导读:本文包含了一步蛋白纯化系统论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,蜂毒,系统,论文,蛙皮素,素杂合肽,IMPACT。
一步蛋白纯化系统论文文献综述
黄志峰[1]（2000）在《杂合抗菌肽基因MA-E的改建及用一步蛋白纯化克隆系统表达》一文中研究指出蛙皮素—蜂毒素杂合肽是一种具有抗菌活性的碱性多肽物质，属于人工构建基因经诱导表达的一种抗菌小肽。实验表明，杂合肽虽然具有抗菌活性，但由于其分子量较小（约2.9KDa），加上其在大肠杆菌内经诱导表达后，可能对宿主菌有杀伤作用，故多肽的表达量较少，分离、纯化也存在一定困难。本文主要针对以上问题，通过利用聚合酶链式反应方法对杂合肽基因进行修改：一方面引入突变，在分子水平上优化杂合肽基因，另一方面将优化基因与一步蛋白纯化系统中含内蛋白子基因的表达载体连接，使其形成融合蛋白，以利其分离、纯化。 根据优化杂合肽基因序列设计上、下游引物。上游引物含有突变位点及NdeⅠ酶的识别序列，下游引物删除终止密码后，加上甲硫氨酸的基因密码及EcoRⅠ酶的识别序列。优化杂合基因序列以原来基因作模板经用聚合酶链反应方法扩增，NdeⅠ及EcoRⅠ酶切，乙醇沉淀法回收后，克隆到pTYB_2表达载体上，并转化到受体菌ER2566中，经对重组质粒进行DNA序列测定，证实克隆的基因序列与设计序列一致。表达质粒经IPTG诱导在宿主菌中表达，表达产物经IMPACT-T7蛋白纯化系统纯化后，在Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，见其融合蛋白带的特异多肽区带，分子量约为55KDa，表明优化基因已在ER2566宿主菌表达。纯化后的多肽，以大肠杆菌K_(12)D_(31)为指示菌进行琼脂平板扩散法测定，具有抗菌活性。(本文来源于《暨南大学》期刊2000-05-01）
一步蛋白纯化系统论文开题报告
一步蛋白纯化系统论文参考文献
[1].黄志峰.杂合抗菌肽基因MA-E的改建及用一步蛋白纯化克隆系统表达[D].暨南大学.2000
论文知识图
