人叉头转录因子O亚型6真核表达载体的构建及其对胶质瘤细胞存活的影响

论文摘要

构建人叉头转录因子O亚型6（forkhead box class O6, FOXO6）基因的真核表达载体,并探究FOXO6对胶质瘤细胞存活的影响。以人神经胶质瘤细胞U251的c DNA为模板,利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）方法扩增FOXO6基因片段,并将其与pRK5-myc载体连接,构建pRK5-myc-FOXO6重组质粒;将构建成功的重组质粒和空载体分别转染至U251细胞中进行表达,通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qPCR）和4’,6-二脒基-2-苯基吲哚（4’, 6-diamidino-2-phenylindole, DAPI）染色法分别检测FOXO6对U251细胞中转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α, PGC-1α）转录水平的影响及其对U251细胞存活的影响。经双酶切鉴定及DNA测序表明:pRK5-myc-FOXO6重组质粒构建成功;FOXO6转染组中的PGC-1α转录水平出现了明显的下降,并出现了明显的细胞凋亡现象。上述结果显示,pRK5-myc-FOXO6重组质粒构建成功,体外实验暗示FOXO6可能通过抑制PGC-1α的表达来抑制U251细胞的能量代谢及抗氧化过程,进而诱导U251细胞的凋亡,这为后续深入研究FOXO6在胶质瘤上的作用机制和靶点奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 实验材料
•   1.2 实验试剂
•   1.3 FOXO6片段的扩增
•     1.3.1 引物设计
•     1.3.2 FOXO6片段的扩增
•   1.4 pRK5-myc-FOXO6重组质粒的构建与测序
•   1.5 U251细胞的转染
•   1.6 蛋白表达的蛋白质印迹法（Western blotting）检测
•   1.7 U251细胞凋亡情况的检测
•     1.7.1 细胞爬片
•     1.7.2 4’,6-二脒基-2-苯基吲哚染色
•   1.8 过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1 α（peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1 α,PGC-1 α）表达的检测
•   1.9 结果统计与分析
• 2 结果与分析
•   2.1 FOXO6片段扩增产物的鉴定
•   2.2 重组表达质粒的鉴定
•   2.3 pRK5-myc-FOXO6在U251细胞中表达的蛋白质印迹法检测
•   2.4 U251细胞凋亡情况的检测
•   2.5 PGC-1α表达情况的qPCR检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 龚小霞,李超,曹曦月,杨诚诚,黄超

关键词: 人叉头转录因子亚型,胶质瘤

来源: 浙江大学学报(农业与生命科学版) 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室

基金: 国家自然科学基金(31501200)

分类号: Q78

页码: 619-625

总页数: 7

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