导读:本文包含了重组人胰激肽原酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:复性,大肠杆菌,梯度,尿素,凝胶,酵母,表皮。
重组人胰激肽原酶论文文献综述
张践生[1]（2018）在《胰激肽原酶联合重组人表皮生长因子治疗糖尿病足疗效分析》一文中研究指出目的探讨对糖尿病足患者实施胰激肽原酶结合重组人表皮生长因子治疗的临床疗效。方法选取2015年11月—2017年2月期间在该院进行治疗的糖尿病足患者80例,将其随机分为甲乙两组,甲组常规治疗,乙组患者接受胰激肽原酶联合重组人表皮生长因子治疗。观察两组患者的临床疗效。结果乙组患者的有效治疗率为92.50%明显高于甲组的62.50%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论将胰激肽原酶联合重组人表皮生长因子治疗糖尿病足患者具有较优的治疗效果,可加速足部神经传导,促进患者的早日康复。(本文来源于《双足与保健》期刊2018年03期）
郭平川,刘大和,张允,胡蓉,李锦秀[2]（2012）在《重组人胰激肽原酶复性工艺的研究》一文中研究指出目的:研究重组人胰激肽原酶包涵体变性及复性的工艺。方法:对本实验室构建的重组人胰激肽原酶大肠杆菌进行IPTG诱导表达表达成功后,菌体经超声破碎释放包涵体,包涵体经洗涤、变性、稀释和尿素梯度凝胶过滤色谱这两种方法复性后(Sephadex-G75),通过测定酶活检验复性效果。结果:①重组人胰激肽原酶工程菌经过IPTG诱导后能够表达目的蛋白,目的蛋白以包涵体形式存在,将细胞破碎后,包涵体经过3次洗涤,纯度达到71.93%;②变性包涵体经24小时稀释复性后,蛋白浓度达到72.61μg/m L,酶的比活达到13.84 U/mg;③变性包涵体经过2个小时的尿素梯度凝胶过滤复性后,蛋白浓度可达到830.07μg/mL,酶的比活达到48.61 U/mg。结论:两种复性方法均可以使包涵体达到一定的浓度和比活,比较发现尿素梯度凝胶过滤色谱具有复性时间短和比活力高等优点,可作为重组人胰激肽原酶复性的一种有效的手段。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2012年31期）
郭平川[3]（2012）在《重组人胰激肽原酶发酵及复性研究》一文中研究指出胰激肽原酶（Kallidinogenase, KLK）遍布于人体当中，是人体KKS系统的重要组成成分，能够起到抑制血小板凝聚，改善血液循环和降低血压效果，广泛用于治疗糖尿病，心脑血管，高血压等疾病。本实验重点放在重组人胰激肽原酶的初步发酵优化以及KLK包涵体的变复性工艺。采用单因素的实验方法，研究了影响重组人KLK表达的条件，结果表明：诱导剂IPTG的最适浓度为0.6mmol L~(-1)；最佳的诱导时间为4h；最佳的Amp的浓度选择为60g L~(-1)；最佳的培养温度为37℃；最佳的酵母抽提物含量为10g L~(-1)；最佳的胰蛋白胨含量为18g L~(-1)。在此条件下，最终可以得到4.62g L~(-1)的包涵体。对重组KLK工程菌进行IPTG诱导表达，目的蛋白以包涵体形式存在；超声破碎工程菌释放包涵体，经3次洗涤后纯度达到71.93%；包涵体溶于含8M Urea的变性溶液中，浓度可达1731μg mL~(-1)。进行包涵体稀释复性实验，叁个不同的终浓度，181.51μg mL~(-1)；64.23μg mL~(-1)；39.14μg mL~(-1)，酶活分别达到0.85U mg~(-1)；7.68U mg~(-1)；11.24U mg~(-1)。在50μg mL~(-1)的浓度范围中，酶活最高。一步透析法和多步透析法实验，KLK的终浓度分别达到84.52μg mL~(-1)，75.42μg mL~(-1)，酶活达到0.63U mg~(-1)，3.13U mg~(-1)。采用柱层析法完成KLK包涵体复性：选用Sephadex-G75进行凝胶过滤复性，柱子堵塞，洗脱不稳定，无法完成复性；采用Urea梯度凝胶过滤色谱（Sephadex-G75），优化尿素梯度的长度，在10%，20%，30%梯度长度下，蛋白回收率分别达到64.27%，75.68%，71.26%，酶活达到23.21U mg~(-1)，48.61U mg~(-1)，38.27U mg~(-1)。最优的梯度长度是20%，此条件下得到的酶活高于稀释复性和透析复性的酶活；采用离子交换色谱对KLK复性，酶活较低，但是纯度高，蛋白回收率达到56.23%，可以作为纯化的手段。采用传统复性法和柱复性法，包涵体KLK均可以达到一定的酶活，经比较发现尿素梯度凝胶过滤色谱（Sephadex-G75）具有复性时间短和酶活高等优点，为重组人胰激肽原酶复性提供一种有效的手段。(本文来源于《北京化工大学》期刊2012-06-05）
侯乐锋,陈劲春,卢嘉宝[4]（2011）在《重组人胰激肽原酶在大肠杆菌中的表达》一文中研究指出根据人胰激肽原酶的氨基酸序列,采用大肠杆菌偏爱密码子,设计合成目的基因片段约750 bp。将设计得到的片段连接到pET-22b(+)表达载体中并测序,将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中进行诱导表达。将IPTG诱导表达的菌体进行SDS-PAGE电泳,在相对分子质量24 kD处可明显观察到高表达带,主要以包涵体形式存在,质量分数可达21.6%,进一步测得蛋白活性为2.27 nmol/s。利用MALDI串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS/MS)鉴定蛋白,蛋白得分106,大于可信得分83(P<0.05),确定了蛋白一级结构的正确性。(本文来源于《生物技术通报》期刊2011年11期）
侯乐锋[5]（2011）在《大肠杆菌表达重组人胰激肽原酶》一文中研究指出胰激肽原酶(pancreatic kininogenase)是一种催化大分子前体物释放生物活性肽的酶。胰激肽原酶具有广泛的药用价值,除降血压之外,还可以用于治疗糖尿病、肾病、改善肾脏功能,治疗心、脑血管疾病等。本实验采用基因工程方法使人胰激肽原酶在大肠杆菌中得到高效表达,并研究其分离纯化工艺,得到重组人胰激肽原酶蛋白。由基因库查得人胰激肽原酶的基因序列,在序列前端添加肠激酶酶切位点,根据其氨基酸序列,采用大肠杆菌偏爱密码子设计合成基因750bp。PCR扩增目的基因,将得到的片断克隆于载体pGEM-T中并测序,再连接至表达载体pET-22b(+)中,重组质粒转入大肠杆菌Rosettatm (DE3)中。转化得到的重组大肠杆菌以IPTG诱导外源基因表达,经过SDS-PAGE电泳分析,在24KD处目标蛋白主要以包涵体形式存在。在37℃,pH为7.0时,以1.0mmol/L浓度的IPTG诱导6h,目的基因在大肠杆菌中的表达最佳,其在细胞总蛋白中含量可达52%。利用串联飞行时间质谱方式(MALDI-TOF-MS/MS)鉴定蛋白,通过MASCOT2.1数据检索引擎比对序列,检出叁个片段,得分108分,在可信范围内,确定了蛋白质一级结构的正确性。包涵体经洗涤、变性、复性、透析,得到重组人胰激肽原酶粗品含量为1035mg/L.将粗品人胰激肽原酶与人工合成底物Nα—苯甲酰—L—精氨酸乙酯(BAEE)作用,底物发生了明显的降解,进一步验证了重组表达的正确性。(本文来源于《北京化工大学》期刊2011-06-16）
袁新清[6]（2004）在《毕赤酵母表达重组人胰激肽原酶》一文中研究指出胰激肽原酶（pancreatic kallikrein，PK）作用于低分子量的激肽原释放出赖氨酰缓激肽 (又名胰激肽原)。激肽原酶和激肽系统（KKS）是维持血压平衡的一个重要组成部分，对血压、电解质平衡、炎症反应等生理或病理过程进行调控。因此，胰激肽原酶具有广泛的药用价值，除降血压之外，还可以用于治疗糖尿病肾病、改善肾脏功能，治疗心、脑血管疾病等。本文利用嗜甲醇毕赤酵母（Pichia pastoris）表达重组人胰激肽原酶（human pancreatic kallikrein，hPK）。首先将hPKcDNA克隆至毕赤酵母穿梭表达质粒pPIC9K构建重组质粒pPIC9K/hPK，经BglII线性化酶切，电穿孔将其整合到毕赤酵母GS115 (His-Mut+)染色体上，利用MM、MD平板筛选His+Muts型阳性克隆，含不同浓度G418-YPD平板筛选高拷贝转化子。共筛选到27株阳性克隆，其中3株是高拷贝。筛选到的高拷贝进行BMGY/BMMY摇瓶培养，诱导表达重组hPK。表达产物经SDS-PAGE凝胶电泳分析，重组目标蛋白质量分数达总蛋白的30％以上；相对分子质量为37 000，较理论设计值26 500大，由糖基化分析是因目标蛋白发生糖基化所致。<WP=4>在基础盐培养基中进行摇瓶表达，初步优化了培养条件，在pH6.0、60％的原盐浓度条件下生长较好。透析脱盐后的发酵液经几种离子交换层析柱进行初步的分离纯化，比较发现弱阴离子DEAE Sepharose FF作用效果较好，目标蛋白获得选择性吸附洗脱，分离体系得到浓缩。纯化得重组hPK经Trypsin进行酶原活化后测定酶活，比活达5.6U/mg。动力学参数测定Km值为5.4×10-2mM，与文献值接近，进一步说明重组hPK在毕赤酵母中获得了正确的表达。初步建立了培养、分离重组hPK的工艺，为进一步的研究工作提供了参考。(本文来源于《北京化工大学》期刊2004-05-29）
重组人胰激肽原酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究重组人胰激肽原酶包涵体变性及复性的工艺。方法:对本实验室构建的重组人胰激肽原酶大肠杆菌进行IPTG诱导表达表达成功后,菌体经超声破碎释放包涵体,包涵体经洗涤、变性、稀释和尿素梯度凝胶过滤色谱这两种方法复性后(Sephadex-G75),通过测定酶活检验复性效果。结果:①重组人胰激肽原酶工程菌经过IPTG诱导后能够表达目的蛋白,目的蛋白以包涵体形式存在,将细胞破碎后,包涵体经过3次洗涤,纯度达到71.93%;②变性包涵体经24小时稀释复性后,蛋白浓度达到72.61μg/m L,酶的比活达到13.84 U/mg;③变性包涵体经过2个小时的尿素梯度凝胶过滤复性后,蛋白浓度可达到830.07μg/mL,酶的比活达到48.61 U/mg。结论:两种复性方法均可以使包涵体达到一定的浓度和比活,比较发现尿素梯度凝胶过滤色谱具有复性时间短和比活力高等优点,可作为重组人胰激肽原酶复性的一种有效的手段。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组人胰激肽原酶论文参考文献
[1].张践生.胰激肽原酶联合重组人表皮生长因子治疗糖尿病足疗效分析[J].双足与保健.2018
[2].郭平川,刘大和,张允,胡蓉,李锦秀.重组人胰激肽原酶复性工艺的研究[J].现代生物医学进展.2012
[3].郭平川.重组人胰激肽原酶发酵及复性研究[D].北京化工大学.2012
[4].侯乐锋,陈劲春,卢嘉宝.重组人胰激肽原酶在大肠杆菌中的表达[J].生物技术通报.2011
[5].侯乐锋.大肠杆菌表达重组人胰激肽原酶[D].北京化工大学.2011
[6].袁新清.毕赤酵母表达重组人胰激肽原酶[D].北京化工大学.2004
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