导读:本文包含了细胞周期检查点论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:检查点,激酶,细胞,周期,蛋白,复合物,肿瘤。
细胞周期检查点论文文献综述
李宇哲,朱春斌,王磊,姜洁,蒋朋飞[1]（2018）在《人乳头瘤病毒E7蛋白对细胞周期G_1/S检查点的影响》一文中研究指出高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌的发生关系已经明确,HPV编码的早期蛋白E7是HPV致宫颈癌的主要相关蛋白之一。G1/S检查点是细胞周期中不可逆的关键点,决定了细胞进入细胞周期与否,与肿瘤的发生发展关系密切。pRb蛋白是调控细胞周期G1/S检查点中的限速底物,是起调控作用的主要因子之一。E7通过影响pRb蛋白、E2F家族、Cyclin/CDK2复合物、p27蛋白、Dyrk1B等细胞周期相关蛋白来影响G1/S检查点的正常工作,形成失控的细胞增殖。高危型HPV E7蛋白对细胞周期检查点的影响,既是HPV致癌机制的重要组成部分,也可能成为攻克此类癌症的突破口。本文综述了高危型HPV E7蛋白对细胞周期G1/S检查点的影响。(本文来源于《病毒学报》期刊2018年03期）
尹玉平[2]（2017）在《细胞周期检查点相关蛋白Chk1在胃癌治疗中价值的研究》一文中研究指出目的:研究细胞周期检查点蛋白Chk1在胃癌细胞中的功能,并评估Chk1抑制剂LY2606368在胃癌细胞中的抗肿瘤作用。.方法:为了研究Chk1在胃癌细胞中的功能,我们设计了 Chk1特异性siRNA敲低p53野生型细胞系AGS及p53突变型细胞系MKN1中Chk1表达,使用MTS法评估Chk1对胃癌细胞增殖的影响,检测了 Chk1敲低在胃癌中细胞中对电离辐射敏感性的影响。此外,我们用MTS法及平板克隆实验检测了 Chk1抑制剂LY2606368在胃癌细胞系AGS及MKN1中抗肿瘤效果,运用Western blot检测了 LY2606368处理胃癌细胞后,其DNA损伤,凋亡相关标志表达水平的变化。结果:MTS的结果表明使用siRNA敲低Chk1后,胃癌细胞系AGS,MKN1的增殖能力明显减低,对电离辐射的敏感性明显增强。使用Chk1抑制剂处理LY2606368处理胃癌细胞AGS及MKN1后,能明显抑制肿瘤细胞的增殖,并能诱导胃癌细胞的凋亡,Western blot结果显示LY2606368降低Chk1的水平,并增加Chk1在Ser345位点的磷酸化,此外其能够上调DNA损伤标志物γ-H2AX及细胞凋亡标志蛋白cleaved-caspase3.结论:Chk1敲低不仅能够显着抑制胃癌细胞的增殖,而且能够提高对电离辐射的敏感性。Chk1抑制剂LY2606368同样在胃癌细胞中显示出强力的抗肿瘤作用。目的:探寻潜在能够与Chk1抑制剂LY2606368联合用于胃癌治疗的药物方法:首先我们用装有同源性重组修复报告质粒的U20S细胞检验了LY2606368对DNA损伤同源性重组修复的影响,为了减少LY260636对细胞周期的影响而造成的误差,我们用羟基脲同步各组细胞周期以准确检测LY2606368对同源性重组修复影响。MTS实验及平板克隆实验检测了 LY2606368与BMN673胃癌中的协同抗肿瘤作用,Annexin V/PI双染法检验了 LY2606368,BMN673和联合用药组在胃癌细胞AGS及MKN1中的促凋亡作用。Western blot检测了不同组中凋亡相关蛋白cleaved caspase3的表达,另外为了研究BMN673与LY2606368在胃癌中这种协同抗肿瘤作用的可能机制,PI染色法检测了 LY2606368组,BMN673,联合用药组加药24小时后,AGS及MKN1细胞周期的变化,另外Western blot检测了各组中G2期标志物Cylcin B1及有丝分裂期标志物p-H3表达水平的变化。此外,我们成功建立了裸鼠人源性胃癌肿瘤模型,在体内实验水平,检验了 LY2606368,BMN673,及两药联合的抗肿瘤效果。结果:同源性重组修复报告实验结果表明,LY2606368对同源性重组修复有明显的影响,LY2606368处理24小时后,U20S细胞同源性重组修复能力明显降低,用羟基脲同步LY2606368加药组合对照组的细胞周期后,结果仍然显示,加药组中同源性重组修复较对照组也同样减低,MTS结果显示,较LY2606368单药组和BMN673单药组,联合用药组对胃癌细胞系AGS及MKN1中的细胞活力明显降低,平板克隆实验结果同样显示,AGS及MKN1细胞中,细胞克隆形成数显着降低,Annexin V/PI 染色显示在 AGS 及 MKN1 细胞系,LY2606368 和 BMN673联合用药组中的凋亡率比单药组高,Western blot的结果显示联合用药组有更高的凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3的表达。细胞周期分析结果显示LY2606368能够损害G2M期周期检查点,减少BMN673诱导的G2M周期阻滞,Western blot结果显示联合用药组中G2期标志物Cyclin B1的表达明显降低,而有丝分裂期标志物p-H3的水平明显上升。最后,在裸鼠人源性胃癌模型中,LY2606368联合BMN673治疗组中的肿瘤体积及肿瘤重量较对照组及LY2606368和BMN673单药组明显降低,显示了良好的抗肿瘤效果。结论:LY2606368能够抑制细胞DNA同源性重组修复的水平,LY2606368联合PARP抑制剂BMN673在胃癌细胞中显出出强力的协同抗肿瘤作用。(本文来源于《华中科技大学》期刊2017-05-01）
李远新,韩子飞,田超,张志丽,刘俊义[3]（2016）在《新型非ATP竞争型细胞周期检查点激酶1(CHK1)抑制剂的设计、合成及活性评估（英文）》一文中研究指出本文根据已报道的非ATP竞争型CHK1抑制剂,设计并合成了分别具有吡咯并嘧啶和嘌呤结构的两类脲类化合物作为新型非ATP竞争型CHK1抑制剂,并进行了初步的生物活性测试。结果显示,大部分化合物尤其是嘌呤系列化合物17f不仅对CHK1的抑制活性高于先导化合物,而且展现出一定的抗肿瘤增强作用。(本文来源于《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》期刊2016年10期）
韩艳勤[4]（2016）在《DNA-PKcs在放射诱发HeLa细胞自噬中的作用及抑制自噬对细胞周期检查点的影响研究》一文中研究指出DNA依赖的蛋白激酶催化亚基(DNA-dependent kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)是一个分子量大约为460k D的蛋白激酶,其属于磷脂酰肌醇-3-激酶相关蛋白激酶家族成员,是一种被DNA激活的丝氨酸/苏氨酸激酶,其与KU70/KU80组成的异源二聚体调节亚基一起组成了异源叁聚体DNA依赖的蛋白激酶(DNA-dependent kinase,DNA-PK)。DNA-PKcs的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性不仅可以激活调节损伤修复的相关蛋白和参与细胞周期调控的蛋白,而且还可以通过自身活化的方法调节其激酶活性。研究证实DNA-PKcs是一个具有多功能性的酶,其最主要的也是人们研究最透彻的一个功能就是通过非同源末端修复途径参与DNA双链断裂损伤修复。除此之外,DNA-PKcs的沉默或缺失还会引起电离辐射或化学药物引起的细胞不正常的分裂,细胞非正常的G1期或G2/M期阻滞和自噬。近年来随着对DNA-PKcs研究的不断研究,发现其在肿瘤组织中的表达要超出正常范围。很多研究已经表明DNA-PKcs的抑制是一个增加肿瘤细胞对抗电离辐射,肿瘤试剂拓扑异构酶II毒性物质和顺铂等敏感性的非常可行的方法。有研究表明,DNA-PKcs在胶质瘤细胞中参与电离辐射诱发自噬的调节,但是关于DNA-PKcs如何调节自噬的研究很少。细胞自噬是真核细胞中非常关键且保守的物质的分解与循环利用的过程,有助于降解细胞内长寿命的蛋白质,细胞溶质的成分,损伤老化的细胞器以及某些病原体使得它们得以循环重复利用,从而有助于保持细胞的内稳态,这是自噬最基本的作用。在面对错乱复杂的环境比如必需营养物质的缺乏,电离辐射以及内源性的活性氧,复制压力等,机体的细胞需要作出各种反应来应对不利环境,自噬会通过消耗自身的物质来使细胞获得临时的供应从而促进细胞存活。但是,细胞自噬在肿瘤的治疗过程中依然是一个十分有争议的话题,因为自噬可以刺激细胞存活,也可以诱导细胞死亡。研究表明当细胞遭遇某一种生理变化或者某一种特殊的处理比如致死性的药物剂量,细胞自噬就可以促进细胞的死亡。研究证实自噬的功能失调与许多疾病的起始和发展有很大关系。3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3MA)是一个被研究学者广泛使用的细胞自噬抑制剂,主要作用能够通过抑制细胞自噬的正性调节子Ⅲ型PI3K来抑制自噬。目的1.以DNA-PKcs敲低的He La细胞系为对象,观察照射后细胞的放射敏感性以及自噬蛋白的表达情况,探讨DNA-PKcs调节自噬作用及其可能的分子机制;2.电离辐射可以诱发宫颈癌He La细胞G2/M期的周期阻滞,探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤在电离辐射诱发He La周期阻滞中的调节作用。方法利用实验室前期构建的DNA-PKcs沉默的表达载体,采用慢病毒介导的小干扰RNA技术,通过Lipofectamin 2000作为介质,包装慢病毒颗粒并感染He La细胞,使用嘌呤霉素抗性筛选获得稳定敲低DNA-PKcs的宫颈癌He La细胞系,并且经过免疫印迹鉴定;Hela-sh NC和Hela-sh DNA-PKcs经过单独照射或者与自噬的抑制剂3-甲基腺嘌呤联合作用处理细胞,在照射后不同时间点(0、12、24、48和72h)采用细胞增殖与毒性试验检测细胞的增殖与细胞的放射敏感性变化;He La细胞经过单独照射或者与自噬的抑制剂3-甲基腺嘌呤联合作用处理,通过细胞平板克隆形成实验检测照射后He La-sh NC和He La-sh DNA-PKcs在不同剂量射线下存活率变化;通过流式细胞术检测6Gy照射后0、2、4、6、8和12h后的细胞周期变化及有丝分裂期磷酸化组蛋白H3的变化;DNA-PKcs的激酶抑制剂NU7026与自噬的激动剂雷帕霉素共同处理细胞并通过免疫印迹实验检测多功能的泛素结合蛋白P62、微管轻链蛋白LC3、哺乳动物雷帕霉素的靶蛋白m TOR并且He La经过单独照射或者与自噬的抑制剂3-甲基腺嘌呤联合作用处理,通过免疫印迹检测周期检验点激酶2(Chk2),Cdk1及磷酸化酶Cdc25C的变化;利用分子克隆技术构建GFP-LC3表达载体并通过激光共聚焦免疫荧光技术检测绿色荧光GFP-LC3焦点的形成。结果1.免疫印迹验证He La-sh NC和He La-sh DNA-PKcs,发现DNA-PKcs在敲低细胞中表达很少,这说明DNA-PKcs稳定敲低的细胞系构建成功;2.细胞增殖与毒性检测结果显示,DNA-PKcs敲低的细胞放射敏感性增强,细胞的增殖速度减慢;在照射处理的基础上在细胞中加入自噬的抑制剂3-甲基腺嘌呤,无论是对照细胞还是DNA-PKcs敲低的细胞,其细胞的放射敏感性进一步增强;3.免疫印迹结果得到:与Hela-sh NC而言,DNA-PKcs敲低的细胞中,微观相关蛋白LC3蛋白表达增多而p62蛋白表达减少,m TOR在2481位点的磷酸化水平下调;4.使用自噬的激动剂雷帕霉素和DNA-PKcs的激酶抑制剂NU7026处理Hela细胞,通过免疫印迹实验得到DNA-PKcs的激酶活性被抑制后,细胞自噬蛋白LC3表达增加且加入雷帕霉素后自噬水平进一步增加;5.激光共聚焦免疫荧光法得到DNA-PKcs蛋白敲低后,平均每个细胞的GFP-LC3荧光斑点数目增多,加入自噬的抑制剂3MA细胞自噬被抑制,加入自噬促进物RAPA,细胞自噬增加;6.细胞经过6Gy照射处理并通过流式细胞术检测在照射后不同时间细胞周期的变化,发现细胞周期被阻滞在G2/M期,这与实验室前期的实验结果一致;在照射的基础上辅以自噬的抑制剂3-甲基腺嘌呤发现细胞的阻滞现象被破坏,这说明3MA参与了电离辐射诱导的周期阻滞的调节;7.细胞经过照射和自噬的抑制剂3-甲基腺嘌呤共同处理,通过流式细胞术检测3-甲基腺嘌呤处理后磷酸化的组蛋白H3表达增多,这说明3MA可以促进细胞从G2期进入到M期;8.免疫印迹检测在不同的时间点细胞周期相关蛋白,发现在加入自噬的抑制剂3-甲基腺嘌呤后,磷酸化的ATM(S1981)、Chk2(T68),Cdc2(T15)和Cdc25C(S216)蛋白的水平均有所下调。结论1.DNA-PKcs蛋白敲低后细胞的放射敏感性增加且电离辐射诱发的细胞自噬增加;2.DNA-PKcs可能是通过m TOR信号通路来调节自噬;3.3-甲基腺嘌呤通过ATM/Chk2/Cdc25c/Cdk1的信号通路来调节电离辐射诱发的细胞周期G2/M检查点功能。(本文来源于《中国人民解放军军事医学科学院》期刊2016-06-03）
孙琦,杨晓虹,董雷,刘安,王文娜[5]（2013）在《细胞周期检查点激酶1抑制剂的研究进展》一文中研究指出目的综述近年来细胞周期检查点激酶1(cell cycle checkpoint kinase 1,Chk1)抑制剂的研究进展。方法通过对国内外相关文献进行查阅、归纳和总结,较为全面地介绍了细胞周期检查点激酶1抑制剂的研究现状。结果与讨论细胞周期检查点激酶1抑制剂与DNA损伤试剂联用具有良好的抗肿瘤疗效,随着细胞周期检查点激酶1抑制剂作用机制及构效关系研究的不断深入,细胞周期检查点激酶1抑制剂会有更广阔的发展前景,为癌症的治疗发挥更重要的作用。(本文来源于《中国药学杂志》期刊2013年22期）
黄心智[6]（2013）在《细胞周期调控系统与检查点机制》一文中研究指出提纲:一、细胞周期调控系统1.细胞周期概述2.cyclin-Cdk复合物的发现、组成及其功能3.影响Cdk活性的因素二、细胞周期检查点1.检查点的概念和组分2.检查点在细胞周期中的分布叁、细胞周期调控与检查点的关系1.DNA损伤阻止细胞进入S期重点:1.cyclin-Cdk复合物是驱动细胞周期进程的引擎2.细胞周期检查点是影响cyclin-Cdk复合物活性的信号转导机制(本文来源于《中国细胞生物学学会2013年全国学术大会——武汉会议教学分会场论文集》期刊2013-04-21）
刘天德,余新,袁荣发,王庆诺,杨志强[7]（2012）在《Rock2对细胞周期检查点Cdc25A的调节作用》一文中研究指出目的:探讨肝癌细胞中Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock2)对细胞周期检查点细胞分裂周期蛋白25A(Cdc25A)的调节作用。方法:Western blotting检测51对肝癌及癌旁组织中Rock2与Cdc25A的蛋白表达情况。构建并筛选shRock2干扰质粒,稳定转染到人肝细胞癌Huh-7和HepG2细胞中,Western blotting检测Cdc25A蛋白表达变化;针对Rock2干扰序列,利用PCR定点突变技术进行碱基突变,构建Rock2突变质粒从而"恢复"Rock2表达,分析Cdc25A蛋白表达变化并用MTT法检测肝癌细胞增殖的改变。Western blotting检测Rock2稳定低表达的肝癌细胞中检查点激酶1(Chk1)和检查点激酶2(Chk2)蛋白的变化,免疫共沉淀及免疫荧光分析Rock2与Cdc25A的相互作用。结果:Rock2与Cdc25A蛋白在肝癌组织中较癌旁组织呈现高表达,而且两者呈正相关。肝癌细胞中稳定低表达Rock2后,Cdc25A蛋白表达明显下降;"恢复"Rock2表达后,Cdc25A蛋白表达增加而且肝癌细胞也出现增殖加快现象。Rock2低表达对Chk1和Chk2蛋白变化无明显影响。免疫共沉淀表明Rock2与Cdc25A直接相互作用,免疫荧光检测表明Rock2与Cdc25A存在共定位。结论:Rock2对细胞周期检查点Cdc25A起直接的正向调控作用,而且不依赖于Chk1/Chk2,可能为肝癌基因表达调控研究提供新的靶基因。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2012年06期）
王超[8]（2011）在《氧化应激性DNA损伤精子体外受精后早期胚胎发育以及细胞周期检查点的研究》一文中研究指出前言精液冷冻保存是辅助生殖(assisted reproductive techniques,ART)领域中的一项重要技术,是保存男性生育力的一种重要方式,广泛应用于可能会导致睾丸衰竭或者射精机能障碍的放、化疗以及手术治疗之前。但是精子冷冻保存的最大缺陷就是解冻后的精子质量不满意,包括活率、活力以及精子DNA完整性的降低,在不育患者中这种状况尤为突出。目前关于冷冻导致精子DNA损伤的病因尚未完全阐明,其中,冷冻过程诱发氧化应激和过量活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成被认为起到了主要的作用。氧化应激可导致多种形式的DNA损伤,例如:染色质交联、染色体缺失、碱基氧化、DNA链损伤等。由于H2O2具有较强的氧化活性,并且可以和O2反应持续产生(O2·-)和羟自由基(·OH);另外H2O2来源方便,所以我们的前期实验用不同浓度H2O2作为精子氧化应激性DNA损伤试剂,探索H2O2精子DNA损伤模型,以研究冷冻精子DNA损伤修复反应机制。在真核生物中,DNA损伤激活DNA损伤修复与检查点系统,共同监视DNA损伤,控制DNA的修复、细胞周期进程以及程序化细胞死亡。为了维持基因组的完整性及细胞分裂过程中完全复制的和未损伤的DNA的正确转导,有丝分裂前,真核生物细胞经历了G1/S,intra-S,G2/M细胞周期检查点。检查点信号通路激活后可以短暂性的停止或放慢细胞周期过程,要么为细胞DNA损伤修复所涉及的基因转录的增强及其产物的活动提供足够的时间,要么为引发凋亡过程提供足够的时间。精子缺乏损伤修复系统,但是DNA损伤精子仍然具有受精能力和发育潜能,损伤要在受精后修复。目前胚胎发育过程中损伤修复系统以及细胞周期检查点系统的研究不多,确切作用机制尚不清楚。本实验运用合理的DNA冷冻损伤精子模型,研究氧化应激性DNA损伤精子体外受精(in vitro fertilization,IVF)后早期胚胎的发育,探讨精子的氧化应激性DNA损伤是否激活了受精卵内的细胞周期检查点信号通路来引发有丝分裂细胞周期的阻滞或延迟,以初步探索DNA损伤精子受精后早期胚胎的损伤反应机制。目的1.研究氧化应激性DNA损伤精子体外受精后早期胚胎发育情况。2.验证氧化应激性DNA损伤精子体外受精后早期胚胎内细胞周期检查点信号通路的激活。方法1.倒置显微镜下观察新鲜精子组和H2O2处理精子组体外受精的受精率,1-细胞胚胎和2-细胞胚胎的卵裂率以及发育情况。2. BrdU掺入法检测新鲜精子组和H2O2处理的精子组体外受精后受精卵S期(DNA合成)开始和持续时间。观察受精卵排出第二极体的时间来评估受精卵第一次有丝分裂G1期开始的时间。结合受精卵完成第一次卵裂(即M期)结束的时间,求出G1、G2/M期,比较新鲜精子组和H2O2处理的精子组体外受精后一细胞胚胎细胞周期各时相(G1、S、G2/M)经历的时间,验证G1、intra-S或G2/M细胞周期检查点的激活。结果1.新鲜精子组和1.0mM H2O2处理精子组的受精率分别为71.4±16.1%和62.6±12.3%,差别无统计学意义(P>0.05)。受精后第24小时观察1-细胞胚胎卵裂率分别为98.3±0.5%和97.2±1.6%,差别无统计学意义(P>0.05)。受精后第48小时观察2-细胞胚胎卵裂率分别为95.3±0.7%和87.3±6.5%,差别无统计学意义(P>0.05)。新鲜精子组1-细胞胚胎卵裂率≥95%时为精卵结合后20±0.9小时,H2O2处理精子组1-细胞胚胎卵裂率≥95%时为精卵结合后22.5±1.1小时,差别有统计学意义(P<0.05),因此H2O2处理精子组1-细胞卵裂延迟时间平均约2.5个小时。新鲜精子组2-细胞胚胎卵裂率≥95%时为精卵结合后48.8±1.5小时,H2O2处理精子组2-细胞胚胎卵裂率≥95%时为精卵结合后51±2.7小时,差别无统计学意义(P>0.05)。因此与新鲜精子组相比,H2O2处理精子组1-细胞期胚胎发生了卵裂延迟,2-细胞期胚胎的卵裂速度基本达到了正常胚胎水平。2.新鲜精子组和1.0mM H2O2处理精子组G1期开始的时间分别为精卵结合后1.8±1.0小时和1.7±1.1小时,差别无统计学意义(P>0.05)。S期开始的时间分别为精卵结合后9.8±0.6小时和10.3±1.0小时,差别无统计学意义(P>0.05),S期结束的时间分别为精卵结合后17.0±0.8小时和17.7±0.6小时,差别无统计学意义(P>0.05)。因此,新鲜精子组S期的平均持续时间约为7.2小时,1.0mM H2O2处理精子组S期的平均持续时间约为7.4小时;新鲜精子组G1期平均持续时间约8小时,1.0mM H2O2处理精子组G1期平均持续时间约8.6小时,新鲜精子组G2/M期平均持续时间约3小时,1.0mM H2O2处理精子组G2/M期平均持续时间约4.8小时,因此1.0mM H2O2处理精子组体外受精后一细胞胚胎G2/M期延迟平均约1.8小时。结论1.氧化应激性DNA损伤精子体外受精后受精能力以及1-细胞和2-细胞胚胎的发育能力不变,受精卵第一次有丝分裂细胞周期延迟,第二次卵裂时间与正常胚胎细胞卵裂时间相当。2.氧化应激性DNA损伤精子体外受精后胚胎细胞在第一次有丝分裂细胞周期启动了G2/M检查点。(本文来源于《汕头大学》期刊2011-05-01）
杨洋,郑荣生[9]（2011）在《细胞周期检查点激酶1在相关肿瘤中的研究现状》一文中研究指出细胞在生长进化的过程中发展出了一套保证细胞周期中DNA复制和染色体分配质量的检查机制,通常被称为细胞周期检查点。细胞周期检查点调节出现异常时,则会引起一系列疾病,尤其是恶性肿瘤的发生。细胞周期检查点主要有2个激酶:细胞周(本文来源于《蚌埠医学院学报》期刊2011年02期）
许敏,柏林,龚勇,谢伟,杭海英[10]（2010）在《人源Rad9-Hus1-Rad1细胞周期检查点蛋白复合物的晶体结构及其功能分析》一文中研究指出当细胞暴露于遗传毒性因子或遭遇DNA损伤因子的攻击时,会发生基因组DNA的损伤,这时检查点信号通路就被激活,延缓或阻止细胞周期进程,从而阻止受损DNA的进一步复制,引发DNA修复机制。近年来,人们通过对人与酵母细胞的研究发现,Rad9,Hus1,Rad1是在进(本文来源于《第叁届中国结构生物学学术讨论会论文摘要集》期刊2010-03-03）
细胞周期检查点论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究细胞周期检查点蛋白Chk1在胃癌细胞中的功能,并评估Chk1抑制剂LY2606368在胃癌细胞中的抗肿瘤作用。.方法:为了研究Chk1在胃癌细胞中的功能,我们设计了 Chk1特异性siRNA敲低p53野生型细胞系AGS及p53突变型细胞系MKN1中Chk1表达,使用MTS法评估Chk1对胃癌细胞增殖的影响,检测了 Chk1敲低在胃癌中细胞中对电离辐射敏感性的影响。此外,我们用MTS法及平板克隆实验检测了 Chk1抑制剂LY2606368在胃癌细胞系AGS及MKN1中抗肿瘤效果,运用Western blot检测了 LY2606368处理胃癌细胞后,其DNA损伤,凋亡相关标志表达水平的变化。结果:MTS的结果表明使用siRNA敲低Chk1后,胃癌细胞系AGS,MKN1的增殖能力明显减低,对电离辐射的敏感性明显增强。使用Chk1抑制剂处理LY2606368处理胃癌细胞AGS及MKN1后,能明显抑制肿瘤细胞的增殖,并能诱导胃癌细胞的凋亡,Western blot结果显示LY2606368降低Chk1的水平,并增加Chk1在Ser345位点的磷酸化,此外其能够上调DNA损伤标志物γ-H2AX及细胞凋亡标志蛋白cleaved-caspase3.结论:Chk1敲低不仅能够显着抑制胃癌细胞的增殖,而且能够提高对电离辐射的敏感性。Chk1抑制剂LY2606368同样在胃癌细胞中显示出强力的抗肿瘤作用。目的:探寻潜在能够与Chk1抑制剂LY2606368联合用于胃癌治疗的药物方法:首先我们用装有同源性重组修复报告质粒的U20S细胞检验了LY2606368对DNA损伤同源性重组修复的影响,为了减少LY260636对细胞周期的影响而造成的误差,我们用羟基脲同步各组细胞周期以准确检测LY2606368对同源性重组修复影响。MTS实验及平板克隆实验检测了 LY2606368与BMN673胃癌中的协同抗肿瘤作用,Annexin V/PI双染法检验了 LY2606368,BMN673和联合用药组在胃癌细胞AGS及MKN1中的促凋亡作用。Western blot检测了不同组中凋亡相关蛋白cleaved caspase3的表达,另外为了研究BMN673与LY2606368在胃癌中这种协同抗肿瘤作用的可能机制,PI染色法检测了 LY2606368组,BMN673,联合用药组加药24小时后,AGS及MKN1细胞周期的变化,另外Western blot检测了各组中G2期标志物Cylcin B1及有丝分裂期标志物p-H3表达水平的变化。此外,我们成功建立了裸鼠人源性胃癌肿瘤模型,在体内实验水平,检验了 LY2606368,BMN673,及两药联合的抗肿瘤效果。结果:同源性重组修复报告实验结果表明,LY2606368对同源性重组修复有明显的影响,LY2606368处理24小时后,U20S细胞同源性重组修复能力明显降低,用羟基脲同步LY2606368加药组合对照组的细胞周期后,结果仍然显示,加药组中同源性重组修复较对照组也同样减低,MTS结果显示,较LY2606368单药组和BMN673单药组,联合用药组对胃癌细胞系AGS及MKN1中的细胞活力明显降低,平板克隆实验结果同样显示,AGS及MKN1细胞中,细胞克隆形成数显着降低,Annexin V/PI 染色显示在 AGS 及 MKN1 细胞系,LY2606368 和 BMN673联合用药组中的凋亡率比单药组高,Western blot的结果显示联合用药组有更高的凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3的表达。细胞周期分析结果显示LY2606368能够损害G2M期周期检查点,减少BMN673诱导的G2M周期阻滞,Western blot结果显示联合用药组中G2期标志物Cyclin B1的表达明显降低,而有丝分裂期标志物p-H3的水平明显上升。最后,在裸鼠人源性胃癌模型中,LY2606368联合BMN673治疗组中的肿瘤体积及肿瘤重量较对照组及LY2606368和BMN673单药组明显降低,显示了良好的抗肿瘤效果。结论:LY2606368能够抑制细胞DNA同源性重组修复的水平,LY2606368联合PARP抑制剂BMN673在胃癌细胞中显出出强力的协同抗肿瘤作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞周期检查点论文参考文献
[1].李宇哲,朱春斌,王磊,姜洁,蒋朋飞.人乳头瘤病毒E7蛋白对细胞周期G_1/S检查点的影响[J].病毒学报.2018
[2].尹玉平.细胞周期检查点相关蛋白Chk1在胃癌治疗中价值的研究[D].华中科技大学.2017
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