犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因的原核表达

论文摘要

犬细小病毒病是由犬细小病毒（canine parvovirus,CPV）引起犬的一种高度接触性的烈性传染病,临床上主要表现为肠炎型和心肌炎型。该病广泛分布于世界各地,近年来,病发率呈现逐年上升的趋势,给养犬业带来了极大经济损失。VP2蛋白是CPV的主要结构蛋白,也是CPV的主要抗原决定簇。本研究从1只患有犬细小病毒病的病犬粪便中分离出1株CPV,对其进行鉴定和VP2基因的原核表达。根据GenBank公布的CPV基因序列设计1对用于鉴定CPV引物,目的片段大小为1755 bp;参考文献设计鉴别犬冠状病毒（CCV）、犬瘟热病毒（CDV）、犬副流感病毒（CPIV）的引物用于检测患病犬是否感染其他病毒;通过免疫荧光试验测定其半数细胞感染数量（TCID50）。结果显示用于鉴定CPV的引物扩增出的基因片段与预期大小相符;将目的基因与GenBank中收录的CPV-VP2基因进行遗传性与进化性分析,表明此基因与新CPV-2a型毒株GQ379042.1同源性最高,由此确定该株分离病毒为CPV,且为新2a亚型;其他病毒检测结果表明CCV、CDV、CPIV均为阴性;盲传5代时其TCID50为104.0/mL。将该株病毒的VP2基因连接至原核表达载体pET-32a,得到的重组表达质粒pET-32a-VP2,将鉴定正确的原核重组表达载体pET-32a-VP2转化至感受态细胞E.coli BL21（DE3）进行诱导表达。结果表明:目的蛋白的表达形式为包涵体沉淀,大小约为87kDa;对诱导条件进行摸索,当IPTG浓度为1 mM、诱导时间为4h、诱导温度为32℃时,蛋白的表达量最大;经Western blot鉴定,证明表达出的VP2蛋白具有反应原性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩略词表
• 第一章 文献综述
•   1.1 犬细小病毒概述
•   1.2 CPV的VP2蛋白研究概述
•   1.3 CPV的致病机理与及临床特征
•   1.4 犬细小病毒病的诊断方法
•   1.5 犬细小病毒病的防治概述
•   1.6 研究目的及意义
• 第二章 犬细小病毒的分离与鉴定
•   2.1 材料
•   2.2 方法
•   2.3 结果
•   2.4 讨论
•   2.5 小结
• 第三章 犬细小病毒VP2蛋白的表达
•   3.1 材料
•   3.2 方法
•   3.3 结果
•   3.4 讨论
•   3.5 小结
• 第四章 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 个人简介

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 孙鑫鹏

导师: 许立华,印春生

关键词: 犬细小病毒,基因,鉴定,原核表达

来源: 宁夏大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 宁夏大学

基金: 十三五国家重点研发计划项目(2016YFD0501004)

分类号: S852.65

DOI: 10.27257/d.cnki.gnxhc.2019.000902

总页数: 42

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