T细胞则发挥其细胞毒作用,特异识别和杀伤靶细胞,暴露并清除胞内寄生的结核杆菌。特异CD4+Th1和CD8-T细胞无法识别完整的结核抗原,仅识别由MHC分子递呈的抗原表位。因此,表位才是结核蛋白抗原性的基础。确定T细胞表位,对于表位疫苗设计、结核诊断试剂开发具有十分重要的意义。T细胞表位(epitope)是抗原中被T细胞表面受体(T cell receptor, TCR)特异性识别的抗原部分,又称为抗原决定簇。T细胞表位与MHC分子结合,通过与TCR相互作用,活化T细胞。目前,已知的MTB特异性T细胞表位约有800个,分布在170个不同的抗原蛋白；其中65%的已知表位集中来自30个最着名的MTB抗原,如ESAT-6、CFP-10和PPE家族蛋白,对于其它MTB抗原的表位,目前所知甚少。集中的抗原谱导致过窄的免疫应答,容易引起免疫耐受,不利于机体有效地抗结核。从MTB基因组选择抗原,筛选和鉴定抗原表位,有助于“拓宽”现有表位的免疫保护效应。T细胞表位是通过MHC分子提呈的,即具有MHC限制性。大量已知的MTB抗原表位是欧美白种人群携带MHC分子(如HLA-A*0201)递呈的；结核感染最严重的地区是非洲和东南亚等欠发达的国家和地区,适用于这些地区人群的T细胞表位严重缺乏。中国是世界上第二大结核高负担国,筛选和鉴定中国人群高频HLA提呈的MTB表位,有助于促进具有我国自主知识产权的抗结核疫苗和诊断试剂的研发。近年来,基于肽与MHC分子结合亲和力的表位预测,成为了表位筛选和鉴定的热点。目前,大部分的表位研究都是通过生物信息学预测获得高亲和力的候选表位,然后人工合成肽,逐一验证。传统的亲和力验证实验是一个费时费力的过程,利用紫外诱导肽置换技术,能快速、准确、大规模地验证表位与MHC分子的亲和力,更高效地找到免疫优势表位。本课题组从MTB全基因组选择目标抗原,运用生物信息学软件预测联合紫外诱导肽置换实验验证,初步筛选出与中国人群高频HLA分子高亲和结核的候选T细胞表位；进而利用临床样本,验证其抗结核免疫活性；并且利用肽-MHC多聚体,在肺结核患者外周血中检测到抗原特异性T细胞。本实验组最终鉴定出6条新的CTL表位和3条新的Thl表位,为研发适用于中国人群的肽表位疫苗、结核诊断试剂奠定重要基础。研究目的1.筛选和鉴定覆盖最广泛中国人群的HLA-A*1101限制性CTL表位,并且评价其抗结核免疫效应。2.筛选和鉴定覆盖最广泛中国人群的HLA-DRB1*0901限制性Th1表位,并且评价其抗结核免疫效应。研究方法1.检测结核患者HLA-A、HLA-DR等位基因频率T细胞表位的识别和递呈有MHC限制性。不同区域的人群,携带的HLA等位基因有很大差异。为了鉴定能够覆盖最广泛的中国人群T细胞表位,我们检测中国人群的HLA基因频率,寻找等位基因频率最高的HLA分型。我们从南方医院和广州市胸科医院一共收集了350名结核患者的外周血样本,利用测序分型技术(SBT),对结核患者HLA-A、HLA-DR位点进行高分辨基因分型检测。2.预测CTL表位和Th表位1) HLA-A*1101限制性CTL表位的预测①从Anat Zvi, ect al筛选的具有免疫优势的抗原中选择了45个MTB抗原蛋白：从Sylvie Bertholet, ect al鉴定的诱导IFN-γ分泌的抗原中选择了16个MTB抗原蛋白；另外,通过PubMed检索2008至2013年间报道新的MTB抗原蛋白,选择了33个MTB抗原蛋白。综上所述,最终筛选获得94个MTB抗原。②从结核数据库TB Database获取94个MTB抗原的氨基酸序列；使用CBS数据库上NetMHCcons方法预测HLA-A*1101限制性CTL表位。选取与HLA-A*1101分子亲和力最高的48条表位肽。2) HLA-DRB1*0901限制性Th表位的预测①选择了强免疫原性并广泛应用的MTB抗原38kDa (Rv0934)和Ag85A (Rv3804c)。目前表位数据库IEDB尚未有这两个抗原HLA-DRB1*0901限制性T细胞表位研究报道。②从TB Database获取38kDa和Ag85A的氨基酸序列；使用CBS数据库上NetMHCII方法预测抗原上的Th表位,选取与HLA-DRB1*0901分子亲和力最高的18个表位。3. HLA-A*1101限制性CTL表位的筛选和鉴定1)紫外诱导肽置换实验验证CTL表位与HLA-A*1101分子的亲和力合成含光敏型配体的p-MHC单体,将其与预测的CTL表位肽混合,紫外照射1小时。光敏型配体发生断裂而从MHC分子脱离,CTL表位与MHC分子结合形成新的p-MHC单体,并且亲和力越高,形成的单体越多越稳定。使用MHCI特异性ELISA检测新形成的p-MHC单体的量,确定预测的CTL与HLA-A*1101分子之间的亲和力。2) ELISA检测CTL、Th表位诱导肺结核患者PBMC分泌细胞因子CTL表位肽刺激6名HLA-A*1101(+)确诊结核患者的PBMC细胞。72小时后,ELISA检测上清中IFN-γ、TNF-α和GrB的分泌水平。3)ELISPOT检测分泌IFN-γ的CD8+T细胞频数及患者识别阳性率CTL表位肽刺激30名HLA-A*1101(+)肺结核患者的PBMC细胞,在ELISPOT板孵育24小时,检测生成的斑点数。设置阳性反应的标准,统计各CTL表位肽被患者识别的阳性率。4)CTL表位诱导肺结核患者CD8+T细胞增殖用CTL表位肽刺激来自HLA-A*1101(+)肺结核患者、HLA-A*1101(-)肺结核患者和HL-A*1101(+)健康志愿者的PBMC细胞,用CFSE对淋巴细胞进行染色,7天后,流式细胞术检测CD8+T细胞的增殖水平。5)表位肽-MHC多聚体检测肺结核患者肽特异性T细胞合成带APC荧光的HLA-A*1101多聚体(装载CTL表位p12),用于标记p12特异性T细胞。用多聚体标记4名肺结核患者的PBMC,流式细胞术检测p12特异性T细胞的百分比。6)检测CTL表位肽p12诱导CD69和CD107分子的表达及胞内细胞因子分泌用p12刺激HLA-A*1101肺结核患者的PBMC,6小时后,用表面标记抗体检测T细胞早期活化标志CD69和溶酶体相关膜蛋白CD107的表达水平。将T细胞破膜固定后,检测胞内IFN-γ、TNF-α和IL-2的表达水平。4.HLA-DRB1*0901限制性CD4+T细胞筛选和验证1) ELISA检测Th表位诱导Th1型细胞因子分泌用Th表位刺激10名HLA-DRB1*0901肺结核患者的PBMC细胞,72小时后,ELISA检测上清中Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α和Th2型细胞因子IL-4、IL-17的分泌水平。2) ELISPOT检测分泌IFN-γ的CD4+T细胞频数用Th1表位刺激来自HLA-DRB1*0901(+)和HLA-DRB1*0901(-)肺结核患者的PBMC,在ELISPOT板孵育24小时后,检测生成的斑点数。3)Th1表位肽诱导肺结核患者CD4+T细胞增殖用Th1表位肽刺激来自HLA-DRB1*0901(+)和HLA-DRB1*0901(-)肺结核患者的PBMC,使用CFSE染料标记细胞,7天后,流式细胞术检测CD4+T细胞的增殖水平。4)ICS检测Th1表位诱导细胞因子分泌用HLA-DRB1*0901限制性Th1表位肽p2刺激肺结核患者的PBMC,6小时后,检测胞内IFN-γ、TNF-α和IL-2的表达水平。统计学分析采用SPSS 20.0统计软件进行数据统计分析。所有计量资料结果用均数±标准差(standard error, mean±SE)表示。不同组之间的比较使用单因素方差分析(One-way ANOVA),多个实验组与一个对照组的均值比较方差齐时采用Dunnett-t检验,各组间两两比较方差齐时采用LSD法。两样本间的均数比较采用独立样本t检验(Independent-samples T Test)。当P<0.05时,被认为差异具有显着意义。结果1.获得了中国结核患者HLA-A、HLA-DR等位基因频率分布为获得结核患者中HLAⅠ、Ⅱ类等位基因的频率,利用测序分型技术(SBT),对中国南方地区350名结核患者进行HLA-A、HLA-DR位点高分辨基因分型检测,证实频率最高的前五位与HLA等位基因权威数据库AFND (http://www.allelefrequencies.net)中国人群的结果一致。其中HLA-A*1101和HLA-DRB1*0901分别是HLA-A位点和HLA-DRB1位点等位基因频率最高的基因型,能够覆盖最广泛的中国人群。2.MTB抗原特异性CTL和Th1表位的预测和鉴定1)HLA-A*1101限制性MTB抗原CTL表位的预测和鉴定①抗原选择：通过筛选抗原的方法和设置的标准,获得了Rv0079等94个能够诱导人CD8+T细胞反应的MTB抗原。② HLA-A*1101表位：从结核数据库(TB Database)获得94个MTB抗原蛋白的氨基酸序列,采用CBS数据库中的NetMHCcons预测方法,预测与HLA-A*1101分子高亲和力的表位。选择了亲和力最强的48条表位,这些表位肽的IC50<15nM。2) HLA-DRB1*0901限制性Th表位的预测和鉴定①抗原选择：通过检索IEDB,发现常见MTB抗原38kDa (Rv3804)和Ag85A(Rv0934c)并没有HLA-DRB1*0901限制性表位的报道,于是选取它们作为目标抗原。② HLA-DRB1*0901表位：从结核数据库(TB Database)获得了38kDa和Ag85A的氨基酸序列,通过CBS数据库中NetMHCIIpan预测方法,预测与HLA-DRB1*0901分子结合的表位。我们选取了IC50<50nM的高亲和力表位肽,共计18条。3. HLA-A*1101限制性CTL表位的筛选及其免疫学功能验证1)通过紫外诱导肽置换实验,验证48条CTL表位肽与HLA-A*1101分子结合亲和力,其中22条预测表位肽与HLA-A*1101分子有强亲和力(>阳性对照肽),将预测表位肽的序列与MTB蛋白组比对,确认了预测表位肽MTB蛋白来源的唯一性。2)通过不同的实验方法(ELISA法、ELISPOT法和ICS法)检测了22条预测表位肽活化CD8+T细胞和诱导细胞因子反应,发现其中6条表位肽特异性地诱导肺结核患者CD8+T细胞分泌IFN-γ (P<0.05)。3)为验证6条免疫优势的CTL表位肽的MTB特异性和HLA-A*1101限制性,检测表位肽诱导HLA-A*1101(+)肺结核患者、HLA-A*1101(-)肺结核患者和HLA-A*1101(+)健康志愿者的PBMC中分泌IFN-y的CD8+T细胞的频数。结果显示,6条抗原表位肽刺激后,HLA-A*1101(+)肺结核患者PBMC中分泌IFN-y的CD8+T细胞的频数,显着地高于其它两组,结果具有统计学差异(P<0.05)。4)为了进一步检测6条优势表位肽的免疫学活性,我们检测了它们诱导T淋巴细胞增殖的能力,发现它们能特异性地诱导HLA-A*1101(+)肺结核患者CD8+T细胞增殖(P<0.05)。5)为了直接检测表位肽特异性T细胞,合成了肽-MHC多聚体(dextramer),利用多聚体标记,在HLA-A*1101(+)的肺结核患者PBMC中检测到显着水平的表位肽p12特异性CD8+T细胞(P<0.05)。6)流式细胞术检测结果表明,优势表位肽p12诱导CD8+T细胞早期活化标志CD69分子和杀伤活性标志分子CD107a/b的表达上调；表位肽p12够诱导肺结核患者产生同时分泌两种或以上细胞因子的多功能CD8+T细胞。4.HLA-DRBl*0901限制性Thl表位的筛选及其免疫学功能验证1)通过不同的实验方法(ELISA和流式细胞术)检测18条Th表位肽诱导CD4+T细胞反应,发现其中6条诱导肺结核患者分泌Thl型细胞因子(P<0.05)。2) ELISPOT检测6条优势表位肽诱导HLA-DRB1*0901(+)和HLA-DRB1*0901(-)肺结核患者的IFN-γ反应,发现6条表位肽诱导的IFN-y反应均能被anti-CD4抗体阻断(P<0.05)；其中3条表位肽能特异性地诱导HLA-DRB1*0901(+)的肺结核患者PBMC分泌IFN-γ(P<0.05).3)为进一步检测上述3条HLA-DRB1*0901限制性CD4+T细胞优势表位肽的免疫学活性,检测了它们诱导T细胞增殖的能力。结果显示,3条优势表位肽能特异性诱导HLA-DRB1*0901(+)肺结核患者的CD4+T细胞发生显着增殖,P<0.05)。4)利用流式细胞术,检测到了表位肽p4够诱导肺结核患者产生同时分泌两种或以上细胞因子的多功能CD4+T细胞。结论1.通过HLA基因频率测序分型,获得了中国人群HLA-A和DR位点上的等位基因频率,为鉴定覆盖广泛人群HLA的MTB表位奠定基础。2.利用生物信息预测,结合实验验证的方法,鉴定了6条来自不同MTB抗原蛋白的HLA-A*1101限制性CTL表位；通过临床样本功能实验,验证了上述优势表位能诱导IFN-γ、TNF-α和GrB等细胞因子分泌,诱导CD8+T细胞增殖；通过肽-MHC多聚体标记,证实p12是自然递呈的表位。这些HLA-A*1101限制性表位肽为进一步研发疫苗或诊断试剂奠定基础。3.利用生物信息预测,结合实验验证的方法,鉴定了3条新的HLA-DRB1*0901限制性Thl表位,通过功能实验证明上述表位肽能够诱导IFN-γ、TNF-α等Thl型细胞因子分泌,诱导CD4+T细胞的增殖,为进一步研发多肽疫苗或诊断试剂奠定基础。(本文来源于《南方医科大学》期刊2016-05-16）
免疫优势表位论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的利用表位预测分析技术筛选空肠弯曲菌(C. jejuni)黏附蛋白PEB1的B细胞免疫优势表位,并评价其免疫保护效果。方法采用氨基酸步移策略,合成18 mer氨基酸重迭肽段。ELISA系统筛选鉴定PEB1的B细胞免疫优势表位。采用KLH偶联免疫优势表位肽免疫BALB/c小鼠,ELISA测定优势表位肽诱导的IgG抗体效价。末次免疫后7 d,经口灌胃感染C. jejuni 11168,在感染后的28 d,定量检测感染攻毒后各组小鼠的空肠组织C. jejuni的定植量以及q RT-PCR技术检测炎性细胞因子TNF-α的相对表达水平。通过HL-60细胞调理吞噬实验测定表位肽诱导产生抗体所介导的调理吞噬杀伤功能。免疫B细胞缺失小鼠,感染攻毒后检测肠组织C. jejuni的定植量。结果 PEB155-72aa、PEB197-114aa、PEB1211-228aa均能与PEB1抗血清产生强烈IgG抗体反应。抗PEB155-72aa、抗PEB197-114aa和PEB1211-228aa血清均能与重组的PEB1产生较强的抗原抗体反应。与CFA/IFA组相比,免疫PEB155-72aa、PEB197-114aa、PEB1211-228aa后血清中的抗体能够显着增强抗体介导的HL-60细胞的调理吞噬作用(P <0. 01),均显着降低C. jejuni在空肠组织中的定植量,同时也均显着降低炎性细胞因子TNF-α的相对表达水平(P <0. 01)。PEB155-72aa-KLH+CFA/IFA组,PEB197-114aa-KLH+CFA/IFA组,PEB1211-228aa-KLH+CFA/IFA组中,免疫B cell Knock out(B细胞缺失)小鼠攻毒后,C. jejuni在空肠组织中的定植量均显着高于WT(野生型)小鼠的定植量(P <0. 01)。结论成功鉴定出3个具有良好免疫原性和免疫保护作用的优势B细胞抗原表位(PEB155-72aa、PEB197-114aa、PEB1211-228aa),可用于C. jejuni疫苗的后续开发研究。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
免疫优势表位论文参考文献
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