论文摘要
目的:构建小鼠胚胎干细胞（mouse embryonic stem cells,mESCs）定向心肌细胞分化的模型,探索敲降PHC1蛋白对mESCs定向心肌细胞分化的影响。方法:利用shRNA在mESCs中敲降PHC1蛋白,通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测PHC1、多能干性（nanog、sox2、oct4）及三胚层分化基因的表达;蛋白印迹法（Western-Blot,WB）检测PHC1蛋白的表达;免疫荧光染色分析PHC1、nanog蛋白的表达;采用悬滴法（Hanging Drop methods）,1%二甲基亚砜（Dimethyl sulfoxide,DMSO）对mESCs进行定向心肌细胞诱导分化,在分化过程中的不同时期、不同阶段采用qRT-PCR检测心肌细胞特异性基因NKX2.5、β-MHC、cTnT、MEF2C、gata4等的表达,Western-Blot、免疫荧光染色检测cTnT表达。结果:1:敲降PHC1蛋白对mESCs多能干性的影响。成功构建PHC1 shRNA,并感染至mESCs中,Western-Blot检测结果示实验组（shPHC1组）PHC1蛋白表达较对照组明显下调;qRT-PCR检测结果示:与对照组（control、Empty vector）相比较,实验组（shPHC1组）中PHC1与多能干性基因（nanog、sox2、oct4）均出现明显下调,且以nanog下调最显著,中胚层相关基因Brachyury、flk1、tbx3明显上调;免疫荧光染色检测结果提示:实验组（shPHC1组）中PHC1蛋白敲降的mESCs中nanog蛋白明显下调,且具有下调共定位现象;细胞表型:实验组（shPHC1组）mESCs细胞边缘变的锐利,形态变的不规则,出现明显分化,而对照组无明显分化。2:敲降PHC1蛋白对mESCs定向心肌细胞分化的影响。实验组（shPHC1组）在心肌细胞定向分化过程中,心肌细胞特异性基因NKX2.5、β-MHC、cTnT、MEF2C、gata4表达上调,且出现跳动的拟胚体（Beating Embryonic body,EB）比率、心肌细胞特异蛋白（cTnT）均高于对照组（P<0.05）。结论:1.敲降PHC1蛋白促进了mESCs向中胚层分化。2.敲降PHC1蛋白促进了mESCs定向心肌细胞分化并提高了分化效率。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 文欢
导师: 曾建平
关键词: 多梳家族蛋白,小鼠胚胎干细胞,定向心肌细胞分化
来源: 南华大学
年度: 2019
分类: 基础科学,医药卫生科技
专业: 生物学,基础医学
单位: 南华大学
分类号: R329.2
DOI: 10.27234/d.cnki.gnhuu.2019.000972
总页数: 67
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标签：多梳家族蛋白论文; 小鼠胚胎干细胞论文; 定向心肌细胞分化论文;