氟苯尼考耐药基因floR LAMP检测方法的建立及应用

论文摘要

为建立快速、灵敏且可定量检测氟苯尼考耐药基因floR的环介导等温扩增方法(LAMP),根据GenBank登录的革兰阴性菌floR基因保守序列,利用PrimerExploerV4设计特异性LAMP引物,成功建立了快速检测氟苯尼考耐药floR基因的LAMP方法。该LAMP检测方法反应温度为63℃,反应时间为60 min,具有可实时监测反应、定量检测出floR基因的拷贝数,以及操作简便的特点,灵敏度高,检测限为6.24×10~0拷贝,是普通PCR的100倍。用建立的方法检测对氟苯尼考不同敏感性的大肠埃希菌floR基因,结果显示,对氟苯尼考敏感、中介和耐药的菌株均检测到floR基因,其拷贝数与菌株MIC相关,提示floR基因不仅存在于氟苯尼考耐药菌中。所建立的floR基因LAMP检测方法可为floR基因的监测,以及氟苯尼考耐药性产生和传播机制的研究提供新的技术手段。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 试验菌株
•     1.1.2 主要试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 最小抑菌浓度 （MIC） 测定
•     1.2.2 模板制备
•     1.2.3 floR基因的PCR检测
•     1.2.4 构建floR基因重组质粒
•     1.2.5 LAMP引物设计与合成
•     1.2.6 LAMP检测方法的建立
•     1.2.7 LAMP检测方法的引物筛选
•     1.2.8 LAMP检测方法的敏感性
•     1.2.9 floR基因的LAMP定量检测
•     1.2.10 荧光可视化检测
•     1.2.11 LAMP检测方法的重复性
•     1.2.12 LAMP检测方法的初步应用
• 2 结果
•   2.1 猪源致病性大肠埃希菌对氟苯尼考的MIC
•   2.2 LAMP引物筛选
•   2.3 LAMP检测方法的敏感性检测
•   2.4 floR基因定量标准曲线的绘制
•   2.5 LAMP检测方法的荧光可视化检测
•   2.6 LAMP检测方法的初步应用
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 冯世文,李军,潘艳,彭昊,贺会利,钟舒红,胡帅,曾芸

关键词: 氟苯尼考耐药基因,环介导等温扩增,建立和应用

来源: 动物医学进展 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 广西兽医研究所,广西兽医生物技术重点实验室,广西大学动物科学技术学院

基金: 广西科技重大专项项目(桂科AA17204057),广西自然科学基金项目(桂科自2013GXNSFAA019093)

分类号: S852.61

DOI: 10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.08.002

页码: 24-28

总页数: 5

文件大小: 1333K

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