刺参体壁胰/类胰丝氨酸蛋白酶的性质及其在自溶中的作用

论文摘要

以刺参体壁中丝氨酸蛋白酶为研究对象,对其部分酶学性质及其与刺参自溶的关系进行研究。采用TrisHCl缓冲溶液提取、硫酸铵盐析、透析及超滤获得刺参体壁粗酶液。结果显示,以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物时,粗酶液的丝氨酸蛋白酶活力最高;以其为底物,测得该类蛋白酶在pH值为6.2和8.5时呈现较强酶活力峰值,两者最适温度范围均为50～55℃;Cu2+、Fe3+、Pb2+、Zn2+强烈抑制该酶的活性,Ca2+可提高该酶活力;邻菲咯啉、乙二胺四乙酸以及半胱氨酸修饰剂均能够部分抑制该酶活力。4-（2-氨乙基）苯磺酰氟盐酸盐、苯甲基磺酰氟、Na-对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基酮、（3S）-7-氨基-1-氯-3-磺酰氨基-2-庚酮盐酸盐、大豆胰蛋白酶抑制剂能够显著抑制蛋白酶的活力以及自溶过程中可溶性蛋白、三氯乙酸可溶性多肽的生成。上述结果表明,刺参体壁中存在至少2种具有一定的金属离子依赖性的胰/类胰丝氨酸蛋白酶,其活性中心或底物识别位点可能有半胱氨酸的参与,该类蛋白酶很可能参与刺参自溶过程中蛋白质的降解。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 刺身体壁粗酶液的制备
•     1.3.2 底物特异性测定
•     1.3.3 丝氨酸蛋白酶活力测定
•     1.3.4 最适pH值、温度及热稳定性的测定
•     1.3.5 金属离子对丝氨酸蛋白酶的影响
•     1.3.6 抑制剂对丝氨酸蛋白酶的影响
•     1.3.7 丝氨酸蛋白酶对刺参自溶的影响
•   1.4 数据处理
• 2结果与分析
•   2.1底物特异性
•   2.2 最适pH值、温度及热稳定性分析
•   2.3 金属离子对丝氨酸蛋白酶活力的影响
•   2.4 抑制剂对丝氨酸蛋白酶活性的影响
•   2.5 自溶过程中可溶性蛋白的变化
•   2.6 自溶过程中TCA可溶性寡肽的变化
•   2.7 自溶过程中丝氨酸蛋白酶活力的变化
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 徐锦华,孟泽玲,葛诗琪,薛鹏,张公亮,侯红漫,孙黎明

关键词: 刺参,类胰丝氨酸蛋白酶,酶学特性,自溶

来源: 食品科学 2019年18期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 大连工业大学食品学院,国家海洋食品工程技术研究中心

基金: 国家自然科学基金青年科学基金项目（31201300）,辽宁省优秀人才项目（LJQ2012048）

分类号: TS254.1

页码: 95-100

总页数: 6

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