肺炎克雷伯氏菌漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

论文摘要

以肺炎克雷伯氏菌（Klebsiellapneumoniae）基因组为模板,通过PCR扩增得到其漆酶基因lac;基于毕赤酵母密码子偏爱性优化后,得到新型漆酶基因lacm;将其与大肠杆菌–毕赤酵母（E. coli-P. pastoris）穿梭表达载体pPIC9K连接,构建重组质粒pPIC9K-lacm;将该质粒转化毕赤酵母（Pichiapastoris）GS115中,实现该漆酶的胞外分泌表达,发酵液中重组漆酶（rLACM）活力达0.37 U/m L.经对rLACM酶学性质分析表明:rLACM的最适温度为70℃,最适pH为8.0,在30～70℃、pH 5.0～9.0活力稳定.

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌种与质粒
•     1.1.2 主要试剂与工具酶
•     1.1.3 培养基
•   1.2 方法
•     1.2.1 肺炎克雷伯氏菌漆酶基因扩增
•     1.2.2 重组质粒的构建
•     1.2.3 电转化毕赤酵母
•     1.2.4 酵母转化子PCR鉴定
•     1.2.5 漆酶在毕赤酵母中的诱导表达
•     1.2.6 纯化r LACM
•     1.2.7 表达产物的SDS-PAGE分析
•     1.2.8 漆酶活力测定及酶学性质考察
• 2 结果与分析
•   2.1 重组质粒p PIC9K-lacm的构建
•   2.2 重组质粒电转及转化子鉴定
•   2.3 rLACM的诱导表达及纯化
•   2.4 rLACM的酶学性质
•     2.4.1 r LACM的最适温度和温度稳定性
•     2.4.2 r LACM的最适pH和p H稳定性
• 3 结语

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王建玲,桂爽,付禹,张妤彤,郑东,路福平,刘逸寒

关键词: 漆酶,毕赤酵母,异源表达,酶学性质

来源: 天津科技大学学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 工业发酵微生物教育部重点实验室天津市工业微生物重点实验室工业酶国家工程实验室天津科技大学生物工程学院

基金: 天津市科技计划资助项目(16YFZCSY01040,17JCYBJC23700),大学生实验室创新基金资助项目(1604A207)

分类号: Q78

DOI: 10.13364/j.issn.1672-6510.20170190

页码: 12-17

总页数: 6

文件大小: 546K

下载量: 215